1、实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml) 组份浓度 100 mg/ml Ampicillin 配制量 50 ml 配制方法 1. 称量 5 g Ampicillin 置于 50 ml 离心管中； 2. 加入 40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml； 3. 用 0.22 m 过滤膜过滤除菌； 4. 小份分装 (1 ml/份) 后，-20 保存。 IPTG(异丙基 - -D-硫代半乳糖苷) (24 mg/ml) 组份浓度 24 mg/mL IPTG 配制量 50 mL 配制方法 1. 称 1.2 g IPTG 置于 50 ml 离心管中；
2、 2. 加入 40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml； 3. 用 0 22 m 过滤膜过滤除菌； 4. 小份分装 (1 ml 份) 后，-20 保存。 X-Gal (20 mg/ml) 组份浓度 20 mg/ml X-Gal 配制量 50 ml 配制方法 1. 称量 l g X-Gal 置于 50 ml 离心管中； 2. 加入 40 ml DMF(二甲基甲酰胺) ，充分混合溶解后，定容至 50 ml； 3. 小份分装 (1 ml/份) 后，-20 避光保存。 LB 培养基 组份浓度 1%(W/V)Tryptone( 胰蛋白胨)， 0.5%(W/V)Yeast Extract(酵
3、母提取物) ，1%(W/V)NaCl 配制量 1 L 配制方法 1. 称取下列试剂，置于 l L 烧杯中； Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解； 3. 滴加 5 N NaOH(约 0.2 m1)，调节 pH 值至 7.0； 4. 加去离子水将培养基定容至 1 L； 5. 高温高压灭菌后，4 。 C 保存。 LB/Amp 培养基 组份浓度 1%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W/V) NaCl 0.1 mg/ml Ampicillin 配制量
4、1 L 配制方法 1. 称取下列试剂，置于 l L 烧杯中； Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解； 3. 滴加 5 N NaOH(约 0.2 mL)。调节 pH 值至 7.0； 4. 加去离子水将培养基定容至 1 L； 5. 高温高压灭菌后，冷却至室温； 6. 加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均匀混合； 7. 4保存。 TB 培养基 组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone 2.4%(W/V) Yeast Extract 0.4%(V/V) Glycerol
5、17mM KH2PO4 72mM K2HPOa 配制量 1.L 配制方法 1. 配制磷酸盐缓；中液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml； 溶解 2.31 g KH2PO4和l2.54 g K2HPO4于 90 ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌； 2. 称取下列试剂，置于 l L 烧杯中； Tryptone 12 g Yeast Extract 24 g Glycerol 4 m 3. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解； 4. 加去离子水将培养基定容至 1 L 后，高温高压灭菌； 5. 待溶液冷却至 60以
6、下时，；加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液； 6. 4保存。 TB/Amp 培养基 组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone 2.4%(W/V) Yeast Extract 0.4%(V/V) Glycerol 17 mM KH2PO472 mM K2HPO40.1 mg/ml Ampicillin 配制量 1 L 配制方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml； 溶解 2.31 g KH2PO4,和 12.54g K2HPO4于 90 ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌； 2. 称取
7、下列试剂，置于 l L 烧杯中； Tryptone 12 g Yeast Extract 24 g Glycerol 4 ml 3. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解； 4. 加去离子水将培养基定容至 l L 后，高温高压灭菌； 5. 待溶液冷却至 60以下时， 加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液； 6. 均匀混合后 4保存。 SOB 培养基 组份浓度 2%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 0.05%(W/V) NaCl 2.5mM KCl 10 mM MgCl2配制量 1 L 配制方法 1. 配制 250 mM KCl 溶液；
8、 在 90 ml 的去离子水中溶解 l.86 g KCl 后，定容至 100 ml。 2. 配制 2 M MgCl2溶液； 在 90 ml去离子水中溶解 19 g MgCl2后，定容至 100 ml，高温高压灭菌。 3. 称取下列试剂，置于 l L 烧杯中； Tryptone 20 g Yeast Extract 5 g NaCl 0.5 g 4. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解； 5. 量取 10 m1 250 mM KCl 溶液，加入到烧杯中； 6. 滴加 5 N NaOH 溶液( 约 0.2 m1)，调节 pH 值至 7.0； 7. 加入去离子水将培养基定容至 l L；
9、8. 高温高压灭菌后，4 保存； 9. 使用前加入 5 ml灭菌的 2 M MgCl2溶液。 SOC 培养基 组份浓度 2%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 0.05%(W/V) NaCl 2.5 mM KCl 10 mM MgCl220 mM Glucose 配制量 100 mL 配制方法 1. 配制 l M Glucose 溶液； 将 18 g Glucose 溶于 90 ml 去离子水中，充分溶解后定容至 100 ml。用 0.22 m滤膜过滤除菌； 2. 向 l 00 ml SOB 培养基中加入除菌的 1 M Glucose 溶液 2 ml，
10、均匀混合； 3. 4保存。 2 YT 培养基 组份浓度 1.6%(WV)Tryptone，1%(W/V)Yeast Extract ，0.5%(W/V)NaCl 配制量 1 L 配制方法 1. 称取下列试剂，置于 l L 烧杯中； Tryptone 16 g Yeast Extract 10 g NaCl 5 g 2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解； 3. 滴加 5 N NaOH，调节 pH 值至 7.0； 4. 加去离子水将培养基定容至 1 L； 5. 高温高压灭菌后，4 保存。 bbroth 组份浓度 2%(W/V)Tryptone， 0.5%(W/V)Yeast Ext
11、ract， o 5%(W/V)MgSO47H2O 配制量 1 L 配制方法 1. 称取下列试剂，置于 l L 烧杯中； Tryptone 20 g Yeast Extract 5 g MgSO47H2O 5 g 2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解； 3. 滴加 1 N KOH。调节 pH 值至 7.5； 4. 加去离子水将培养基定容至 1 L； 5. 高温高压灭菌后，4 保存。 NZCYM 培养基 组份浓度 0.5%(WV) Yeast Extract 0.1%(WV) Casamino Acid（酪蛋白氨基酸） 1%(WV) NZ 胺 0.5%(WV) NaCl 0.2%(
12、WV) MgSO47HO配制量 1 L 配制方法 1. 称取下列试剂。置于 l L 烧杯中； Yeast Extract 5 g Casamino Acid 1 g NZ 胺 10 g NaCl 5 g MgSO47HO 2 g 2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解； 3. 滴加 5 N NaOH(约 0.2 m1)，调节 pH 值至 7.0； 4. 加去离子水将培养基定容至 1 L； 5. 高温高压灭菌后，4 保存。 NZYM 培养基 组份浓度 0.5%(WV) Yeast Extract 1%(WV) NZ 胺 0.1%(WV) NaCl 0.2%(WV) MgSO47HO
13、配制方法 NZYM 培养基除不含 Casamino Acid 外，其他成份与 NZCYM 培养基相同。 NZM 培养基 组份浓度 1%(WV) NZ 胺 0.1%(WV) NaCl 0.2%(WV) MgSO47HO配制方法 NZM 培养基除不含 Yeast Extract(酵母提取物) 外，其他成份与 NZYM 培养基相同。 一般固体培养基的配制 配制方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种； Agar(琼脂；铺制平板用) 15 g/L Agar(琼脂；配制顶层琼脂用) 7 g/L Agarose(琼脂糖；铺制平板用) 15 g/L Agaros
14、e(琼脂糖；配制顶层琼脂用) 7 g/L 2. 高温高压灭菌后，戴上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀( 此时培养基温度很高，小心烫伤) ； 3. 待培养基冷却至 5060时，加入热不稳定物质( 如抗生素等) ，摇动容器充分混匀； 4. 铺制平板 (3035 ml 培养基/90 mm 培养皿) 。 LB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培养基 组份浓度 1%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W/V) NaCl 0.1 mg/ml Ampicillin 0.024mg/ml IPTG 0.04 mg/ml X-GaL 1.5%(W/
15、V) Agar 配制量 1 L 配制方法 1. 称取下列试剂，置于 l L 烧杯中； Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解； 3. 滴加 5 N NaOH(约 0.2 mL)，调节 pH 值至 7.0； 4. 加去离子水将培养基定容至 1 L 后，加入 15 g Agar； 5. 高温高压灭菌后，冷却至 60左右； 6. 加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml)、1 ml IPTG(24 mg/ml) 、 2 ml X-Gal(20 mg/mL)后均匀混合； 7. 铺制平板 (
16、3035 ml 培养基/90 mm 培养皿) ； 8. 4避光保存。 TB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培养基 组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone 2.4%(W/V) Yeast Extract 0.4%(V/V) Glycerol 17 mM KH2PO472 mM K2HPO40.1 mg/ml Ampicillin 0.024 mg/ml IPTG 0.04mg/mL X-GaL 1.5%(W/V) Agar 配制量 1 L 配制方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)100 ml； 溶解 2.31 g KH2PO4和 12
17、.54 g K2HPO4于 90 ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌。 2. 称取下列试剂，置于 l L 烧杯中； Tryptone 12 g Yeast Extract 24 g Glycerol 4 ml 3. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解； 4. 加去离子水将培养基定容至 1 L 后。加入 l 5 g Agar； 5. 高温高压灭菌后，冷却至 60左右； 6. 加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液、l ml Ampicillin (100mg/ml) 、1 ml IPTG(24mg/mL)、2 ml X-Gal(20 mg/ml) 后均匀混合； 7. 铺制平板 (3035 ml 培养基/90 mm 培养皿) ； 8. 4避光保存。
