1、42 实用临霉医药零志 2011年第15卷第13期 Journal of Clinical Medicine in Practice 一。 一 人胚胎移植后剩余胚胎继续体外培养潜能的研究 薛侠，赵皖秋，张四林，秦臻，师娟子 (陕西省妇幼保健院生殖中心，陕西西安，710003) 摘 要：目的 探讨IvF新鲜周期中D3可用胚胎移植和冷冻后剩余胚胎继续培养的价值。方法 通过囊胚序贯培养法 将无原核(0PN)、单个原核(1PN)、多个原核(3PN)和卵裂期发育延缓的2原核(2PN)废弃胚胎培养至囊胚期。结果 314枚剩余胚胎于D5-D7形成152枚囊胚(4841)，其中53枚为优质囊胚(3487)；胚
2、胎级别越高，囊胚形成率越高 (5439、5239、4961和2162)；0PN和1PN卵裂发育而来的D3优质胚胎、2PN卵裂发育来的D3评分为级的 胚胎囊胚形成率高于2PN卵裂发育来的D3评分级的囊胚形成率(Pl0细胞，卵裂球稍不均， 碎片10-20，透明带完整；III级：D3胚胎 45细胞；卵裂球稍不均，碎片2050，透 明带完整；lV级：碎片50，卵裂球不均；F级： 无明显卵裂球存在，观察到大量无核碎片。本中 心规定I级、级和级胚胎为可用胚胎；其中I 级和级胚胎为优质胚胎。 122囊胚培养及囊胚的评分：将胚胎转移至预 先平衡好的囊胚培养液微滴中培养至第57天， 观察胚胎发育情况并记录。按G
3、ardner分级对囊 胚评分_4，先根据囊胚的扩张和孵出程度将囊胚 分成16级：1级，早期囊胚，囊腔小于胚胎体积 的12；2级，囊胚腔超过胚胎体积的一半；3级， 完全囊胚，囊腔充满整个胚胎；4级，扩张期囊 胚，囊腔扩张，直径大于最初的胚胎直径，透明带 变薄；5级，正孵出的囊胚：胚胎正从透明带中孵 出；6级，已孵出的囊胚：囊胚完全从透明带中孵 出。根据以下标准评价内细胞团(ICM)和滋养外 胚层细胞(TE)的发育。ICM评分：A级，细胞数 目多，结合紧密；B级，细胞数目较少，结合较松 散；C级，细胞数目极少。TE评分：A级，细胞 数目多，囊胚四周均有细胞分布；B级，细胞数 目较少，上皮细胞较松散
4、；C级，细胞数目极少。 将D5评分3AA、3AB、3BA、3BB或第67天评 分4AA、4AB、4BA、4BB的囊胚定为优质囊胚。 123评价指标：生化妊娠为胚胎移植后2周尿 HCG(+)，临床妊娠为孕5周B超见孕囊。主要 观察指标：观察囊胚培养形成情况。 2结果 21不同来源胚胎的囊胚形成情况 本实验共收集到61例患者的314个废弃胚 胎，经序贯培养，形成152个囊胚，囊胚形成率 4841；其中优质囊胚53个，占所有囊胚的 3487。来源于0PN、1PN的优质胚胎和2PN 级的胚胎囊胚形成率较高(5439、5294和 4961)(PIII级胚胎较低(21 62)。结果见表1。 表1不同来源胚
5、胎的囊胚形成情况 胚胎质量 胚胎数量囊胚形成率()，(形成囊胚数胚胎数) 注：与2PN1H级胚胎相比， P005。 22妊娠组和未妊娠组囊胚形成的结果 妊娠组囊胚形成率、优质囊胚率稍高。但剩 余胚胎在妊娠组和未妊娠组中囊胚形成与优质囊 胚均没有明显的差异(P005)。 表2妊娠组和未妊娠组囊胚形成的结果 3讨论 在体外受精一胚胎移植(IVFET)治疗中， 44 实用临床医药杂志 第15卷 大多数中心选择级和级以下的胚胎冷冻，将 异常受精来源的和低于冷冻标准的胚胎废弃。 原核数目异常受精卵包括单原核受精卵 (IPN)、无原核受精卵(0PN)和多原核受精卵。 多原核受精卵已经被大家公认为非整倍体率
6、高而 丢弃。而在0PN中，有研究显示将近1有两个 极体的受精卵观察不到原核，观察不到原核可能 的原因是原核被胞浆中的颗粒所掩盖，或者是原 核形成过快或过慢，错过了观察的时间。这些 OPN受精卵有57是正常的二倍体，30是多 倍体或嵌合体，13是非整倍体_5j。当没有足够 的正常二倍体胚胎移植时，可以考虑移植无原核 受精卵发育而来的胚胎。 而1PN形成的原因主要包括孤雌生殖、雌雄 原核融合及原核形成不同步。研究表明46 80的1PN胚胎的核型为二倍体，虽然1PN发 育而来的胚胎囊胚形成率极低，许多人认为移植 1PN受精卵发育而来的胚胎没有临床意义，但是 鉴于IVF后1PN受精卵来源的胚胎中约48
7、7 为正常的二倍体_6_6，有人仍然认为1PN发育来 的胚胎有一定的移植价值。 Blake和Kim等认为囊胚形成在形态上经历 了细胞融合、囊胚腔出现及囊胚腔扩张的变化，基 因调控上经历了由母型调节向胚胎型调节的转 化l 。发育潜能差及染色体异常的胚胎在未 发育至囊胚时即发育停止，只有质量好的胚胎才 能发育至囊胚期l9_9。 我们的研究结果显示：0PN和1PN卵裂发 育而来的133优质胚胎、2PN卵裂发育来的D3评 分为级的胚胎囊胚形成率较高(5439、52 94和4961)，2PN中第3天胚胎级别大于 级的胚胎囊胚形成率较低(2162)，这表明 在剩余胚胎中，0PN和1PN卵裂发育而来的D3
8、的优质胚胎也有较好的发育潜能。而囊胚形成意 味着胚胎发育潜能更强一些。可以通过胚胎植人 前遗传学诊断(PGD)以及产前诊断技术行胚胎染 色体筛查。为没有正常胚胎移植的患者提供怀孕 的机会。或者患者妊娠后，其余胚胎用于干细胞 研究。 Neuber等研究表明，D3卯裂球数7个的 优质胚胎更容易发育成优质囊胚，质量差的胚胎 很难发育成优质囊胚ll 。与我们的研究结果基 本一致。也与国内温烯等11j研究报道致，胚胎 级别越低，囊胚形成率越低。 SussTobyE他与Neta等 0报道收集单原 核和多原核的胚胎进行培养，获得了胚胎干细胞 系，不仅具有典型的干细胞表面标记物，而且具有 正常核型。Heins
9、等 1 j收集单原核和多原核胚 胎，分离了7株干细胞系。本研究中，0PN和 1PN胚胎共计148枚培养后80枚形成囊胚。因 此临床上异常受精的优质胚胎，可以成为胚胎干 细胞的来源。 有研究也表明，剩余胚胎形成囊胚对于妊娠 的预测有积极的作用l15。根据现有样本数量研 究发现，妊娠组囊胚的形成率稍高于未妊娠组，尤 其是优质囊胚形成情况，但统计没有明显差异。 考虑由于样本量太小，还需要下一步继续关注研 究。 结果显示级以上胚胎仍有20形成囊胚， 所以在废弃胚胎前，宜先考虑将胚胎培养至囊胚 期，如未形成囊胚再行废弃。对于D3移植后，剩 余可用胚胎数量多的患者，可以先冻存一部分优 质胚胎，将剩余胚胎继
10、续培养，这样不仅可以保证 患者的妊娠率，而且减少冻存胚胎的管数，减轻患 者经济负担，提高患者的累积妊娠率。 参考文献 1Lopez Tenon M，Serra O，Olivares R，et a1Delivery Of a healthy baby following the transfer of embryos cryopreserved f0r 13 yearsJReprod Biomed Online，2006，13(6)： 821 2Hoffman D I，Zelml arl G L，Fair C C，et a1Cryopresearved embryos in the United
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