1、威格拉斯生物技术（北京）有限公司 ROS荧光探针-DHE (ROS Fluorescent Probe-DHE) 产品说明： 活性氧族物质(Reactive Oxygen Species, ROS) 是细胞线粒体氧化呼吸中产生的自由基活性的物质，参与细胞多种生理和病理形成机制。本 ROS荧光探针二氢乙啶(Dihydroethidium, DHE)，可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的ROS 氧化，形成氧化乙啶；氧化乙啶可掺入染色体 DNA中，产生红色荧光。根据活细胞中红色荧光的产生，可以判断细胞ROS 含量的多少和变化。二氢乙啶在细胞内主要被超氧阴离子型ROS 氧化，用流式细胞仪或荧光显
2、微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS 经典检测方法。 产品内容与储存方法： 名称 数量 保存条件 ROS Fluorescent Probe-DHE 0.2/1 ml-20 试剂为 二氢乙啶 5 mM的 DMSO溶液，含有化学稳定剂。低温运输， -20避光保存。有效期6 个月。 操作方法： 染色方法： 1) 探针溶液可在新鲜培养液、缓冲盐溶液或组织灌流液中稀释到所需浓度，以此染色液更换细胞培养液或灌流液；也可直接向细胞孵育液体或灌流液中加入探针溶液至所需浓度。 2) 依据细胞 ROS含量的不同， 二氢乙啶 终浓度可选择在 1 M100M的范围，孵育时间可选择 1090 mi
3、n。孵育可在 37或室温进行，要求避光。 3) 孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞或组织。 荧光显微照相操作方法： 1) 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50l细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。 2) 荧光显微镜下，用蓝光或绿光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像， ROS阳性细胞在整个核区被染成红色；用紫外光激发时，胞浆中未氧化的 二氢乙啶 可发出蓝色荧光。 流式细胞分析操作方法： 1) 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.51 ml 冰冷PBS重悬细胞（ 510万）。 2) 采用 480535 nm
4、波长激发，测定 590 nm610 nm以上的发射，细胞应可分成两个亚群：ROS 阴性细胞仅有很低的荧光强度， ROS阳性细胞有较强的红色荧光。 注意事项： 电话：（010）58941231, （010）58941232 传真：（010）58941232 网址： 电子邮件： 威格拉斯生物技术（北京）有限公司 1) 二氢乙啶在光照和空气中易被氧化，注意避光保存。 2) 该试剂可用于体外培养活细胞、培养或灌流组织及组织冰冻切片的检测。 3) 对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察ROS 的变化。 电话：（010）58941231, （010）58941232 传真：（010）58941232 网址： 电子邮件：
