1、浙 江 大 学 学 报!农 业 与 生 命 科 学 版“ #$!%“7?ABCDEAFGHBAC“收 稿 日 期4GGmcJcGm557?菌 悬 液!用7号注 射 针 头 注 射 烟 草 叶 片!同 时 用 无 菌 水 注 射 作为 对 照!各 接 种69处!在6A下 培 养7+8“$%5%. /诸 暨 黑 李0的 回 接 试 验 将 烟 草 过敏 反 应 产 生 枯 斑 的 菌 株 培 养678!用 无 菌 水 稀释 成#9+*;?!用 注 射 接 种 的 方 法 在B月 底对/诸 暨 黑 李0进 行 叶 片-枝 条 和 果 实 交 叉 接种173!将 病 株 叶 片-枝 条 和 果 实 上
2、 分 离 的 致 病 菌同 时 回 接 到 诸 暨 黑 李 的 叶 片-枝 条 和 果 实 上“接种 的 叶 片 选 新 枝 叶 片!套 塑 料 袋 保 湿4枝 条 选 新枝 离 枝 梢CB节 处134果 实 选 大 一 点 的“同 时以 无 菌 水 处 理 作 对 照!每 一 处 理 各 接 种69处!#2D后 观 察 并 从 发 病 各 部 位 再 分 离 病 原 菌“$%5%5桃 树 叶 面 接 种 用 病 原 菌 接 种 毛 桃和 山 桃 叶 片!方 法 同 诸 暨 黑 李 叶 片 接 种!并 以 无菌 水 处 理 作 对 照“173$%E病 原 菌 鉴 定$%E%$菌 体 形 态 在
3、)F培 养 基123上 对 分离 菌 株 进 行 固 体 和 液 体 培 养!并 通 过 革 兰 氏 染色-鞭 毛 染 色西 萨G基 尔 染 色 法(-芽 孢 染 色-聚GHG羟 丁 酸 染 色 等 对 菌 体 进 行 观 察“$%E%.生 理 生 化 测 定 测 试 项 目 与 方 法 见文 献“12!BC+36结 果.%$病 原 菌 分 离 纯 化 从/诸 暨 黑 李0病 株获 得 的 样 品 在 真 菌 培 养 基 上 培 养7CD后!未见 有 霉 菌 生 长!而 在 细 菌 培 养 基 上 培 养7D后却 有 菌 体 生 长!并 且 取 自 病 株 枝-叶-果 的 样 品在 细 菌 培
4、 养 基 上 培 养 后 都 长 有 一 种 形 态 非 常 相似 的 菌 落!其 直 径6C7!光 滑!粘 性 透 明!中 间 隆 起!黄 色!似 脓 液“该 菌 落 在 各 平 板 上 都呈 优 势!分 别 挑 取 单 菌 落!用 划 线 法 多 次 纯 化!分 别 获 得 来 自 病 株 枝-叶-果 的 纯 培 养 菌“.%.致 病 性 测 定.%.%$烟 草 过 敏 性 反 应 分 别 将 来 自 枝-叶-果 的 纯 培 养 菌 接 种 烟 草 叶 片!7+8后 在 烟草 叶 片 上 产 生 直 径 为2*左 右 的 枯 斑!证 明 从病 株 枝-叶-果 分 离 获 得 的 纯 培 养
5、 菌 可 能 是 致病 菌“图$ IJ接 种 正 常 的/诸 暨 黑 李0叶 片 后 的 症 状KLM%# NOPQRSRTQ8U/V80YUZUSZ*LTZQUDLQ8_.%.%. /诸 暨 黑 李0交 叉 接 种 和 再 分 离 分别 将 枝-叶-果 的 纯 培 养 菌 株 交 叉 接 种 于 正 常 的/诸 暨 黑 李0新 枝 叶 片-嫩 枝 枝 梢 和 果 实 上!#2D后 果 树 的 叶 片 出 现 直 径 为9%C的 穿 孔!孔 的 边 缘 不 整 齐图#(4枝 条 接 种 部 位 横 向 膨大!黑 变 或 褐 变!呈 水 渍 状!并 产 生 龟 裂4果 实 形成 近 圆 形-暗
6、紫 色-具 水 渍 状 边 缘-中 间 稍 凹 陷-表 面 硬 化-粗 糙!有 不 规 则 裂 缝 的 病 斑图6(“这 些 特 征 都 和 田 间 自 然 发 病 的 症 状 类 似“而 无菌 水 对 照 组 却 没 有 出 现 相 应 症 状!表 明 枝-叶-果 的 纯 培 养 菌 是 同 一 种 菌!故 将 菌 株 命 名为_“BB浙 江 大 学 学 报农 业 与 生 命 科 学 版(第6+卷图! “#接 种 正 常 的$诸 暨 黑 李%果 实 后 的 症 状6/1?:;2:/4A/3BC对 接 种 感 染 发 病 的 各 部 位 重 新 进 行 病 原 菌分 离D获 得 的 菌 株 其
7、 形 态 与 革 兰 氏 染 色 等 都 与BC相 同D说 明BC确 实 是$诸 暨 黑 李%穿 孔 病 的病 原 菌E!)!)F桃 树 叶 面 接 种 将BC菌 株 接 种 毛桃G号H图IJK山 桃H图LJ叶 片 后D出 现 与$诸 暨黑 李%病 株 叶 片 相 似 的 穿 孔 症 状E证 明BC可 以侵 染 桃E图F “#接 种 正 常 毛 桃M号 后 的 新 枝 叶 片 症 状3HN0)GJ94:?41?:;2:/4A/3BC!)F病 原 菌 鉴 定!)F)M菌 体 形 态BC菌 株 在NO琼 脂 平 板上 生 长I后 形 成*PL-的 菌 落D菌 落 光 滑粘 稠D边 缘 整 齐D中
8、间 隆 起 颜 色 略 深D四 周 有 透明 晕 环D具 有 光 泽D同 时 产 生 黄 色 非 水 溶 性色 素E菌 体 短 杆 状D两 端 钝 圆D单 生D大 小 为HQ)IPQ)RJS-THQ)LPQ)UJS-D革 兰 氏 染 色 阴 性D单 根 极 鞭D没 有 芽 孢D不 产 生 聚VWV羟 丁 酸 颗 粒E!)F)!生 理 生 化 性 状 的 确 定BC菌 株 在图X “#接 种 正 常 的 山 桃 新 枝 叶 片 后 的 症 状394:?41?:;2:/4A/3BCNO培 养 基 上 培 养 的 最 适 温 度 为*YP*UZD石蕊 牛 乳 解 朊 不 产 酸D好 氧D最 高 耐
9、盐 度IE下 列 试 验 阳 性柠 檬 酸 钠 试 验K丙 二 酸 钠 试验K乙 醇 氧 化 试 验K葡 萄 糖K蔗 糖K乳 糖K半 乳 糖K阿 拉 伯 糖K甘 露 糖K甘 露 醇K麦 芽 糖K山 梨 糖K海藻 糖K果 糖K棉 子 糖K纤 维 二 糖K山 梨 醇 发 酵 试验K明 胶 液 化K七 叶 灵 水 解 试 验K硫 化 氢 试 验K过氧 化 氢 酶 试 验E下 列 试 验 阴 性赖 氨 酸 脱 羧 酶K酒 石 酸 钾 利用K鼠 李 糖 和 肌 醇 发 酵 试 验K甲 基 红 试 验KB试 验K吲 哚 试 验K硝 酸 盐 还 原K氧 化 酶K淀 粉水 解E根 据BC以 上 形 态K生 理
10、 生 化 特 征 及 寄 主情 况D参 考 有 关 资 料IDLDUPGQ_D可 以 认 定BC为 野油 菜 黄 单 胞 菌 桃 李 变 种Habcdefebaghafijgcklg.?ikmblJD从 而 确 定$诸 暨 黑 李%所患 的 是 细 菌 性 穿 孔 病EI讨 论目 前 国 内 引 进 黑 李 品 种 不 少D主 要 有 黑 琥珀K黑 宝 石D紫 琥 珀K李 王K密 思K沙 特 罗 丝K沙 特哈 特K拉 罗 达K红 美 丽K大 紫 红K威 克 森K凯 瑟 曼K安 皇 后K玫 瑰 皇 后K皇 家 宝 石 等GG_E但 关 于 黑 李穿 孔 病 的 研 究 还 未 见 报 道E而 穿
11、 孔 病 是 李 树 的一 种 极 其 严 重 的 病 害E目 前D绍 兴 地 区 的 新 昌 引进 的 几 个 黑 李 品 种 都 在 遭 受 着 不 同 程 度 的 穿 孔病 危 害D有 些 黑 李 园 甚 至 全 部 被 毁E其 症 状 和 诸暨 黑 李 极 其 相 似EnRY第Y期 尹 军 霞D等$诸 暨 黑 李%穿 孔 病 病 原 菌 的 分 离 和 鉴 定黑 李 穿 孔 病 特 别 是 细 菌 性 穿 孔 病 的 流 行 和果 树 自 身 的 遗 传!树 势 及 气 候 有 关“其 病 原 菌 在被 害 枝 条 和 芽 内“甚 至 在 不 表 现 症 状 的 组 织 内越 冬“因
12、此 在 冬 季 修 剪 时 彻 底 清 除 越 冬 病 原 菌就 显 得 尤 为 重 要“诸 暨 黑 李 细 菌 性 穿 孔 病 治 疗困 难 有 很 大 一 部 分 原 因 就 是 果 农 对 此 环 节 不 够重 视 的 结 果#同 时 还 要 注 意 多 施 复 合 肥 或 有 机!无 机 混 合 肥“使 树 体 强 壮“提 高 抗 病 性#再 结 合用 药“才 能 收 到 良 好 的 效 果$%?68;A赵 秋 茂“刘 权BCDEFG;H9IJKFLMH8N8OM77;9F7“!4fgK89“EFA费 显 伟“王 润 珍BCDEF5OO8HHFOF;NMEFNFM7Q7O;M7NFM7Q7O;M7e7;7;9F7“!4fgK89“EF“s?79E8;“uZzA费 显 伟“王 润 珍“富 新 华“等BC5OO8HHFOFQS;OMFH7;I=F;QlEM3IFQPI8:sH87M;N7MdcMHI$U)CyzZynu(YnA植 物 保 护B“%_|“A%B1%b9%CA7cE7FdFB|rq浙 江 大 学 学 报A农 业 与 生 命 科 学 版B第&|卷
