1、作物生物技术专业毕业论文 精品论文 水杨酸诱导下人参培养物差异表达基因片段的克隆关键词：人参 诱导子 水杨酸 差异表达基因 基因克隆摘要：本实验以 2 年生人参根为外植体，采用 MS+2，4-D(4.0mg/L)培养基中诱导形成愈伤组织，在 MS+2，4-D(2.0mg/L)+BA(2.0mg/L)+IBA(5.0mg/L)+Vc(30mg/L)的培养基质中进行悬浮培养，在细胞悬浮培养物生长的第7d、14d、21d、28d 添加 10-3mg/L 水杨酸，再次证实了在人参细胞的生长对数期添加水杨酸可提高人参细胞培养物中人参皂苷的含量，与对照相比可提高130，而在细胞生长的早期添加水杨酸对细胞培
2、养物中的皂苷含量影响不大。同时本实验观察得到，水杨酸的添加可以延长人参愈伤组织的培养周期，与未添加水杨酸的人参愈伤组织相比，在愈伤组织培养的第 35 天，添加水杨酸的人参愈伤组织仍然处于生长旺盛阶段，而未添加水杨酸的人参愈伤组织进入衰退期。 本实验跟踪了水杨酸添加后过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶三种酶在 72 小时内的变化。结果表明过氧化物酶的活力在 24 小时达到最高峰值，其活性可达到对照的 1.5 倍，随后活性开始下降，72 小时后与对照基本接近。多酚氧化酶的活力在第 18 小时达到最大并且其活力在 72 小时之内高于对照。苯丙氨酸解氨酶的活力在 24 小时后迅速攀升在 48 小时
3、苯丙氨酸解氨酶的活力达到最大峰值，为对照的 1.87 倍。这三种酶活性的提高在一定程度上表征了细胞次级代谢的增强，有利于次生代谢产物的合成和积累。 水杨酸作为诱导子，已在多种药用植物细胞培养中使用，效果显著。但水杨酸作为诱导子诱导植物次生代谢产物合成的作用机制并不十分清楚。本实验首次将 cDNA-RDA 技术应用到药用植物次生代谢的研究中，优化了 cDNA-RDA 技术体系。确定了在添加水杨酸后提取总 RNA 的时间为添加后第 24 小时，置换合成双链 cDNA，合成3 对接头引物，筛选差异片段。经差异显示分析得到一个长为 516bp 的差异表达片段，通过查询国际互联网与 GenBank 库中
4、的核苷酸序列，没有发现该基因的同源序列，因此我们认定这是一差异表达的 cDNA 序列可能来自一条未曾分离的新基因，GenBank 中的注册号为 FE900130。其中差异片段的前 217bp 与己糖激酶有高度的同源性，我们因此推测，该差异片段的功能应与己糖激酶具有一定的相似性。其具体功能还有待进一步研究。正文内容本实验以 2 年生人参根为外植体，采用 MS+2，4-D(4.0mg/L)培养基中诱导形成愈伤组织，在 MS+2，4-D(2.0mg/L)+BA(2.0mg/L)+IBA(5.0mg/L)+Vc(30mg/L)的培养基质中进行悬浮培养，在细胞悬浮培养物生长的第7d、14d、21d、28
5、d 添加 10-3mg/L 水杨酸，再次证实了在人参细胞的生长对数期添加水杨酸可提高人参细胞培养物中人参皂苷的含量，与对照相比可提高130，而在细胞生长的早期添加水杨酸对细胞培养物中的皂苷含量影响不大。同时本实验观察得到，水杨酸的添加可以延长人参愈伤组织的培养周期，与未添加水杨酸的人参愈伤组织相比，在愈伤组织培养的第 35 天，添加水杨酸的人参愈伤组织仍然处于生长旺盛阶段，而未添加水杨酸的人参愈伤组织进入衰退期。 本实验跟踪了水杨酸添加后过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶三种酶在 72 小时内的变化。结果表明过氧化物酶的活力在 24 小时达到最高峰值，其活性可达到对照的 1.5 倍，随后活
6、性开始下降，72 小时后与对照基本接近。多酚氧化酶的活力在第 18 小时达到最大并且其活力在 72 小时之内高于对照。苯丙氨酸解氨酶的活力在 24 小时后迅速攀升在 48 小时苯丙氨酸解氨酶的活力达到最大峰值，为对照的 1.87 倍。这三种酶活性的提高在一定程度上表征了细胞次级代谢的增强，有利于次生代谢产物的合成和积累。 水杨酸作为诱导子，已在多种药用植物细胞培养中使用，效果显著。但水杨酸作为诱导子诱导植物次生代谢产物合成的作用机制并不十分清楚。本实验首次将 cDNA-RDA 技术应用到药用植物次生代谢的研究中，优化了 cDNA-RDA 技术体系。确定了在添加水杨酸后提取总 RNA 的时间为添
7、加后第 24 小时，置换合成双链 cDNA，合成3 对接头引物，筛选差异片段。经差异显示分析得到一个长为 516bp 的差异表达片段，通过查询国际互联网与 GenBank 库中的核苷酸序列，没有发现该基因的同源序列，因此我们认定这是一差异表达的 cDNA 序列可能来自一条未曾分离的新基因，GenBank 中的注册号为 FE900130。其中差异片段的前 217bp 与己糖激酶有高度的同源性，我们因此推测，该差异片段的功能应与己糖激酶具有一定的相似性。其具体功能还有待进一步研究。本实验以 2 年生人参根为外植体，采用 MS+2，4-D(4.0mg/L)培养基中诱导形成愈伤组织，在 MS+2，4-
8、D(2.0mg/L)+BA(2.0mg/L)+IBA(5.0mg/L)+Vc(30mg/L)的培养基质中进行悬浮培养，在细胞悬浮培养物生长的第 7d、14d、21d、28d 添加 10-3mg/L 水杨酸，再次证实了在人参细胞的生长对数期添加水杨酸可提高人参细胞培养物中人参皂苷的含量，与对照相比可提高 130，而在细胞生长的早期添加水杨酸对细胞培养物中的皂苷含量影响不大。同时本实验观察得到，水杨酸的添加可以延长人参愈伤组织的培养周期，与未添加水杨酸的人参愈伤组织相比，在愈伤组织培养的第 35 天，添加水杨酸的人参愈伤组织仍然处于生长旺盛阶段，而未添加水杨酸的人参愈伤组织进入衰退期。 本实验跟踪
9、了水杨酸添加后过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶三种酶在 72 小时内的变化。结果表明过氧化物酶的活力在 24 小时达到最高峰值，其活性可达到对照的1.5 倍，随后活性开始下降，72 小时后与对照基本接近。多酚氧化酶的活力在第 18 小时达到最大并且其活力在 72 小时之内高于对照。苯丙氨酸解氨酶的活力在 24 小时后迅速攀升在 48 小时苯丙氨酸解氨酶的活力达到最大峰值，为对照的 1.87 倍。这三种酶活性的提高在一定程度上表征了细胞次级代谢的增强，有利于次生代谢产物的合成和积累。 水杨酸作为诱导子，已在多种药用植物细胞培养中使用，效果显著。但水杨酸作为诱导子诱导植物次生代谢产物合成的作
10、用机制并不十分清楚。本实验首次将 cDNA-RDA 技术应用到药用植物次生代谢的研究中，优化了 cDNA-RDA 技术体系。确定了在添加水杨酸后提取总 RNA 的时间为添加后第 24 小时，置换合成双链 cDNA，合成 3 对接头引物，筛选差异片段。经差异显示分析得到一个长为 516bp 的差异表达片段，通过查询国际互联网与 GenBank 库中的核苷酸序列，没有发现该基因的同源序列，因此我们认定这是一差异表达的 cDNA 序列可能来自一条未曾分离的新基因，GenBank 中的注册号为 FE900130。其中差异片段的前 217bp 与己糖激酶有高度的同源性，我们因此推测，该差异片段的功能应与
11、己糖激酶具有一定的相似性。其具体功能还有待进一步研究。本实验以 2 年生人参根为外植体，采用 MS+2，4-D(4.0mg/L)培养基中诱导形成愈伤组织，在 MS+2，4-D(2.0mg/L)+BA(2.0mg/L)+IBA(5.0mg/L)+Vc(30mg/L)的培养基质中进行悬浮培养，在细胞悬浮培养物生长的第 7d、14d、21d、28d 添加 10-3mg/L 水杨酸，再次证实了在人参细胞的生长对数期添加水杨酸可提高人参细胞培养物中人参皂苷的含量，与对照相比可提高 130，而在细胞生长的早期添加水杨酸对细胞培养物中的皂苷含量影响不大。同时本实验观察得到，水杨酸的添加可以延长人参愈伤组织的
12、培养周期，与未添加水杨酸的人参愈伤组织相比，在愈伤组织培养的第 35 天，添加水杨酸的人参愈伤组织仍然处于生长旺盛阶段，而未添加水杨酸的人参愈伤组织进入衰退期。 本实验跟踪了水杨酸添加后过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶三种酶在 72 小时内的变化。结果表明过氧化物酶的活力在 24 小时达到最高峰值，其活性可达到对照的1.5 倍，随后活性开始下降，72 小时后与对照基本接近。多酚氧化酶的活力在第 18 小时达到最大并且其活力在 72 小时之内高于对照。苯丙氨酸解氨酶的活力在 24 小时后迅速攀升在 48 小时苯丙氨酸解氨酶的活力达到最大峰值，为对照的 1.87 倍。这三种酶活性的提高在一定
13、程度上表征了细胞次级代谢的增强，有利于次生代谢产物的合成和积累。 水杨酸作为诱导子，已在多种药用植物细胞培养中使用，效果显著。但水杨酸作为诱导子诱导植物次生代谢产物合成的作用机制并不十分清楚。本实验首次将 cDNA-RDA 技术应用到药用植物次生代谢的研究中，优化了 cDNA-RDA 技术体系。确定了在添加水杨酸后提取总 RNA 的时间为添加后第 24 小时，置换合成双链 cDNA，合成 3 对接头引物，筛选差异片段。经差异显示分析得到一个长为 516bp 的差异表达片段，通过查询国际互联网与 GenBank 库中的核苷酸序列，没有发现该基因的同源序列，因此我们认定这是一差异表达的 cDNA
14、序列可能来自一条未曾分离的新基因，GenBank 中的注册号为 FE900130。其中差异片段的前 217bp 与己糖激酶有高度的同源性，我们因此推测，该差异片段的功能应与己糖激酶具有一定的相似性。其具体功能还有待进一步研究。本实验以 2 年生人参根为外植体，采用 MS+2，4-D(4.0mg/L)培养基中诱导形成愈伤组织，在 MS+2，4-D(2.0mg/L)+BA(2.0mg/L)+IBA(5.0mg/L)+Vc(30mg/L)的培养基质中进行悬浮培养，在细胞悬浮培养物生长的第 7d、14d、21d、28d 添加 10-3mg/L 水杨酸，再次证实了在人参细胞的生长对数期添加水杨酸可提高人
15、参细胞培养物中人参皂苷的含量，与对照相比可提高 130，而在细胞生长的早期添加水杨酸对细胞培养物中的皂苷含量影响不大。同时本实验观察得到，水杨酸的添加可以延长人参愈伤组织的培养周期，与未添加水杨酸的人参愈伤组织相比，在愈伤组织培养的第 35 天，添加水杨酸的人参愈伤组织仍然处于生长旺盛阶段，而未添加水杨酸的人参愈伤组织进入衰退期。 本实验跟踪了水杨酸添加后过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶三种酶在 72 小时内的变化。结果表明过氧化物酶的活力在 24 小时达到最高峰值，其活性可达到对照的1.5 倍，随后活性开始下降，72 小时后与对照基本接近。多酚氧化酶的活力在第 18 小时达到最大并且其
16、活力在 72 小时之内高于对照。苯丙氨酸解氨酶的活力在 24 小时后迅速攀升在 48 小时苯丙氨酸解氨酶的活力达到最大峰值，为对照的 1.87 倍。这三种酶活性的提高在一定程度上表征了细胞次级代谢的增强，有利于次生代谢产物的合成和积累。 水杨酸作为诱导子，已在多种药用植物细胞培养中使用，效果显著。但水杨酸作为诱导子诱导植物次生代谢产物合成的作用机制并不十分清楚。本实验首次将 cDNA-RDA 技术应用到药用植物次生代谢的研究中，优化了 cDNA-RDA 技术体系。确定了在添加水杨酸后提取总 RNA 的时间为添加后第 24 小时，置换合成双链 cDNA，合成 3 对接头引物，筛选差异片段。经差异
17、显示分析得到一个长为 516bp 的差异表达片段，通过查询国际互联网与 GenBank 库中的核苷酸序列，没有发现该基因的同源序列，因此我们认定这是一差异表达的 cDNA 序列可能来自一条未曾分离的新基因，GenBank 中的注册号为 FE900130。其中差异片段的前 217bp 与己糖激酶有高度的同源性，我们因此推测，该差异片段的功能应与己糖激酶具有一定的相似性。其具体功能还有待进一步研究。本实验以 2 年生人参根为外植体，采用 MS+2，4-D(4.0mg/L)培养基中诱导形成愈伤组织，在 MS+2，4-D(2.0mg/L)+BA(2.0mg/L)+IBA(5.0mg/L)+Vc(30m
18、g/L)的培养基质中进行悬浮培养，在细胞悬浮培养物生长的第 7d、14d、21d、28d 添加 10-3mg/L 水杨酸，再次证实了在人参细胞的生长对数期添加水杨酸可提高人参细胞培养物中人参皂苷的含量，与对照相比可提高 130，而在细胞生长的早期添加水杨酸对细胞培养物中的皂苷含量影响不大。同时本实验观察得到，水杨酸的添加可以延长人参愈伤组织的培养周期，与未添加水杨酸的人参愈伤组织相比，在愈伤组织培养的第 35 天，添加水杨酸的人参愈伤组织仍然处于生长旺盛阶段，而未添加水杨酸的人参愈伤组织进入衰退期。 本实验跟踪了水杨酸添加后过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶三种酶在 72 小时内的变化。结
19、果表明过氧化物酶的活力在 24 小时达到最高峰值，其活性可达到对照的1.5 倍，随后活性开始下降，72 小时后与对照基本接近。多酚氧化酶的活力在第 18 小时达到最大并且其活力在 72 小时之内高于对照。苯丙氨酸解氨酶的活力在 24 小时后迅速攀升在 48 小时苯丙氨酸解氨酶的活力达到最大峰值，为对照的 1.87 倍。这三种酶活性的提高在一定程度上表征了细胞次级代谢的增强，有利于次生代谢产物的合成和积累。 水杨酸作为诱导子，已在多种药用植物细胞培养中使用，效果显著。但水杨酸作为诱导子诱导植物次生代谢产物合成的作用机制并不十分清楚。本实验首次将 cDNA-RDA 技术应用到药用植物次生代谢的研究
20、中，优化了 cDNA-RDA 技术体系。确定了在添加水杨酸后提取总 RNA 的时间为添加后第 24 小时，置换合成双链 cDNA，合成 3 对接头引物，筛选差异片段。经差异显示分析得到一个长为 516bp 的差异表达片段，通过查询国际互联网与 GenBank 库中的核苷酸序列，没有发现该基因的同源序列，因此我们认定这是一差异表达的 cDNA 序列可能来自一条未曾分离的新基因，GenBank 中的注册号为 FE900130。其中差异片段的前 217bp 与己糖激酶有高度的同源性，我们因此推测，该差异片段的功能应与己糖激酶具有一定的相似性。其具体功能还有待进一步研究。本实验以 2 年生人参根为外植
21、体，采用 MS+2，4-D(4.0mg/L)培养基中诱导形成愈伤组织，在 MS+2，4-D(2.0mg/L)+BA(2.0mg/L)+IBA(5.0mg/L)+Vc(30mg/L)的培养基质中进行悬浮培养，在细胞悬浮培养物生长的第 7d、14d、21d、28d 添加 10-3mg/L 水杨酸，再次证实了在人参细胞的生长对数期添加水杨酸可提高人参细胞培养物中人参皂苷的含量，与对照相比可提高 130，而在细胞生长的早期添加水杨酸对细胞培养物中的皂苷含量影响不大。同时本实验观察得到，水杨酸的添加可以延长人参愈伤组织的培养周期，与未添加水杨酸的人参愈伤组织相比，在愈伤组织培养的第 35 天，添加水杨酸
22、的人参愈伤组织仍然处于生长旺盛阶段，而未添加水杨酸的人参愈伤组织进入衰退期。 本实验跟踪了水杨酸添加后过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶三种酶在 72 小时内的变化。结果表明过氧化物酶的活力在 24 小时达到最高峰值，其活性可达到对照的1.5 倍，随后活性开始下降，72 小时后与对照基本接近。多酚氧化酶的活力在第 18 小时达到最大并且其活力在 72 小时之内高于对照。苯丙氨酸解氨酶的活力在 24 小时后迅速攀升在 48 小时苯丙氨酸解氨酶的活力达到最大峰值，为对照的 1.87 倍。这三种酶活性的提高在一定程度上表征了细胞次级代谢的增强，有利于次生代谢产物的合成和积累。 水杨酸作为诱导子，
23、已在多种药用植物细胞培养中使用，效果显著。但水杨酸作为诱导子诱导植物次生代谢产物合成的作用机制并不十分清楚。本实验首次将 cDNA-RDA 技术应用到药用植物次生代谢的研究中，优化了 cDNA-RDA 技术体系。确定了在添加水杨酸后提取总 RNA 的时间为添加后第 24 小时，置换合成双链 cDNA，合成 3 对接头引物，筛选差异片段。经差异显示分析得到一个长为 516bp 的差异表达片段，通过查询国际互联网与 GenBank 库中的核苷酸序列，没有发现该基因的同源序列，因此我们认定这是一差异表达的 cDNA 序列可能来自一条未曾分离的新基因，GenBank 中的注册号为 FE900130。其
24、中差异片段的前 217bp 与己糖激酶有高度的同源性，我们因此推测，该差异片段的功能应与己糖激酶具有一定的相似性。其具体功能还有待进一步研究。本实验以 2 年生人参根为外植体，采用 MS+2，4-D(4.0mg/L)培养基中诱导形成愈伤组织，在 MS+2，4-D(2.0mg/L)+BA(2.0mg/L)+IBA(5.0mg/L)+Vc(30mg/L)的培养基质中进行悬浮培养，在细胞悬浮培养物生长的第 7d、14d、21d、28d 添加 10-3mg/L 水杨酸，再次证实了在人参细胞的生长对数期添加水杨酸可提高人参细胞培养物中人参皂苷的含量，与对照相比可提高 130，而在细胞生长的早期添加水杨酸
25、对细胞培养物中的皂苷含量影响不大。同时本实验观察得到，水杨酸的添加可以延长人参愈伤组织的培养周期，与未添加水杨酸的人参愈伤组织相比，在愈伤组织培养的第 35 天，添加水杨酸的人参愈伤组织仍然处于生长旺盛阶段，而未添加水杨酸的人参愈伤组织进入衰退期。 本实验跟踪了水杨酸添加后过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶三种酶在 72 小时内的变化。结果表明过氧化物酶的活力在 24 小时达到最高峰值，其活性可达到对照的1.5 倍，随后活性开始下降，72 小时后与对照基本接近。多酚氧化酶的活力在第 18 小时达到最大并且其活力在 72 小时之内高于对照。苯丙氨酸解氨酶的活力在 24 小时后迅速攀升在 48
26、 小时苯丙氨酸解氨酶的活力达到最大峰值，为对照的 1.87 倍。这三种酶活性的提高在一定程度上表征了细胞次级代谢的增强，有利于次生代谢产物的合成和积累。 水杨酸作为诱导子，已在多种药用植物细胞培养中使用，效果显著。但水杨酸作为诱导子诱导植物次生代谢产物合成的作用机制并不十分清楚。本实验首次将 cDNA-RDA 技术应用到药用植物次生代谢的研究中，优化了 cDNA-RDA 技术体系。确定了在添加水杨酸后提取总 RNA 的时间为添加后第 24 小时，置换合成双链 cDNA，合成 3 对接头引物，筛选差异片段。经差异显示分析得到一个长为 516bp 的差异表达片段，通过查询国际互联网与 GenBan
27、k 库中的核苷酸序列，没有发现该基因的同源序列，因此我们认定这是一差异表达的 cDNA 序列可能来自一条未曾分离的新基因，GenBank 中的注册号为 FE900130。其中差异片段的前 217bp 与己糖激酶有高度的同源性，我们因此推测，该差异片段的功能应与己糖激酶具有一定的相似性。其具体功能还有待进一步研究。本实验以 2 年生人参根为外植体，采用 MS+2，4-D(4.0mg/L)培养基中诱导形成愈伤组织，在 MS+2，4-D(2.0mg/L)+BA(2.0mg/L)+IBA(5.0mg/L)+Vc(30mg/L)的培养基质中进行悬浮培养，在细胞悬浮培养物生长的第 7d、14d、21d、2
28、8d 添加 10-3mg/L 水杨酸，再次证实了在人参细胞的生长对数期添加水杨酸可提高人参细胞培养物中人参皂苷的含量，与对照相比可提高 130，而在细胞生长的早期添加水杨酸对细胞培养物中的皂苷含量影响不大。同时本实验观察得到，水杨酸的添加可以延长人参愈伤组织的培养周期，与未添加水杨酸的人参愈伤组织相比，在愈伤组织培养的第 35 天，添加水杨酸的人参愈伤组织仍然处于生长旺盛阶段，而未添加水杨酸的人参愈伤组织进入衰退期。 本实验跟踪了水杨酸添加后过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶三种酶在 72 小时内的变化。结果表明过氧化物酶的活力在 24 小时达到最高峰值，其活性可达到对照的1.5 倍，随后
29、活性开始下降，72 小时后与对照基本接近。多酚氧化酶的活力在第 18 小时达到最大并且其活力在 72 小时之内高于对照。苯丙氨酸解氨酶的活力在 24 小时后迅速攀升在 48 小时苯丙氨酸解氨酶的活力达到最大峰值，为对照的 1.87 倍。这三种酶活性的提高在一定程度上表征了细胞次级代谢的增强，有利于次生代谢产物的合成和积累。 水杨酸作为诱导子，已在多种药用植物细胞培养中使用，效果显著。但水杨酸作为诱导子诱导植物次生代谢产物合成的作用机制并不十分清楚。本实验首次将 cDNA-RDA 技术应用到药用植物次生代谢的研究中，优化了 cDNA-RDA 技术体系。确定了在添加水杨酸后提取总 RNA 的时间为
30、添加后第 24 小时，置换合成双链 cDNA，合成 3 对接头引物，筛选差异片段。经差异显示分析得到一个长为 516bp 的差异表达片段，通过查询国际互联网与 GenBank 库中的核苷酸序列，没有发现该基因的同源序列，因此我们认定这是一差异表达的 cDNA 序列可能来自一条未曾分离的新基因，GenBank 中的注册号为 FE900130。其中差异片段的前 217bp 与己糖激酶有高度的同源性，我们因此推测，该差异片段的功能应与己糖激酶具有一定的相似性。其具体功能还有待进一步研究。本实验以 2 年生人参根为外植体，采用 MS+2，4-D(4.0mg/L)培养基中诱导形成愈伤组织，在 MS+2，
31、4-D(2.0mg/L)+BA(2.0mg/L)+IBA(5.0mg/L)+Vc(30mg/L)的培养基质中进行悬浮培养，在细胞悬浮培养物生长的第 7d、14d、21d、28d 添加 10-3mg/L 水杨酸，再次证实了在人参细胞的生长对数期添加水杨酸可提高人参细胞培养物中人参皂苷的含量，与对照相比可提高 130，而在细胞生长的早期添加水杨酸对细胞培养物中的皂苷含量影响不大。同时本实验观察得到，水杨酸的添加可以延长人参愈伤组织的培养周期，与未添加水杨酸的人参愈伤组织相比，在愈伤组织培养的第 35 天，添加水杨酸的人参愈伤组织仍然处于生长旺盛阶段，而未添加水杨酸的人参愈伤组织进入衰退期。 本实验
32、跟踪了水杨酸添加后过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶三种酶在 72 小时内的变化。结果表明过氧化物酶的活力在 24 小时达到最高峰值，其活性可达到对照的1.5 倍，随后活性开始下降，72 小时后与对照基本接近。多酚氧化酶的活力在第 18 小时达到最大并且其活力在 72 小时之内高于对照。苯丙氨酸解氨酶的活力在 24 小时后迅速攀升在 48 小时苯丙氨酸解氨酶的活力达到最大峰值，为对照的 1.87 倍。这三种酶活性的提高在一定程度上表征了细胞次级代谢的增强，有利于次生代谢产物的合成和积累。 水杨酸作为诱导子，已在多种药用植物细胞培养中使用，效果显著。但水杨酸作为诱导子诱导植物次生代谢产物合成
33、的作用机制并不十分清楚。本实验首次将 cDNA-RDA 技术应用到药用植物次生代谢的研究中，优化了 cDNA-RDA 技术体系。确定了在添加水杨酸后提取总 RNA 的时间为添加后第 24 小时，置换合成双链 cDNA，合成 3 对接头引物，筛选差异片段。经差异显示分析得到一个长为 516bp 的差异表达片段，通过查询国际互联网与 GenBank 库中的核苷酸序列，没有发现该基因的同源序列，因此我们认定这是一差异表达的 cDNA 序列可能来自一条未曾分离的新基因，GenBank 中的注册号为 FE900130。其中差异片段的前 217bp 与己糖激酶有高度的同源性，我们因此推测，该差异片段的功能
34、应与己糖激酶具有一定的相似性。其具体功能还有待进一步研究。本实验以 2 年生人参根为外植体，采用 MS+2，4-D(4.0mg/L)培养基中诱导形成愈伤组织，在 MS+2，4-D(2.0mg/L)+BA(2.0mg/L)+IBA(5.0mg/L)+Vc(30mg/L)的培养基质中进行悬浮培养，在细胞悬浮培养物生长的第 7d、14d、21d、28d 添加 10-3mg/L 水杨酸，再次证实了在人参细胞的生长对数期添加水杨酸可提高人参细胞培养物中人参皂苷的含量，与对照相比可提高 130，而在细胞生长的早期添加水杨酸对细胞培养物中的皂苷含量影响不大。同时本实验观察得到，水杨酸的添加可以延长人参愈伤组
35、织的培养周期，与未添加水杨酸的人参愈伤组织相比，在愈伤组织培养的第 35 天，添加水杨酸的人参愈伤组织仍然处于生长旺盛阶段，而未添加水杨酸的人参愈伤组织进入衰退期。 本实验跟踪了水杨酸添加后过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶三种酶在 72 小时内的变化。结果表明过氧化物酶的活力在 24 小时达到最高峰值，其活性可达到对照的1.5 倍，随后活性开始下降，72 小时后与对照基本接近。多酚氧化酶的活力在第 18 小时达到最大并且其活力在 72 小时之内高于对照。苯丙氨酸解氨酶的活力在 24 小时后迅速攀升在 48 小时苯丙氨酸解氨酶的活力达到最大峰值，为对照的 1.87 倍。这三种酶活性的提高在
36、一定程度上表征了细胞次级代谢的增强，有利于次生代谢产物的合成和积累。 水杨酸作为诱导子，已在多种药用植物细胞培养中使用，效果显著。但水杨酸作为诱导子诱导植物次生代谢产物合成的作用机制并不十分清楚。本实验首次将 cDNA-RDA 技术应用到药用植物次生代谢的研究中，优化了 cDNA-RDA 技术体系。确定了在添加水杨酸后提取总 RNA 的时间为添加后第 24 小时，置换合成双链 cDNA，合成 3 对接头引物，筛选差异片段。经差异显示分析得到一个长为 516bp 的差异表达片段，通过查询国际互联网与 GenBank 库中的核苷酸序列，没有发现该基因的同源序列，因此我们认定这是一差异表达的 cDN
37、A 序列可能来自一条未曾分离的新基因，GenBank 中的注册号为 FE900130。其中差异片段的前 217bp 与己糖激酶有高度的同源性，我们因此推测，该差异片段的功能应与己糖激酶具有一定的相似性。其具体功能还有待进一步研究。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x 滌?U 閩 AZ箾 FTP 鈦X 飼?狛P? 燚?琯嫼 b?袍*甒?颙嫯?4)=r 宵?i?j 彺帖
38、B3 锝檡骹笪 yLrQ#?0 鯖 l 壛枒l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛渓?擗#?“?# 綫 G 刿#K 芿$?7. 耟?Wa 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 皗 E|?pDb 癳$Fb 癳$Fb癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$F?責鯻 0 橔 C,f 薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵秾腵薍秾腵%?秾腵薍秾腵薍秾腵薍
