1、细胞生物学专业优秀论文 水通道蛋白及氯离子通道 mCLCA3 在哮喘发生中的作用关键词：水通道蛋白 氯离子通道 哮喘 发病机制 mCLCA3 蛋白摘要：呼吸系统上皮和内皮组织中的高效水转运机制对于维持呼吸道的正常生理功能是必不可少的。目前已知在呼吸系统中有 4 种水通道表达：AQP1，AQP3，AQP4，AQP5，其分布遍及鼻咽部、气道及肺组织。AQP1 主要在毛细血管内皮细胞和胸膜上表达；AQP3 主要在气道基细胞的基底边膜表达；AQP4只在气道上皮细胞表达；AQP5 在型肺泡顶膜上高表达，此外毛柱状细胞、支气管腺体细胞中也有表达。通过 AQP1 和 AOP5 进行的渗透压驱动的跨细胞水转运
2、是气室和毛细血管之间主要的水转运方式；AQP3、AQP4 主要参与气道内渗透压驱动的水转运。但是，除了发现 AQP5 敲除可是使呼吸道粘膜下浆液腺分泌量降低约 50外，这些水通道敲除对呼吸系统的正常生理功能并无显著影响。并且到目前为止，关于水通道蛋白在呼吸系统疾病中的作用研究几乎还是空白，仅有一篇文献报道 AQP5 敲除小鼠对乙酰胆碱诱导的气道过敏反应显著高于野生小鼠。 本课题通过卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型，对水通道蛋白在小鼠哮喘发生过程中的作用进行了系统研究。结果发现与野生型哮喘小鼠相比，AQP4 基因敲除小鼠中粘液分泌量显著减少，而 AQP5 基因敲除哮喘小鼠支气管中粘液分泌则显著增多，表
3、明 AQP4 和 AQP5 参与支气管哮喘的病理过程。野生型哮喘小鼠中，水通道蛋白 AQP4 表达出现下调现象，而 AQP5 敲除哮喘小鼠 AQP4 表达水平无显著下调，提示 AQP4 表达可能促进哮喘状态下的气道粘液分泌。因此AQP4 下调或缺失可能减少哮喘状态下的粘液分泌，减轻哮喘症状。AQP5 敲除小鼠哮喘状态下支气管粘液分泌增多可能与气道液体分布异常有关。 钙激活的氯离子通道(CACC)是近年发现的一个有争议的氯离子通道家族。mCLCA3 是 CACC家族成员之一，以往研究提示 mCLCA3 表达上调在哮喘和囊性纤维化等呼吸系统疾病中与粘液细胞化生及粘液过度分泌密切相关。为研究 mCL
4、CA3 蛋白的分子结构及在哮喘发生中的作用，我们通过原核表达 269aa mCLCA3 蛋白片段作为抗原制备了 mCLCA3 多克隆抗体，利用该抗体对支气管哮喘小鼠进行了一系列研究。结果发现 mCLCA3 在哮喘小鼠支气管杯状细胞的粘液颗粒上高表达。通过对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的免疫印记分析发现仅有约 90 kDa，的 mCLCA3蛋白在其中表达，未见全长的 mCLCA3 蛋白及其它的剪切形式存在。为了进一步研究 mCLCA3 蛋白的功能，我们制备了稳定表达 mCLCA3 的真核细胞模型，利用已知的 CACC 通道激活剂和抑制剂，对 mCLCA3 蛋白的氯离子通道活性进行了分析，
5、结果未能检测到氯离子通道活性。本研究结果支持 mCLCA3 不是氯离子通道的观点。正文内容呼吸系统上皮和内皮组织中的高效水转运机制对于维持呼吸道的正常生理功能是必不可少的。目前已知在呼吸系统中有 4 种水通道表达：AQP1，AQP3，AQP4，AQP5，其分布遍及鼻咽部、气道及肺组织。AQP1 主要在毛细血管内皮细胞和胸膜上表达；AQP3 主要在气道基细胞的基底边膜表达；AQP4只在气道上皮细胞表达；AQP5 在型肺泡顶膜上高表达，此外毛柱状细胞、支气管腺体细胞中也有表达。通过 AQP1 和 AOP5 进行的渗透压驱动的跨细胞水转运是气室和毛细血管之间主要的水转运方式；AQP3、AQP4 主要
6、参与气道内渗透压驱动的水转运。但是，除了发现 AQP5 敲除可是使呼吸道粘膜下浆液腺分泌量降低约 50外，这些水通道敲除对呼吸系统的正常生理功能并无显著影响。并且到目前为止，关于水通道蛋白在呼吸系统疾病中的作用研究几乎还是空白，仅有一篇文献报道 AQP5 敲除小鼠对乙酰胆碱诱导的气道过敏反应显著高于野生小鼠。 本课题通过卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型，对水通道蛋白在小鼠哮喘发生过程中的作用进行了系统研究。结果发现与野生型哮喘小鼠相比，AQP4 基因敲除小鼠中粘液分泌量显著减少，而 AQP5 基因敲除哮喘小鼠支气管中粘液分泌则显著增多，表明 AQP4 和 AQP5 参与支气管哮喘的病理过程。野生型哮
7、喘小鼠中，水通道蛋白 AQP4 表达出现下调现象，而 AQP5 敲除哮喘小鼠 AQP4 表达水平无显著下调，提示 AQP4 表达可能促进哮喘状态下的气道粘液分泌。因此AQP4 下调或缺失可能减少哮喘状态下的粘液分泌，减轻哮喘症状。AQP5 敲除小鼠哮喘状态下支气管粘液分泌增多可能与气道液体分布异常有关。 钙激活的氯离子通道(CACC)是近年发现的一个有争议的氯离子通道家族。mCLCA3 是 CACC家族成员之一，以往研究提示 mCLCA3 表达上调在哮喘和囊性纤维化等呼吸系统疾病中与粘液细胞化生及粘液过度分泌密切相关。为研究 mCLCA3 蛋白的分子结构及在哮喘发生中的作用，我们通过原核表达
8、269aa mCLCA3 蛋白片段作为抗原制备了 mCLCA3 多克隆抗体，利用该抗体对支气管哮喘小鼠进行了一系列研究。结果发现 mCLCA3 在哮喘小鼠支气管杯状细胞的粘液颗粒上高表达。通过对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的免疫印记分析发现仅有约 90 kDa，的 mCLCA3蛋白在其中表达，未见全长的 mCLCA3 蛋白及其它的剪切形式存在。为了进一步研究 mCLCA3 蛋白的功能，我们制备了稳定表达 mCLCA3 的真核细胞模型，利用已知的 CACC 通道激活剂和抑制剂，对 mCLCA3 蛋白的氯离子通道活性进行了分析，结果未能检测到氯离子通道活性。本研究结果支持 mCLCA3 不
9、是氯离子通道的观点。呼吸系统上皮和内皮组织中的高效水转运机制对于维持呼吸道的正常生理功能是必不可少的。目前已知在呼吸系统中有 4 种水通道表达：AQP1，AQP3，AQP4，AQP5，其分布遍及鼻咽部、气道及肺组织。AQP1 主要在毛细血管内皮细胞和胸膜上表达；AQP3 主要在气道基细胞的基底边膜表达；AQP4只在气道上皮细胞表达；AQP5 在型肺泡顶膜上高表达，此外毛柱状细胞、支气管腺体细胞中也有表达。通过 AQP1 和 AOP5 进行的渗透压驱动的跨细胞水转运是气室和毛细血管之间主要的水转运方式；AQP3、AQP4 主要参与气道内渗透压驱动的水转运。但是，除了发现 AQP5 敲除可是使呼吸
10、道粘膜下浆液腺分泌量降低约 50外，这些水通道敲除对呼吸系统的正常生理功能并无显著影响。并且到目前为止，关于水通道蛋白在呼吸系统疾病中的作用研究几乎还是空白，仅有一篇文献报道 AQP5 敲除小鼠对乙酰胆碱诱导的气道过敏反应显著高于野生小鼠。 本课题通过卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型，对水通道蛋白在小鼠哮喘发生过程中的作用进行了系统研究。结果发现与野生型哮喘小鼠相比，AQP4 基因敲除小鼠中粘液分泌量显著减少，而 AQP5 基因敲除哮喘小鼠支气管中粘液分泌则显著增多，表明 AQP4 和 AQP5 参与支气管哮喘的病理过程。野生型哮喘小鼠中，水通道蛋白 AQP4 表达出现下调现象，而 AQP5 敲除哮
11、喘小鼠 AQP4 表达水平无显著下调，提示 AQP4 表达可能促进哮喘状态下的气道粘液分泌。因此AQP4 下调或缺失可能减少哮喘状态下的粘液分泌，减轻哮喘症状。AQP5 敲除小鼠哮喘状态下支气管粘液分泌增多可能与气道液体分布异常有关。 钙激活的氯离子通道(CACC)是近年发现的一个有争议的氯离子通道家族。mCLCA3 是 CACC家族成员之一，以往研究提示 mCLCA3 表达上调在哮喘和囊性纤维化等呼吸系统疾病中与粘液细胞化生及粘液过度分泌密切相关。为研究 mCLCA3 蛋白的分子结构及在哮喘发生中的作用，我们通过原核表达 269aa mCLCA3 蛋白片段作为抗原制备了 mCLCA3 多克隆
12、抗体，利用该抗体对支气管哮喘小鼠进行了一系列研究。结果发现 mCLCA3 在哮喘小鼠支气管杯状细胞的粘液颗粒上高表达。通过对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的免疫印记分析发现仅有约 90 kDa，的 mCLCA3蛋白在其中表达，未见全长的 mCLCA3 蛋白及其它的剪切形式存在。为了进一步研究 mCLCA3 蛋白的功能，我们制备了稳定表达 mCLCA3 的真核细胞模型，利用已知的 CACC 通道激活剂和抑制剂，对 mCLCA3 蛋白的氯离子通道活性进行了分析，结果未能检测到氯离子通道活性。本研究结果支持 mCLCA3 不是氯离子通道的观点。呼吸系统上皮和内皮组织中的高效水转运机制对于维持呼
13、吸道的正常生理功能是必不可少的。目前已知在呼吸系统中有 4 种水通道表达：AQP1，AQP3，AQP4，AQP5，其分布遍及鼻咽部、气道及肺组织。AQP1 主要在毛细血管内皮细胞和胸膜上表达；AQP3 主要在气道基细胞的基底边膜表达；AQP4只在气道上皮细胞表达；AQP5 在型肺泡顶膜上高表达，此外毛柱状细胞、支气管腺体细胞中也有表达。通过 AQP1 和 AOP5 进行的渗透压驱动的跨细胞水转运是气室和毛细血管之间主要的水转运方式；AQP3、AQP4 主要参与气道内渗透压驱动的水转运。但是，除了发现 AQP5 敲除可是使呼吸道粘膜下浆液腺分泌量降低约 50外，这些水通道敲除对呼吸系统的正常生理
14、功能并无显著影响。并且到目前为止，关于水通道蛋白在呼吸系统疾病中的作用研究几乎还是空白，仅有一篇文献报道 AQP5 敲除小鼠对乙酰胆碱诱导的气道过敏反应显著高于野生小鼠。 本课题通过卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型，对水通道蛋白在小鼠哮喘发生过程中的作用进行了系统研究。结果发现与野生型哮喘小鼠相比，AQP4 基因敲除小鼠中粘液分泌量显著减少，而 AQP5 基因敲除哮喘小鼠支气管中粘液分泌则显著增多，表明 AQP4 和 AQP5 参与支气管哮喘的病理过程。野生型哮喘小鼠中，水通道蛋白 AQP4 表达出现下调现象，而 AQP5 敲除哮喘小鼠 AQP4 表达水平无显著下调，提示 AQP4 表达可能促进哮喘
15、状态下的气道粘液分泌。因此AQP4 下调或缺失可能减少哮喘状态下的粘液分泌，减轻哮喘症状。AQP5 敲除小鼠哮喘状态下支气管粘液分泌增多可能与气道液体分布异常有关。 钙激活的氯离子通道(CACC)是近年发现的一个有争议的氯离子通道家族。mCLCA3 是 CACC家族成员之一，以往研究提示 mCLCA3 表达上调在哮喘和囊性纤维化等呼吸系统疾病中与粘液细胞化生及粘液过度分泌密切相关。为研究 mCLCA3 蛋白的分子结构及在哮喘发生中的作用，我们通过原核表达 269aa mCLCA3 蛋白片段作为抗原制备了 mCLCA3 多克隆抗体，利用该抗体对支气管哮喘小鼠进行了一系列研究。结果发现 mCLCA
16、3 在哮喘小鼠支气管杯状细胞的粘液颗粒上高表达。通过对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的免疫印记分析发现仅有约 90 kDa，的 mCLCA3蛋白在其中表达，未见全长的 mCLCA3 蛋白及其它的剪切形式存在。为了进一步研究 mCLCA3 蛋白的功能，我们制备了稳定表达 mCLCA3 的真核细胞模型，利用已知的 CACC 通道激活剂和抑制剂，对 mCLCA3 蛋白的氯离子通道活性进行了分析，结果未能检测到氯离子通道活性。本研究结果支持 mCLCA3 不是氯离子通道的观点。呼吸系统上皮和内皮组织中的高效水转运机制对于维持呼吸道的正常生理功能是必不可少的。目前已知在呼吸系统中有 4 种水通道表
17、达：AQP1，AQP3，AQP4，AQP5，其分布遍及鼻咽部、气道及肺组织。AQP1 主要在毛细血管内皮细胞和胸膜上表达；AQP3 主要在气道基细胞的基底边膜表达；AQP4只在气道上皮细胞表达；AQP5 在型肺泡顶膜上高表达，此外毛柱状细胞、支气管腺体细胞中也有表达。通过 AQP1 和 AOP5 进行的渗透压驱动的跨细胞水转运是气室和毛细血管之间主要的水转运方式；AQP3、AQP4 主要参与气道内渗透压驱动的水转运。但是，除了发现 AQP5 敲除可是使呼吸道粘膜下浆液腺分泌量降低约 50外，这些水通道敲除对呼吸系统的正常生理功能并无显著影响。并且到目前为止，关于水通道蛋白在呼吸系统疾病中的作用
18、研究几乎还是空白，仅有一篇文献报道 AQP5 敲除小鼠对乙酰胆碱诱导的气道过敏反应显著高于野生小鼠。 本课题通过卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型，对水通道蛋白在小鼠哮喘发生过程中的作用进行了系统研究。结果发现与野生型哮喘小鼠相比，AQP4 基因敲除小鼠中粘液分泌量显著减少，而 AQP5 基因敲除哮喘小鼠支气管中粘液分泌则显著增多，表明 AQP4 和 AQP5 参与支气管哮喘的病理过程。野生型哮喘小鼠中，水通道蛋白 AQP4 表达出现下调现象，而 AQP5 敲除哮喘小鼠 AQP4 表达水平无显著下调，提示 AQP4 表达可能促进哮喘状态下的气道粘液分泌。因此AQP4 下调或缺失可能减少哮喘状态下的粘液
19、分泌，减轻哮喘症状。AQP5 敲除小鼠哮喘状态下支气管粘液分泌增多可能与气道液体分布异常有关。 钙激活的氯离子通道(CACC)是近年发现的一个有争议的氯离子通道家族。mCLCA3 是 CACC家族成员之一，以往研究提示 mCLCA3 表达上调在哮喘和囊性纤维化等呼吸系统疾病中与粘液细胞化生及粘液过度分泌密切相关。为研究 mCLCA3 蛋白的分子结构及在哮喘发生中的作用，我们通过原核表达 269aa mCLCA3 蛋白片段作为抗原制备了 mCLCA3 多克隆抗体，利用该抗体对支气管哮喘小鼠进行了一系列研究。结果发现 mCLCA3 在哮喘小鼠支气管杯状细胞的粘液颗粒上高表达。通过对哮喘小鼠支气管肺
20、泡灌洗液(BALF)的免疫印记分析发现仅有约 90 kDa，的 mCLCA3蛋白在其中表达，未见全长的 mCLCA3 蛋白及其它的剪切形式存在。为了进一步研究 mCLCA3 蛋白的功能，我们制备了稳定表达 mCLCA3 的真核细胞模型，利用已知的 CACC 通道激活剂和抑制剂，对 mCLCA3 蛋白的氯离子通道活性进行了分析，结果未能检测到氯离子通道活性。本研究结果支持 mCLCA3 不是氯离子通道的观点。呼吸系统上皮和内皮组织中的高效水转运机制对于维持呼吸道的正常生理功能是必不可少的。目前已知在呼吸系统中有 4 种水通道表达：AQP1，AQP3，AQP4，AQP5，其分布遍及鼻咽部、气道及肺
21、组织。AQP1 主要在毛细血管内皮细胞和胸膜上表达；AQP3 主要在气道基细胞的基底边膜表达；AQP4只在气道上皮细胞表达；AQP5 在型肺泡顶膜上高表达，此外毛柱状细胞、支气管腺体细胞中也有表达。通过 AQP1 和 AOP5 进行的渗透压驱动的跨细胞水转运是气室和毛细血管之间主要的水转运方式；AQP3、AQP4 主要参与气道内渗透压驱动的水转运。但是，除了发现 AQP5 敲除可是使呼吸道粘膜下浆液腺分泌量降低约 50外，这些水通道敲除对呼吸系统的正常生理功能并无显著影响。并且到目前为止，关于水通道蛋白在呼吸系统疾病中的作用研究几乎还是空白，仅有一篇文献报道 AQP5 敲除小鼠对乙酰胆碱诱导的
22、气道过敏反应显著高于野生小鼠。 本课题通过卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型，对水通道蛋白在小鼠哮喘发生过程中的作用进行了系统研究。结果发现与野生型哮喘小鼠相比，AQP4 基因敲除小鼠中粘液分泌量显著减少，而 AQP5 基因敲除哮喘小鼠支气管中粘液分泌则显著增多，表明 AQP4 和 AQP5 参与支气管哮喘的病理过程。野生型哮喘小鼠中，水通道蛋白 AQP4 表达出现下调现象，而 AQP5 敲除哮喘小鼠 AQP4 表达水平无显著下调，提示 AQP4 表达可能促进哮喘状态下的气道粘液分泌。因此AQP4 下调或缺失可能减少哮喘状态下的粘液分泌，减轻哮喘症状。AQP5 敲除小鼠哮喘状态下支气管粘液分泌增多可能
23、与气道液体分布异常有关。 钙激活的氯离子通道(CACC)是近年发现的一个有争议的氯离子通道家族。mCLCA3 是 CACC家族成员之一，以往研究提示 mCLCA3 表达上调在哮喘和囊性纤维化等呼吸系统疾病中与粘液细胞化生及粘液过度分泌密切相关。为研究 mCLCA3 蛋白的分子结构及在哮喘发生中的作用，我们通过原核表达 269aa mCLCA3 蛋白片段作为抗原制备了 mCLCA3 多克隆抗体，利用该抗体对支气管哮喘小鼠进行了一系列研究。结果发现 mCLCA3 在哮喘小鼠支气管杯状细胞的粘液颗粒上高表达。通过对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的免疫印记分析发现仅有约 90 kDa，的 mCL
24、CA3蛋白在其中表达，未见全长的 mCLCA3 蛋白及其它的剪切形式存在。为了进一步研究 mCLCA3 蛋白的功能，我们制备了稳定表达 mCLCA3 的真核细胞模型，利用已知的 CACC 通道激活剂和抑制剂，对 mCLCA3 蛋白的氯离子通道活性进行了分析，结果未能检测到氯离子通道活性。本研究结果支持 mCLCA3 不是氯离子通道的观点。呼吸系统上皮和内皮组织中的高效水转运机制对于维持呼吸道的正常生理功能是必不可少的。目前已知在呼吸系统中有 4 种水通道表达：AQP1，AQP3，AQP4，AQP5，其分布遍及鼻咽部、气道及肺组织。AQP1 主要在毛细血管内皮细胞和胸膜上表达；AQP3 主要在气
25、道基细胞的基底边膜表达；AQP4只在气道上皮细胞表达；AQP5 在型肺泡顶膜上高表达，此外毛柱状细胞、支气管腺体细胞中也有表达。通过 AQP1 和 AOP5 进行的渗透压驱动的跨细胞水转运是气室和毛细血管之间主要的水转运方式；AQP3、AQP4 主要参与气道内渗透压驱动的水转运。但是，除了发现 AQP5 敲除可是使呼吸道粘膜下浆液腺分泌量降低约 50外，这些水通道敲除对呼吸系统的正常生理功能并无显著影响。并且到目前为止，关于水通道蛋白在呼吸系统疾病中的作用研究几乎还是空白，仅有一篇文献报道 AQP5 敲除小鼠对乙酰胆碱诱导的气道过敏反应显著高于野生小鼠。 本课题通过卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型，
26、对水通道蛋白在小鼠哮喘发生过程中的作用进行了系统研究。结果发现与野生型哮喘小鼠相比，AQP4 基因敲除小鼠中粘液分泌量显著减少，而 AQP5 基因敲除哮喘小鼠支气管中粘液分泌则显著增多，表明 AQP4 和 AQP5 参与支气管哮喘的病理过程。野生型哮喘小鼠中，水通道蛋白 AQP4 表达出现下调现象，而 AQP5 敲除哮喘小鼠 AQP4 表达水平无显著下调，提示 AQP4 表达可能促进哮喘状态下的气道粘液分泌。因此AQP4 下调或缺失可能减少哮喘状态下的粘液分泌，减轻哮喘症状。AQP5 敲除小鼠哮喘状态下支气管粘液分泌增多可能与气道液体分布异常有关。 钙激活的氯离子通道(CACC)是近年发现的一
27、个有争议的氯离子通道家族。mCLCA3 是 CACC家族成员之一，以往研究提示 mCLCA3 表达上调在哮喘和囊性纤维化等呼吸系统疾病中与粘液细胞化生及粘液过度分泌密切相关。为研究 mCLCA3 蛋白的分子结构及在哮喘发生中的作用，我们通过原核表达 269aa mCLCA3 蛋白片段作为抗原制备了 mCLCA3 多克隆抗体，利用该抗体对支气管哮喘小鼠进行了一系列研究。结果发现 mCLCA3 在哮喘小鼠支气管杯状细胞的粘液颗粒上高表达。通过对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的免疫印记分析发现仅有约 90 kDa，的 mCLCA3蛋白在其中表达，未见全长的 mCLCA3 蛋白及其它的剪切形式存
28、在。为了进一步研究 mCLCA3 蛋白的功能，我们制备了稳定表达 mCLCA3 的真核细胞模型，利用已知的 CACC 通道激活剂和抑制剂，对 mCLCA3 蛋白的氯离子通道活性进行了分析，结果未能检测到氯离子通道活性。本研究结果支持 mCLCA3 不是氯离子通道的观点。呼吸系统上皮和内皮组织中的高效水转运机制对于维持呼吸道的正常生理功能是必不可少的。目前已知在呼吸系统中有 4 种水通道表达：AQP1，AQP3，AQP4，AQP5，其分布遍及鼻咽部、气道及肺组织。AQP1 主要在毛细血管内皮细胞和胸膜上表达；AQP3 主要在气道基细胞的基底边膜表达；AQP4只在气道上皮细胞表达；AQP5 在型肺
29、泡顶膜上高表达，此外毛柱状细胞、支气管腺体细胞中也有表达。通过 AQP1 和 AOP5 进行的渗透压驱动的跨细胞水转运是气室和毛细血管之间主要的水转运方式；AQP3、AQP4 主要参与气道内渗透压驱动的水转运。但是，除了发现 AQP5 敲除可是使呼吸道粘膜下浆液腺分泌量降低约 50外，这些水通道敲除对呼吸系统的正常生理功能并无显著影响。并且到目前为止，关于水通道蛋白在呼吸系统疾病中的作用研究几乎还是空白，仅有一篇文献报道 AQP5 敲除小鼠对乙酰胆碱诱导的气道过敏反应显著高于野生小鼠。 本课题通过卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型，对水通道蛋白在小鼠哮喘发生过程中的作用进行了系统研究。结果发现与野生型
30、哮喘小鼠相比，AQP4 基因敲除小鼠中粘液分泌量显著减少，而 AQP5 基因敲除哮喘小鼠支气管中粘液分泌则显著增多，表明 AQP4 和 AQP5 参与支气管哮喘的病理过程。野生型哮喘小鼠中，水通道蛋白 AQP4 表达出现下调现象，而 AQP5 敲除哮喘小鼠 AQP4 表达水平无显著下调，提示 AQP4 表达可能促进哮喘状态下的气道粘液分泌。因此AQP4 下调或缺失可能减少哮喘状态下的粘液分泌，减轻哮喘症状。AQP5 敲除小鼠哮喘状态下支气管粘液分泌增多可能与气道液体分布异常有关。 钙激活的氯离子通道(CACC)是近年发现的一个有争议的氯离子通道家族。mCLCA3 是 CACC家族成员之一，以往
31、研究提示 mCLCA3 表达上调在哮喘和囊性纤维化等呼吸系统疾病中与粘液细胞化生及粘液过度分泌密切相关。为研究 mCLCA3 蛋白的分子结构及在哮喘发生中的作用，我们通过原核表达 269aa mCLCA3 蛋白片段作为抗原制备了 mCLCA3 多克隆抗体，利用该抗体对支气管哮喘小鼠进行了一系列研究。结果发现 mCLCA3 在哮喘小鼠支气管杯状细胞的粘液颗粒上高表达。通过对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的免疫印记分析发现仅有约 90 kDa，的 mCLCA3蛋白在其中表达，未见全长的 mCLCA3 蛋白及其它的剪切形式存在。为了进一步研究 mCLCA3 蛋白的功能，我们制备了稳定表达 mC
32、LCA3 的真核细胞模型，利用已知的 CACC 通道激活剂和抑制剂，对 mCLCA3 蛋白的氯离子通道活性进行了分析，结果未能检测到氯离子通道活性。本研究结果支持 mCLCA3 不是氯离子通道的观点。呼吸系统上皮和内皮组织中的高效水转运机制对于维持呼吸道的正常生理功能是必不可少的。目前已知在呼吸系统中有 4 种水通道表达：AQP1，AQP3，AQP4，AQP5，其分布遍及鼻咽部、气道及肺组织。AQP1 主要在毛细血管内皮细胞和胸膜上表达；AQP3 主要在气道基细胞的基底边膜表达；AQP4只在气道上皮细胞表达；AQP5 在型肺泡顶膜上高表达，此外毛柱状细胞、支气管腺体细胞中也有表达。通过 AQP
33、1 和 AOP5 进行的渗透压驱动的跨细胞水转运是气室和毛细血管之间主要的水转运方式；AQP3、AQP4 主要参与气道内渗透压驱动的水转运。但是，除了发现 AQP5 敲除可是使呼吸道粘膜下浆液腺分泌量降低约 50外，这些水通道敲除对呼吸系统的正常生理功能并无显著影响。并且到目前为止，关于水通道蛋白在呼吸系统疾病中的作用研究几乎还是空白，仅有一篇文献报道 AQP5 敲除小鼠对乙酰胆碱诱导的气道过敏反应显著高于野生小鼠。 本课题通过卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型，对水通道蛋白在小鼠哮喘发生过程中的作用进行了系统研究。结果发现与野生型哮喘小鼠相比，AQP4 基因敲除小鼠中粘液分泌量显著减少，而 AQP5
34、 基因敲除哮喘小鼠支气管中粘液分泌则显著增多，表明 AQP4 和 AQP5 参与支气管哮喘的病理过程。野生型哮喘小鼠中，水通道蛋白 AQP4 表达出现下调现象，而 AQP5 敲除哮喘小鼠 AQP4 表达水平无显著下调，提示 AQP4 表达可能促进哮喘状态下的气道粘液分泌。因此AQP4 下调或缺失可能减少哮喘状态下的粘液分泌，减轻哮喘症状。AQP5 敲除小鼠哮喘状态下支气管粘液分泌增多可能与气道液体分布异常有关。 钙激活的氯离子通道(CACC)是近年发现的一个有争议的氯离子通道家族。mCLCA3 是 CACC家族成员之一，以往研究提示 mCLCA3 表达上调在哮喘和囊性纤维化等呼吸系统疾病中与粘
35、液细胞化生及粘液过度分泌密切相关。为研究 mCLCA3 蛋白的分子结构及在哮喘发生中的作用，我们通过原核表达 269aa mCLCA3 蛋白片段作为抗原制备了 mCLCA3 多克隆抗体，利用该抗体对支气管哮喘小鼠进行了一系列研究。结果发现 mCLCA3 在哮喘小鼠支气管杯状细胞的粘液颗粒上高表达。通过对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的免疫印记分析发现仅有约 90 kDa，的 mCLCA3蛋白在其中表达，未见全长的 mCLCA3 蛋白及其它的剪切形式存在。为了进一步研究 mCLCA3 蛋白的功能，我们制备了稳定表达 mCLCA3 的真核细胞模型，利用已知的 CACC 通道激活剂和抑制剂，对
36、 mCLCA3 蛋白的氯离子通道活性进行了分析，结果未能检测到氯离子通道活性。本研究结果支持 mCLCA3 不是氯离子通道的观点。呼吸系统上皮和内皮组织中的高效水转运机制对于维持呼吸道的正常生理功能是必不可少的。目前已知在呼吸系统中有 4 种水通道表达：AQP1，AQP3，AQP4，AQP5，其分布遍及鼻咽部、气道及肺组织。AQP1 主要在毛细血管内皮细胞和胸膜上表达；AQP3 主要在气道基细胞的基底边膜表达；AQP4只在气道上皮细胞表达；AQP5 在型肺泡顶膜上高表达，此外毛柱状细胞、支气管腺体细胞中也有表达。通过 AQP1 和 AOP5 进行的渗透压驱动的跨细胞水转运是气室和毛细血管之间主
37、要的水转运方式；AQP3、AQP4 主要参与气道内渗透压驱动的水转运。但是，除了发现 AQP5 敲除可是使呼吸道粘膜下浆液腺分泌量降低约 50外，这些水通道敲除对呼吸系统的正常生理功能并无显著影响。并且到目前为止，关于水通道蛋白在呼吸系统疾病中的作用研究几乎还是空白，仅有一篇文献报道 AQP5 敲除小鼠对乙酰胆碱诱导的气道过敏反应显著高于野生小鼠。 本课题通过卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型，对水通道蛋白在小鼠哮喘发生过程中的作用进行了系统研究。结果发现与野生型哮喘小鼠相比，AQP4 基因敲除小鼠中粘液分泌量显著减少，而 AQP5 基因敲除哮喘小鼠支气管中粘液分泌则显著增多，表明 AQP4 和 AQ
38、P5 参与支气管哮喘的病理过程。野生型哮喘小鼠中，水通道蛋白 AQP4 表达出现下调现象，而 AQP5 敲除哮喘小鼠 AQP4 表达水平无显著下调，提示 AQP4 表达可能促进哮喘状态下的气道粘液分泌。因此AQP4 下调或缺失可能减少哮喘状态下的粘液分泌，减轻哮喘症状。AQP5 敲除小鼠哮喘状态下支气管粘液分泌增多可能与气道液体分布异常有关。 钙激活的氯离子通道(CACC)是近年发现的一个有争议的氯离子通道家族。mCLCA3 是 CACC家族成员之一，以往研究提示 mCLCA3 表达上调在哮喘和囊性纤维化等呼吸系统疾病中与粘液细胞化生及粘液过度分泌密切相关。为研究 mCLCA3 蛋白的分子结构
39、及在哮喘发生中的作用，我们通过原核表达 269aa mCLCA3 蛋白片段作为抗原制备了 mCLCA3 多克隆抗体，利用该抗体对支气管哮喘小鼠进行了一系列研究。结果发现 mCLCA3 在哮喘小鼠支气管杯状细胞的粘液颗粒上高表达。通过对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的免疫印记分析发现仅有约 90 kDa，的 mCLCA3蛋白在其中表达，未见全长的 mCLCA3 蛋白及其它的剪切形式存在。为了进一步研究 mCLCA3 蛋白的功能，我们制备了稳定表达 mCLCA3 的真核细胞模型，利用已知的 CACC 通道激活剂和抑制剂，对 mCLCA3 蛋白的氯离子通道活性进行了分析，结果未能检测到氯离子通
40、道活性。本研究结果支持 mCLCA3 不是氯离子通道的观点。呼吸系统上皮和内皮组织中的高效水转运机制对于维持呼吸道的正常生理功能是必不可少的。目前已知在呼吸系统中有 4 种水通道表达：AQP1，AQP3，AQP4，AQP5，其分布遍及鼻咽部、气道及肺组织。AQP1 主要在毛细血管内皮细胞和胸膜上表达；AQP3 主要在气道基细胞的基底边膜表达；AQP4只在气道上皮细胞表达；AQP5 在型肺泡顶膜上高表达，此外毛柱状细胞、支气管腺体细胞中也有表达。通过 AQP1 和 AOP5 进行的渗透压驱动的跨细胞水转运是气室和毛细血管之间主要的水转运方式；AQP3、AQP4 主要参与气道内渗透压驱动的水转运。
41、但是，除了发现 AQP5 敲除可是使呼吸道粘膜下浆液腺分泌量降低约 50外，这些水通道敲除对呼吸系统的正常生理功能并无显著影响。并且到目前为止，关于水通道蛋白在呼吸系统疾病中的作用研究几乎还是空白，仅有一篇文献报道 AQP5 敲除小鼠对乙酰胆碱诱导的气道过敏反应显著高于野生小鼠。 本课题通过卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型，对水通道蛋白在小鼠哮喘发生过程中的作用进行了系统研究。结果发现与野生型哮喘小鼠相比，AQP4 基因敲除小鼠中粘液分泌量显著减少，而 AQP5 基因敲除哮喘小鼠支气管中粘液分泌则显著增多，表明 AQP4 和 AQP5 参与支气管哮喘的病理过程。野生型哮喘小鼠中，水通道蛋白 AQP4
42、 表达出现下调现象，而 AQP5 敲除哮喘小鼠 AQP4 表达水平无显著下调，提示 AQP4 表达可能促进哮喘状态下的气道粘液分泌。因此AQP4 下调或缺失可能减少哮喘状态下的粘液分泌，减轻哮喘症状。AQP5 敲除小鼠哮喘状态下支气管粘液分泌增多可能与气道液体分布异常有关。 钙激活的氯离子通道(CACC)是近年发现的一个有争议的氯离子通道家族。mCLCA3 是 CACC家族成员之一，以往研究提示 mCLCA3 表达上调在哮喘和囊性纤维化等呼吸系统疾病中与粘液细胞化生及粘液过度分泌密切相关。为研究 mCLCA3 蛋白的分子结构及在哮喘发生中的作用，我们通过原核表达 269aa mCLCA3 蛋白
43、片段作为抗原制备了 mCLCA3 多克隆抗体，利用该抗体对支气管哮喘小鼠进行了一系列研究。结果发现 mCLCA3 在哮喘小鼠支气管杯状细胞的粘液颗粒上高表达。通过对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的免疫印记分析发现仅有约 90 kDa，的 mCLCA3蛋白在其中表达，未见全长的 mCLCA3 蛋白及其它的剪切形式存在。为了进一步研究 mCLCA3 蛋白的功能，我们制备了稳定表达 mCLCA3 的真核细胞模型，利用已知的 CACC 通道激活剂和抑制剂，对 mCLCA3 蛋白的氯离子通道活性进行了分析，结果未能检测到氯离子通道活性。本研究结果支持 mCLCA3 不是氯离子通道的观点。特别提醒
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