1、抗菌药物敏感性试验的方法与细菌耐药检测数据盛京医院：张智洁2016.4.20,一、细菌的药敏试验,纸片扩散法 稀释法肉汤稀释法（常量、微量）琼脂稀释法 E-test法,1.纸片扩散法,接种物的准备：纯菌落，2ml无菌生理盐水，0.5麦氏浊度,纸片扩散法,接种平板：MH平板，菌悬液在15分钟内划平板，用无菌棉签，3个60度，1圈，15分钟内贴纸片。,纸片扩散法,贴纸片：手工，纸片分配器 孵育：(352），空气或CO2,纸片扩散法 结果,纸片扩散法的特点,简便，便宜，不同层次实验室均可正规操作，是目前推荐的临床试验室使用方法。检测的是抑菌环直径（mm),2.肉汤稀释法,药液的准备：256g/ml
2、128 64 32 0.25 0.125 0.06 13个梯度菌液的准备：0.5麦氏浊度=108CFU/ml稀释100倍成106，取10l= 104CFU 接种: 特点：工作量大，适用于菌量少，药物种类少的情况,结果,MIC：最小抑菌浓度，抑制细菌生长的最小浓度单位：g/ml 0.06 0.125 0.25 0.5 1 2 4 8 16 32 64 128 256,宏量肉汤稀释法（每管含药肉汤含量为25ml）,微量肉汤稀释法（每孔含药肉汤含量为0.1ml）,3.琼脂稀释法,药物在琼脂中，做成平板。 菌量：每点接种10l = 104CFU 特点：菌株多时做MIC较方便 结果：平板上是否出现肉眼可
3、见的菌落,8g/ml 4g/ml 2g/ml,MIC法的总体特点,较繁琐，但更准确，主要用于科研 ，测量的是 MIC(g/ml )旧:纸片扩散法 新:微量肉汤稀释法 (商品化),4.E-test,以纸片扩散法的操作方法获得MIC值的一种药敏试验。 操作上有纸片扩散法的优点，结果准确性可与稀释法媲美。 缺点：昂贵,结果,五、药敏结果的判读,MIC值或抑菌环直径药物的临界浓度（CLSI、EUCAST、FDA)临界浓度:又叫折点（breakpoint）。即根据抗菌药物抑制细菌生长所需要的MIC结合常用剂量时在人体内所能达到的血药浓度划分细菌对各种抗菌药物敏感和耐药的界限。,比较,药敏判定折点(bre
4、akpoint),纸片法获得的抑菌圈直径23mm,稀释法或E-test法 获得的MIC值为4mg/L,CLSI上查得头孢哌酮对大肠杆菌的折点为：R=21mm,S,CLSI上查得头孢哌酮对大肠杆菌的折点为：R=64mg/L,S=16mg/L,S,eg.（头孢哌酮 vs 大肠杆菌）,结果解释,敏感（susceptible）：表示测试菌能被测定药物常规剂量给药后在感染部位达到的药物浓度所抑制或杀灭，感染被治愈。 中介 (intermediate) : 指药物在体内生理浓集的部位或允许加大药物剂量治疗时有效；该范围还作为一缓冲区，避免由于微小技术误差导致的结果错误解释。 耐药（resistant）：表示测试菌不能被在体内感染部位所能达到的抗菌药物浓度所抑制，治疗无效。,盛京医院2015年统计数据,盛京医院2015年统计数据,盛京医院2015年统计数据,盛京医院2015年统计数据,盛京医院2015年统计数据,盛京医院2015年统计数据,盛京医院2015年统计数据,盛京医院2015年统计数据,盛京医院2015年统计数据,
