1、 文 章 编 号 (A rticle ID) : 1009 - 2137 (2005) 03 - 0386 - 05 论 著 雄 黄 对 急 性 白 血 病 细 胞 株 存 活 蛋 白 ( surv iv in)基 因 表 达 的 影 响 及 其 意 义肖 延 风 , 刘 雅 , 刘 陕 西 1 , 任 利 芬西 安 交 通 大 学 第 二 医 院 儿 科 ,西 安 710004; 1西 安 交 通 大 学 第 一 医 院 血 液 科 ,西 安 710061摘 要 为 了 研 究 雄 黄 对 白 血 病 细 胞 抗 凋 亡 基 因 存 活 蛋 白 ( survivin) 表 达 的 影 响 ,
2、以 白 血 病 细 胞 系 HL260和 Jurkat为 模 型 ,同 时 应 用 W estern blot法 和 免 疫 荧 光 法 检 测 survivin的 表 达 ;应 用 免 疫 组 织 化 学 SABC法 检 测 白 血 病 细 胞 系凋 亡 前 后 Fas、 caspase23的 表 达 。 结 果 表 明 :雄 黄 作 用 前 两 种 细 胞 系 survivin表 达 均 呈 阳 性 ; Jurkat细 胞 Fas阳 性 ,但无 caspase23表 达 ; HL260细 胞 株 均 无 Fas和 caspase23的 表 达 。 经 雄 黄 作 用 后 ,两 株 细 胞
3、系 survivin表 达 水 平 均 降低 ,以 HL260细 胞 株 降 低 显 著 ,呈 时 间 2浓 度 依 赖 关 系 。 雄 黄 作 用 后 HL260细 胞 caspase23表 达 转 为 阳 性 , Jurkat细 胞caspase23表 达 仍 为 阴 性 ; Fas表 达 在 Jurkat细 胞 稍 减 低 , HL260细 胞 仍 为 阴 性 。 结 论 :雄 黄 可 降 低 白 血 病 细 胞 sur2vivin的 表 达 ; survivin表 达 下 调 在 雄 黄 通 过 线 粒 体 途 径 促 进 细 胞 凋 亡 中 发 挥 重 要 作 用 。关 键 词 su
4、rvivin; Fas; caspase23;雄 黄 ;白 血 病中 图 分 类 号 R733171; R995 文 献 标 识 码 AEffect of Rea lgar on Expression of Surv iv in in L eukem ia Cell L ines andIts S ign if icanceX IAO Yan2Feng, L IU Ya, L IU Shan2Xi1 , REN L i2FenDepartment of Pediatrics, The Second Hosp ital, Xi an Jioatong University , Xi an 710
5、004, China; 1Department of Hematology, The FirstHosp ital, Xi an Jioatong university, Xi an 710061, ChinaAbstract To study the effect of realgar on exp ression of survivin in leukem ia cell lines, HL260 and Jurket cell lineswere used as in vitro models. The exp ression of survivin was detected by W
6、estern blot analysis and immunofluorescence,and the exp ressions of Fas and caspase23 were exam ined by immunohistochem istry. The results showed that the exp ressionof survivin was positive in the two cell lines. HL260 cells did not exp ress Fas and caspase23, and Jurket cells were Fas2positive and
7、 caspase23 was negative. Realgar induced a dose2 and time2dependent down2regulation of survivin exp ression inJurket cells, and especially in HL260. Caspase23 exp ression changed from negative to positive in HL260 cell, but there stillwas no exp ression in Jurket cell. It is concluded that survivin
8、exp ression level decreased during leukem ia cell apop tosisinduced by Realgar. The down2regulation of survivin exp ression may be an important mechanism in leukem ia cell apop tosisinduced by realgar through m itochondrial pathway.Key words survivin; Fas; caspase23; realgar; leukem iaJ Exp Hem atol
9、 2005; 13 (3) : 386 - 390已 证 实 砷 化 合 物 对 一 些 恶 性 血 液 病 及 实 体 瘤 具 有 良好 的 治 疗 效 果 ,对 其 作 用 机 制 的 研 究 近 年 来 受 到 人们 的 关 注 。 已 发 现 诱 导 肿 瘤 细 胞 凋 亡 是 砷 化 合 物 抗肿 瘤 的 重 要 机 制 ,但 其 诱 导 凋 亡 的 详 细 机 制 仍 不 清楚 。 存 活 蛋 白 ( survivin)是 一 种 新 发 现 的 凋 亡 抑 制蛋 白 ,属 于 凋 亡 抑 制 蛋 白 ( inhibitor of apop tosis p ro2tein, IAP
10、)家 族 ,是 一 种 肿 瘤 特 异 性 的 抑 制 凋 亡 因子 ,在 抑 制 肿 瘤 细 胞 凋 亡 以 及 肿 瘤 细 胞 浸 润 、 迁 移 中起 重 要 作 用 。 砷 化 合 物 对 survivin基 因 表 达 有 无 影响 尚 未 见 文 献 报 道 。 本 研 究 采 用 硫 化 砷 (雄 黄 )分 别作 用 于 急 性 粒 细 胞 白 血 病 细 胞 株 HL260和 急 性 T淋 巴 细 胞 白 血 病 细 胞 株 Jurkat,观 察 雄 黄 对 survivin以 及 凋 亡 通 路 上 的 重 要 因 子 Fas和 caspase23的 表达 的 影 响 ,探
11、讨 雄 黄 对 survivin基 因 表 达 的 影 响 以及 其 诱 导 细 胞 凋 亡 的 机 制 。材 料 和 方 法雄 黄 含 量 的 测 定 和 配 制先 将 雄 黄 细 磨 成 直 径 小 于 20 m的 微 粒 粉 ,再 按 文基 金 资 助 :该 课 题 为 陕 西 省 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 ( 2002C239) ;西安 交 通 大 学 科 研 基 金 资 助 项 目通 讯 作 者 :肖 延 风 ,副 教 授 ,在 读 博 士 . 电 话 : ( 029 ) 87679541. E2mail: xiaoyanfeng0639 sina. com2004 -
12、 05 - 13收 稿 ; 2004 - 12 - 20接 受683 中 国 实 验 血 液 学 杂 志 Journal of Experim ental Hem atology 2005; 13 (3) : 386 - 390献 1 所 述 酸 洗 水 飞 法 除 去 雄 黄 中 夹 杂 的 三 氧 化 二砷 及 杂 质 ,纯 化 的 雄 黄 经 过 X 线 衍 射 法 检 测 含A s4 S4 84% - 86% , A s2 S2 12% - 15%。 取 适 量 雄 黄微 粒 粉 置 于 不 含 小 牛 血 清 的 RPM I 1640培 养 液 中 ,在 电 磁 力 搅 拌 机 上
13、连 续 搅 拌 15小 时 ,用 0. 22 m的微 孔 滤 器 除 菌 ,分 装 4 保 存 ,同 时 取 样 用 原 子 吸 收光 谱 法 测 定 砷 原 子 浓 度 。 使 用 前 用 含 10%小 牛 血清 RPM I 1640培 养 液 稀 释 至 所 需 浓 度 。细 胞 培 养 及 处 理将 HL260、 Jurkat细 胞 株 置 于 含 10%小 牛 血 清 的RPM I 1640培 养 液 中 ,于 5% CO2 培 养 箱 37 培 养 。按 2 105 /m l的 起 始 浓 度 分 别 接 种 HL260、 Jurkat细胞 于 含 和 不 含 雄 黄 的 RPM I
14、 1640培 养 液 中 ,根 据 所加 雄 黄 溶 液 含 砷 浓 度 的 不 同 , 分 为 1 mol/L、 2 mol/L、 3 mol/L 3组 ,两 种 细 胞 各 设 1组 不 加 药作 为 对 照 。 将 培 养 瓶 置 5% CO2 培 养 箱 37 培 养 ,分 别 于 24、 48、 72小 时 收 取 细 胞 ,细 胞 收 获 后 制 备 细胞 涂 片 和 细 胞 蛋 白 裂 解 液 。surv iv in基 因 表 达 的 检 测免 疫 荧 光 方 法 检 测 su rvivin表 达 PBS振 洗 细 胞 涂片 后 ,滴 加 小 鼠 抗 人 survivin单 克
15、隆 抗 体 ( 1 25稀释 ) ,湿 盒 内 37 孵 育 60分 钟 ;取 出 后 ,恢 复 至 室温 ,滴 加 马 抗 小 鼠 荧 光 标 记 二 抗 (1 40稀 释 ) , 50%甘 油 2PBS封 片 剂 封 片 ;立 即 荧 光 显 微 镜 下 观 察 表 达结 果 。 胞 浆 荧 光 显 色 占 胞 浆 总 面 积 的 比 例 5%判断 为 阳 性 。 每 批 免 疫 荧 光 均 设 定 阳 性 和 阴 性 对 照 。W estern blot法 检 测 su rvivin 的 表 达 细 胞 蛋 白 裂解 液 加 上 样 缓 冲 液 (1 4) ,沸 水 浴 5分 钟 ;取
16、蛋 白 样品 各 10 l经 上 样 缓 冲 液 处 理 后 上 样 , 120 V电 泳 约1小 时 ;在 转 移 缓 冲 液 中 进 行 电 转 移 至 NC膜 上 ;转移 完 毕 后 ,将 NC膜 在 丽 春 红 染 液 中 染 色 2分 钟 ,观察 电 泳 及 转 移 效 果 ;将 膜 封 入 塑 料 袋 中 ,加 入 羊 抗 兔survivin单 克 隆 抗 体 (1 200稀 释 ) , 4 过 夜 ;加 入 二抗 (1 500稀 释 ) ,在 ECL反 应 物 中 反 应 2分 钟 后 ,压 X2线 片 , 5 - 10分 钟 ,之 后 显 影 定 影 。免 疫 组 织 化 学
17、( SABC )方 法 检 测 Fa s和 ca spa se23表 达PBS振 洗 细 胞 涂 片 ,滴 加 即 用 型 正 常 山 羊 血 清 ,置 湿盒 中 30分 钟 ;滴 加 兔 抗 人 Fas/caspase23单 克 隆 抗体 (1 100稀 释 ) ,湿 盒 内 37 孵 育 60分 钟 ;滴 加 即用 型 山 羊 抗 兔 生 物 素 化 二 抗 ,湿 盒 内 37 孵 育 30分 钟 ;滴 加 碱 性 磷 酸 酶 生 物 素 化 链 霉 卵 白 素 ( 1 200稀 释 ) ,湿 盒 内 37 孵 育 20分 钟 ;滴 加 NBT显 色 液(1 20稀 释 ) ,湿 盒 内
18、37 孵 育 15分 钟 ;滴 加 核 固红 复 染 ;干 燥 后 ,水 性 封 片 剂 封 片 ;显 微 镜 下 观 察 结果 。 每 批 免 疫 组 织 化 学 染 色 均 设 定 阳 性 和 阴 性 对照 。 结 果 判 断 标 准 :在 高 倍 镜 下 根 据 染 色 面 积 所 占胞 浆 (胞 膜 )比 例 分 为 : 0分 75%。 根 据阳 性 细 胞 的 染 色 深 度 分 为 : 0分 为 无 染 色 ; 1分 为 淡黄 色 ; 2分 为 黄 色 ; 3分 为 棕 黄 色 。 将 两 者 结 合 综 合判 断 ,若 得 分 2分 为 阳 性 , 2分 为 阴 性 。结 果两
19、种 方 法 检 测 Jurka t和 HL 260细 胞 株 surv iv in表达应 用 免 疫 荧 光 法 和 W estern blot法 检 测 不 含 雄 黄 培养 液 的 对 照 瓶 Jurkat和 HL260细 胞 株 survivin的 表达 ,结 果 均 为 阳 性 。 W estern blot法 检 测 结 果 见 图 1、图 2。 W estern blot法 结 果 显 示 , Jurket细 胞 株 在 3 mol/L砷 原 子 浓 度 的 雄 黄 培 养 液 培 养 72小 时 时F igure 1. Effect of rea lgar on expressi
20、on of surv iv in in Jur2ka t by W estern blot ana lysis. J0 wa s con trol. Ja1 and Ja3were cultured w ith 1 m ol/L for 24 and 72 hours. Jb1、 Jb2and Jb3 were cultured w ith 2 m ol/L for 24、 48 and 72hours. Jc1、 Jc2 and Jc3 were cultured w ith 3 m ol/L for24、 48 and 72 hours.F igure 2. Effect of rea l
21、gar on expression of surv iv in in HL 260 by W estern blot ana lysis. H0 wa s con trol. Ha1、 Ha2 andHa3 were cultured w ith 1 m ol/L for 24、 48 and 72 hours.Hc1、 Hc2 and Hc3 were cultured w ith 3 m ol/L for 24、 48and 72 hours783雄 黄 对 急 性 白 血 病 细 胞 株 存 活 蛋 白 ( survivin)基 因 表 达 的 影 响 及 其 意 义survivin的
22、表 达 明 显 减 弱 ,而 其 它 组 变 化 不 明 显 (图1) ; HL260细 胞 株 则 表 现 出 随 浓 度 和 时 间 增 大 sur2vivin表 达 明 显 减 弱 趋 势 (图 2)。 免 疫 荧 光 方 法 检测 发 现 ,两 种 细 胞 株 在 3 mol/L砷 原 子 浓 度 的 雄 黄培 养 液 培 养 72h时 其 荧 光 表 达 明 显 减 弱 ,而 其 它 8个 组 的 荧 光 表 达 减 弱 不 明 显 (图 3、 4)。F igure 3. Positive expression of surv iv in in HL 260 beforetrea t
23、m en t w ith rea lgar ( 100)F igure 4. D ecrea se of surv iv in expression in HL 260 aftertrea tm en t w ith rea lgar ( 100)Jurka t和 HL 260细 胞 株 Fa s的 表 达常 规 培 养 的 Jurkat细 胞 株 Fas表 达 阳 性 (图 5A ) ,HL260细 胞 株 则 无 Fas表 达 (图 6)。 在 加 雄 黄 的 培养 后 , Jurkat细 胞 株 Fas表 达 在 3 mol/L培 养 72小时 时 减 弱 (图 5B ) ;而 HL26
24、0细 胞 株 的 9组 均 无 Fas表 达 。Jurka t和 HL 260细 胞 株 ca spa se23的 表 达未 加 雄 黄 培 养 时 两 个 细 胞 株 均 无 caspase23的 表 达 。加 不 同 浓 度 雄 黄 培 养 48 小 时 后 , HL260 细 胞 株caspase23表 达 转 为 阳 性 ,尤 以 3 mol/L培 养 72小时 时 着 色 明 显 (图 7) ,而 Jurkat细 胞 株 caspase23的表 达 仍 为 阴 性 。F igure 5. Expression of Fa s in Jurka t and HL 260 lines.
25、A:Positive expression of Fa s in Juka t before trea tm en t w ith re2a lgar ( 100) B: D ecrea se of Fa s expression in HL 260 aftertrea tm en t w ith rea lgar ( 100)F igure 6. Nega tive expression of Fa s in HL 260 ( 100)883 中 国 实 验 血 液 学 杂 志 J Exp Hem atol 2005; 13 (3)F igure 7. Positive expression
26、 of ca spa se in HL 260 aftertrea tm en t w ith rea lgar( 100)讨 论应 用 免 疫 组 织 化 学 和 原 位 杂 交 方 法 证 实 ,与 其 它IAP在 各 种 正 常 成 人 组 织 中 的 广 泛 表 达 不 同 , sur2vivin除 了 在 胎 盘 和 胸 腺 组 织 中 有 微 弱 表 达 外 ,在 其它 正 常 组 织 中 检 测 不 到 ,而 在 胎 儿 不 同 组 织 中 均 可明 显 检 测 到 。 但 是 在 常 见 人 类 肿 瘤 如 肺 癌 、 结 肠 癌 、乳 腺 癌 、 前 列 腺 癌 等 癌 组
27、织 中 均 可 检 测 到 survivin表 达 2 。 可 见 survivin表 达 在 胚 胎 发 育 阶 段 起 着 某些 重 要 作 用 ,在 正 常 成 人 组 织 中 survivin处 于 静 止状 态 ;而 在 恶 性 组 织 中 survivin处 于 失 控 的 表 达 状态 , survivin表 达 与 肿 瘤 细 胞 不 凋 亡 、 肿 瘤 的 发 生 有密 切 关 系 。 本 研 究 观 察 了 急 性 粒 细 胞 白 血 病 和 急 性淋 巴 细 胞 白 血 病 的 细 胞 株 survivin 表 达 , W esternblot和 免 疫 荧 光 两 种
28、方 法 均 显 示 阳 性 结 果 ,这 表 明survivin异 常 表 达 参 与 了 急 性 白 血 病 细 胞 抗 凋 亡 、 恶性 增 殖 的 发 病 过 程 。调 节 和 启 动 细 胞 凋 亡 途 径 是 一 些 抗 肿 瘤 药 物 的作 用 机 制 ,这 些 促 凋 亡 药 物 对 肿 瘤 特 异 性 凋 亡 抑 制因 子 survivin有 何 影 响 ,目 前 报 道 的 文 献 尚 少 。 Mo2riai等 3 研 究 发 现 , HL260细 胞 株 用 全 反 式 维 甲 酸和 肿 瘤 坏 死 因 子 治 疗 5天 后 , survivin表 达 水 平 较 治疗 前
29、 的 HL260细 胞 下 降 至 14. 1% ;另 有 研 究 报 道 了顺 铂 和 足 叶 乙 苷 诱 导 肺 癌 细 胞 凋 亡 中 survivin的 变化 ,结 果 显 示 化 疗 组 细 胞 凋 亡 率 和 survivin表 达 抑制 率 显 著 高 于 对 照 组 4 。 本 研 究 观 察 了 中 药 雄 黄(主 要 成 分 A s4 S4 )作 用 于 HL260和 Jurkat细 胞 株 后survivin表 达 的 情 况 。 结 果 显 示 ,随 着 雄 黄 作 用 浓 度的 增 加 及 作 用 时 间 的 延 长 , HL260和 Jurkat细 胞 株survi
30、vin的 表 达 水 平 降 低 ,呈 现 时 间 、 剂 量 依 赖 效 应 ;两 个 细 胞 系 间 比 较 ,以 粒 系 细 胞 株 HL260 survivin表达 降 低 更 为 显 著 。 临 床 研 究 已 证 实 ,砷 化 合 物 在 治疗 急 性 早 幼 粒 细 胞 白 血 病 以 及 其 它 髓 系 白 血 病 有效 ,而 对 淋 巴 细 胞 系 白 血 病 无 明 显 疗 效 。 本 研 究 的结 果 雄 黄 在 急 性 粒 系 白 血 病 细 胞 中 下 调 survivin表达 明 显 较 急 性 淋 巴 细 胞 白 血 病 显 著 与 临 床 研 究 有 相符 之
31、处 ,提 示 survivin在 砷 化 合 物 诱 导 白 血 病 细 胞凋 亡 机 制 中 可 能 发 挥 重 要 作 用 。细 胞 凋 亡 的 主 要 信 号 转 导 通 路 分 为 细 胞 凋 亡 的线 粒 体 依 赖 性 途 径 (或 称 细 胞 色 素 C凋 亡 途 径 )和死 亡 受 体 途 径 (或 称 Fas/FasL途 径 )。 一 些 研 究 发现 ,砷 合 化 物 主 要 通 过 线 粒 体 途 径 激 活 caspase来 诱导 肿 瘤 细 胞 凋 亡 ;对 A s2 O3 极 为 敏 感 的 NB4细 胞 表面 不 表 达 Fas,用 Fas抗 体 和 FasL 抗
32、 体 也 不 影 响A s2 O3 诱 导 的 凋 亡 5 。 本 研 究 进 一 步 观 察 雄 黄 诱 导急 性 淋 巴 细 胞 白 血 病 和 急 性 粒 细 胞 白 血 病 细 胞 株 凋亡 中 caspase和 Fas的 差 异 性 表 达 ,结 果 发 现 Jurkat细 胞 株 高 表 达 Fas,它 对 死 亡 受 体 介 导 的 凋 亡 敏 感 ,雄 黄 作 用 后 Jurkat细 胞 survivin表 达 下 调 不 显 著 ,caspase23始 终 未 被 激 活 ;而 HL260细 胞 株 无 Fas表达 ,雄 黄 作 用 后 HL260细 胞 survivin的
33、表 达 水 平 下调 较 明 显 ,同 时 caspase23表 达 水 平 升 高 。 进 一 步 表明 雄 黄 诱 导 细 胞 凋 亡 可 能 不 通 过 Fas途 径 ,急 性 淋巴 细 胞 白 血 病 和 急 性 非 淋 巴 细 胞 白 血 病 对 砷 化 合 物治 疗 效 果 的 不 同 可 能 与 其 Fas表 达 的 差 异 有 关 。Survivin可 能 参 与 了 砷 化 合 物 通 过 线 粒 体 途 径 诱 导凋 亡 的 调 控 机 制 。已 知 线 粒 体 介 导 的 凋 亡 由 caspase29驱 动 ,死 亡受 体 介 导 者 由 caspase28, 10驱
34、动 ,两 条 途 径 在 下 游效 应 子 caspase23, 7 处 会 合 。 Survivin 具 有 抑 制caspase酶 活 性 的 作 用 。 有 研 究 证 明 , survivin作 用于 各 个 凋 亡 途 径 的 汇 合 点 ,即 直 接 抑 制 终 末 效 应 蛋白 caspase23和 caspase27 6 。 另 有 学 者 通 过 X光 衍射 分 析 survivin的 结 构 后 认 为 survivin不 能 直 接 作用 于 caspase2 7 ;而 认 为 survivin可 能 是 通 过 抑 制caspase29活 性 发 挥 其 抗 凋 亡 作
35、 用 8 。 Survivin抑 制凋 亡 的 另 一 机 制 可 能 是 与 周 期 蛋 白 激 酶 cdk4、p34cdc2相 互 作 用 阻 断 凋 亡 信 号 转 导 通 路 ,抑 制caspase23的 活 性 ,阻 断 线 粒 体 释 放 cyt2c从 而 抑 制 细胞 凋 亡 9 。 这 些 研 究 说 明 survivin对 两 条 凋 亡 途 径均 有 抑 制 ,但 对 线 粒 体 介 导 的 凋 亡 抑 制 作 用 更 为 明显 。 本 研 究 结 果 进 一 步 印 证 了 这 一 问 题 。 雄 黄 可 降低 细 胞 survivin的 表 达 ,其 表 达 下 调 在
36、 雄 黄 通 过 线粒 体 途 径 促 进 细 胞 凋 亡 时 发 挥 重 要 作 用 。983雄 黄 对 急 性 白 血 病 细 胞 株 存 活 蛋 白 ( survivin)基 因 表 达 的 影 响 及 其 意 义参 考 文 献1 郭 小 庄 . 有 毒 中 草 药 大 词 典 ,天 津 :天 津 技 术 翻 译 出 版 公 司 ,1992, 552 - 5562 Monzo M, Rosell R, Felip FE, et al. A novel anti2apop tosis gene:re2exp ression of survivin messenger RNA as a p
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41、diated cell death. Oncogene, 2000; 19: 1346 - 1353第 10届 全 国 实 验 血 液 学 会 议 征 文 通 知2005年 11月 3 6日 西 安 市主 办 者 :中 国 病 理 生 理 学 会 实 验 血 液 学 专 业 委 员 会承 办 者 :第 四 军 医 大 学 西 京 医 院会 议 中 心 议 题 :干 细 胞 工 程 与 造 血 干 细 胞 发 生 学 ;成 体 干 细 胞 的 生 物 学 和 临 床 应 用 ;造 血 干 祖 细 胞 移 植 、 细 胞治 疗 、 免 疫 治 疗 的 实 验 或 临 床 的 新 探 索 ;造 血
42、干 祖 细 胞 移 植 并 发 症 的 发 病 机 理 和 新 治 疗 ; T细 胞 不 同 亚 群 分 别 调 控GVHD与 GVL的 机 理 ;脐 带 血 临 床 移 植 经 验 ;各 类 血 液 病 的 发 病 机 理 ;各 类 血 液 病 的 诊 断 治 疗 的 新 探 索 ;血 栓 与 出血 疾 患 的 基 础 和 临 床 的 新 探 索 ;细 胞 凋 亡 机 理 和 调 控 ;细 胞 信 号 传 导 机 理 和 调 控 ;分 子 生 物 学 /分 子 遗 传 学 的 实 验新 技 术 及 临 床 应 用 ;分 子 免 疫 学 在 血 液 病 的 临 床 应 用 ;移 植 免 疫 学
43、 与 HLA检 测 新 技 术 ,造 血 干 细 胞 的 动 物 体 内 检测 技 术 ,造 血 细 胞 低 温 生 物 学 和 保 存 技 术 等 等 。来 稿 要 求 :在 国 内 杂 志 上 未 曾 正 式 发 表 过 的 研 究 报 告 的 详 细 摘 要 ,限 1500 - 2000字 ,不 要 全 文 , 不 要 综 述 ,请附 软 盘 。 稿 件 上 请 注 明 作 者 姓 名 、 汉 语 拼 音 和 作 者 详 细 邮 址 、 邮 编 、 电 话 和 e2mail邮 址 。 用 email投 稿 时 ,请 将 摘 要以 word文 档 按 附 件 形 式 发 送 。联 系 及
44、投 稿 地 址 :西 安 市 新 城 区 长 乐 西 路 17号 第 四 军 医 大 学 西 京 医 院 血 液 科 陈 协 群 教 授 、 主 任 . 邮 编 710032投 稿 截 止 时 间 : 2005年 7月 10日联 系 人 : 梁 蓉 、 张 永 请 、 朱 华 锋电 话 : 029 - 83375199, 029 - 83375207, 029 - 83375205传 真 : 029 - 83375199email xiequnchen sina. comxueyeke fmmu. edu. cn热 诚 欢 迎 国 内 外 学 者 踊 跃 参 与 ,踊 跃 投 稿093 中 国 实 验 血 液 学 杂 志 J Exp Hem atol 2005; 13 (3)
