1、 蒲薏颗粒药效学实验研究作者：迟明艳 黄勇 王爱民 兰燕宇 王永林【摘要】 目的对蒲薏颗粒进行药效学研究。方法观察蒲薏颗粒对荷瘤(H22)小鼠增效减毒作用，对艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率的影响，对体外培养人食管癌(ECA-109)细胞的影响，对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果蒲薏颗粒能增强化疗药物抑瘤作用、拮抗化疗药物对 WBC 及骨髓有核细胞的抑制;对艾氏腹水癌小鼠生存时间有明显的延长作用;并显著抑制 ECA-109 细胞增殖的细胞毒作用; 同时该药具有提高小鼠细胞免疫功能的作用。结论蒲薏颗粒具有抗癌和增强免疫作用。 【关键词】 蒲薏颗粒; 抗肿瘤; 免疫增强蒲薏颗粒由蒲公英、生薏苡仁等
2、5 味中药组成，具有清热解毒、活血化瘀、补益气血的功效，临床用于肿瘤放、化疗所致的气血两虚有很好的疗效，我们根据其功能主治进行了有关的主要药效学实验。1 材料1.1 动物 KM 小鼠，雄性，体重 1822 g;SD 大鼠，雄性，体重 180210 g，均由贵阳医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(黔)2002-0001。BALB/C 小鼠(SPF 级) ，雄性，体重1620 g，简阳市简城比尔动物养殖场提供，动物合格证号：0011159。1.2 瘤株 小鼠肝癌 H22：由华西医科大学肿瘤研究所提供; 艾氏腹水癌(EAC) 细胞，由重庆医科大学生物工程系超声研究所提供。人食管癌细胞(E
3、CA-109)：由中科院生命科学研究所提供。1.3 药物 蒲薏颗粒(PY) 由贵州渝生制药有限公司提供，每克颗粒含 4g 生药，批号：20030306;环磷酰胺(CTX) ，上海华联制药有限公司生产，批号：031001;5-氟尿嘧啶(5-Fu)，上海旭东海普药业有限公司生产，批号：030405;噻唑蓝(MTT)：Sigma 公司出品，批号：206-069-5 。2 方法与结果2.1 蒲薏颗粒对小鼠肝癌 H22 化疗的增效减毒作用13在无菌条件下于小鼠右腋皮下接种 2107/ml 的 H22 细胞悬液，0.2 ml/ 只，24 h 后按体重随机分为模型对照组，5-Fu 组，PY 高、低剂量组，5
4、-Fu 加 PY 高剂量组，5-Fu 加 PY 低剂量组。各组小鼠按表 1 的剂量灌胃(ig)给药， 1 次/d，连续 10 d，模型对照组给予等量生理盐水(NS)。停药次日称重后，摘眼球取血作外周血象检查，脱颈椎处死动物，剖取并称重瘤块，计算抑瘤率。剥离小鼠右股骨，用 1640 培养液通过针头反复冲洗骨髓并测定洗液中骨髓有核细胞数。见表 1。肿瘤抑制率(%)=(1-实验组平均瘤重对照组平均瘤重)100%由表 1 结果可见，蒲薏颗粒与 5-Fu 合用，可使 5-Fu 的肿瘤抑制率明显提高;白细胞、骨髓有核细胞计数也有显著性差异(P0.05 或 P0.01);提示蒲薏颗粒具有增效减毒的作用。表
5、1 对小鼠肝癌 H22 化疗的增效减毒作用与模型对照组比较，*P0.05，*P0.01; 与 5-Fu 组比较，#P0.05，#P0.01;n=102.2 蒲薏颗粒对艾氏腹水癌(EAC)小鼠生命延长率的影响 4 5于无菌条件下小鼠腹腔常规接种艾氏腹水癌小鼠(1108/ml)的细胞悬液，瘤液 0.2 ml/只，接种后 24 h，按体重随机分为 5 组：模型对照组，CTX 组(20 mg/kg)，PY 高、中、低剂量组，各组小鼠按表 2 的剂量 ig 给药，1 次/d，连续 10 d，模型对照组给予等量 NS。记录存活天数，计算生命延长率，比较各组间差异。结果见表 2。生命延长率(%)=给药组平均
6、生存时间 -对照组平均生存时间对照组平均生存时间100%表 2 蒲薏颗粒对艾氏腹水癌(EAC) 小鼠生命延长率的影响由表 2 结果可见，蒲薏颗粒高、中、低剂量组 EAC荷瘤小鼠生存时间与模型对照组比较均有显著差异,生命延长率最高达 50%以上,表明该药对艾氏腹水癌小鼠生存时间有明显的延长作用。2.3 对体外培养人食管癌 (ECA-109)细胞的影响1 取大鼠 30只，随机分为对照组(NS 10 ml/kg)、环磷酰胺组 (20 mg/kg)、蒲薏颗粒组(12 g/kg)。各组动物分别 ig 给药，1 次/d ，连续 7 d。末次 ig后 2 h 乙醚麻醉，无菌条件下股动脉取血，4 2 500
7、r/min 离心 25 min，吸取血清，同组血清混匀，以 0.22 m微孔滤膜正压过滤除菌，各组保留部分全血清，其余血清用 1 640 分别配成含鼠血清60%， 30%，15%的培养基，-40保存备用。取在对数生长期的人食管癌细胞标准株(ECA-109)，用胰酶消化后，稀释成 1105 个/ml，台盼蓝染色，检测活细胞达 95%以上。分别将肿瘤细胞接种于96 孔板，每孔 100 l，培养 24 h 后，观察细胞贴壁后，分别换成含不同浓度大鼠血清培养基，每组 10 个平行孔。培养 24 h，每孔内加入 5 mg/ml MTT10 l，继续培养 4 h，弃去培养孔内培养基，每孔加入二甲基亚砜 1
8、00 l，待蓝色结晶完全溶解后，用酶标仪(波长 490 nm)测定各孔吸光度(A)。见表 3。细胞毒活性(%)=(1-实验组 OD 值对照组 OD 值)100% 表 3 含药血清对 ECA-109 细胞的细胞毒活性与相应浓度对照组鼠血清比较,*P0.05，*P0.01;n=10与相应血清浓度的对照组比较，蒲薏颗粒各剂量组的 OD 值明显减小，差异显著(P0.05，P0.01)，高剂量组细胞毒活性大于 20%。显示蒲薏颗粒有显著的抑制 ECA-109 细胞增殖的细胞毒作用。2.4 对荷瘤(S180)小鼠细胞免疫功能的影响 BALB/C 小鼠，在无菌条件下，接种 S180 细胞悬液，0.2 ml/
9、只，接种后 24 h，分组，给药方法见表 4。分别于给药的第 3 天和第 6 天动物皮下注 7%的2.4-二硝基氯苯丙酮液 0.02 ml/只致敏。于第 1 次致敏的第 10 天，动物一侧耳用 1%的 2.4-二硝基氯苯甘油溶液 0.02 ml 进行涂布攻击，另侧耳作对照，24 h 后处死动物，剪下两耳，打孔器取耳片，称重，以左右两耳片的重量差作为肿胀度，比较各组间差异。同时取胸腺、脾脏称重，计算胸腺指数和脾脏指数。见表 4。由表 4 结果可见，蒲薏颗粒可使荷瘤小鼠降低的迟发型超敏反应水平、胸腺指数和脾脏指数明显改善，具有提高荷瘤小鼠的细胞免疫水平作用。表 4 对荷瘤(S180)小鼠细胞免疫功
10、能的影响与模型对照组比较，*P0.05，*P0.013 讨论“蒲薏颗粒 ”处方为贵州省民间中医祖传经验方，临床应用五十余年，由蒲公英、薏苡仁等 5 味药组成。方中蒲公英清热解毒、消肿散结，利尿通淋。现代药理学研究其主要成分蒲公英多糖是一种免疫促进剂，其抗癌活性与免疫激活效果有关6;薏苡仁清热排脓、健脾渗湿，伸筋除痹痛，其中的薏苡仁内酯能抑制艾氏腹水癌，而且能参与机体免疫功能，提高机体的免疫监视7。方中其他 3 味药：何首乌、灵芝、三棱则扶正以助君臣药的祛邪之功。本实验结果也表明，蒲薏颗粒确有抗癌和免疫增强作用，从而在实验研究上为蒲薏颗粒治疗恶性肿瘤提供了理论依据,同时印证了蒲薏颗粒的临床疗效。【
