1、 芹菜对小鼠精子运动参数的亚急性影响作者：李学平 李洪波 李慧 高见 麻继源 党瑜慧 李芝兰【摘要】 目的 探讨芹菜汁对成年雄性小鼠精子运动参数的影响。方法 将 40 只昆明种雄性小鼠，按体重随机分为 4 组,阴性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。每天定时给阴性对照组 0.3 ml 生理盐水灌胃，各剂量组以 0.3 ml 不同浓度芹菜汁灌胃，于灌胃 56 d处死动物。采用伟力精子检测系统检测精子运动参数。 结果 高剂量组 b 级精子、精子活力及精子活率增加，d 级精子降低，与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05); 精子密度有降低的趋势，但与对照组比较，差异无统计学意义(P0.05);
2、高剂量组精子平均路径速度(VAP)、曲线速度(VCL)明显升高，与对照组比较，差异均有统计学意义(P0.05); 中、高剂量组精子侧摆幅度 (ALH)增大，与对照组比较，差异有统计学意义(P0.05); 高剂量组精子鞭打频率(SCF)降低，与对照组比较，差异有统计学意义(P0.05)。 结论 本次实验浓度的芹菜汁有降低精子密度的趋势，但可增加精子“动能”和提高精子运动能力。 【关键词】 芹菜汁 ;灌胃;精子运动参数;计算机辅助精液分析; 亚急性实验【Abstract】 Objective To explore how celery juice affects motility paramete
3、rs of adult male mice sperm. Methods 40 male Kunming mice were randomly divided into four groups according to body weight: negative control group, lowdose group, medium dose group, and highdose group. The negative control group was lavaged with 0.3 ml of saline regularly every day. Each dose group w
4、as administered 0.3 ml of celery juice of different concentration. After 56 days of intragastric administration, all animals were killed. WeiLi sperm detection system was used to measure sperm motility parameters. Results Sperm motility, b class sperm, and living rate of sperm in the highdose group
5、increased and d class decreased compared with the control group (all Ps0.05). Sperm density had the tendency of decrease, but there was no statistical significances compared with the control group. The average path velocity (VAP) and curve speed (VCL) in the high dose group were significantly increa
6、sed, compared with the control group (all P0.05). The ALH of the medium and the highdose group increased when compared with the control group (P0.05). The SCF in the highdose group decreased, compared with the control group (P0.05). Conclusion Celery juice in experimental concentrations could lower
7、sperm density in some extent, but increase “kinetic energy” of sperm and to raise the capacity of sperm motility.【Key words】 Celery juice; Lavage; Mouse sperm motility marameters; Computer aided sperm analyse; Subacute experiment芹菜既具有较高的营养价值，又具有广泛的药用价值，但也有报道1 ，芹菜可以抑制睾丸酮的生成，从而会减少精子数量，甚至到难以受孕的程度，且这种情况
8、在停菜后几周会恢复正常。本研究借助计算机辅助精液分析技术(computer aided sperm analyse, CASA)对芹菜汁灌胃 56 d 雄性小鼠的精子运动参数进行检测，探讨芹菜汁对小鼠精子运动参数的影响。材料与方法一、材料1.试验动物：昆明种成年健康雄性小鼠 40 只，体重 2936 g ,周龄7 周，购于甘肃中医学院试验动物中心。动物合格证号为：scxk(甘 )200400060000183。实验室合格证号：scxk(甘)200400060000081。2.芹菜汁的制备：称取市售的芹菜(apium graveolens，celery,旱芹)，摘取黄叶，洗净、晾干、切碎、称重(
9、JA3003N 电子称，上海精密科学仪器有限公司生产)7 025 g，采用榨汁机分次粉碎榨汁，用 4 层消毒纱布过滤菜汁，除去杂质，共得芹菜汁 4 603 ml;然后将原液 665 ml 封存、冷冻备用，为低剂量组，浓度约为 1.53 g/ml;将其余芹菜汁以 20 ml 为单位分别放入直径 9 cm 的平皿中，然后将平皿置于 50 水浴箱(DK 600S 型三用恒温水浴箱，上海精宏实验设备有限公司生产)中分别蒸发到原体积的 1/2 和 1/4，待冷却后封存、冷冻备用，得中剂量组，浓度约为 3.06 g/ml 和高剂量组，浓度约为6.12 g/ml。二、方法1.动物分组及给药： 40 只成年健
10、康 SPF 级昆明种雄性小鼠，按体重随机分为阴性对照组(10 只)、低剂量组(10 只) 、中剂量组(10只)、高剂量组(10 只)。动物饲养在甘肃中医学院中心实验室的 SPF级实验室内，均给予普食喂养。每天早晨 830 给阴性对照组以 0.3 ml 生理盐水灌胃，各剂量组以 0.3 ml 不同浓度的芹菜汁灌胃，连续灌胃 56 d 后，称重，颈椎脱臼法处死小鼠。分离肝脏、肾脏、睾丸和附睾，分别称重并计算脏器系数(脏器系数= 脏器湿重/ 动物体重)。2. 精子运动参数的测定:脱臼处死小鼠，立即分离左侧附睾，放入盛有 1 ml 生理盐水 (0.86 %)的平皿中，用眼科剪横向剪开 3 个切口，置于
11、 37 水浴箱中 30 min，让精子自由游出。取 10 l 精子悬液,采用 WLJY9000 型伟力彩色精子质量检测系统(北京伟力新世纪科技发展有限公司生产)进行参数测定。(1) 精子密度。每毫升精液标本中的精子数(109/ml)。(2) 活动率。样品精液中运动精子占精子总数的百分率，按精子运动方式可分为 4 级。a 级精子指快速前向运动，快速前向运动率为样品中 a 级精子占精子总数的百分率 ;b 级精子指慢或呆滞的前向运动，慢或呆滞的前向运动率为样品中 b 级精子占精子总数的百分率;c 级精子指非前向运动，非前向运动率为样品中 c 级精子占精子总数的百分率;d 级精子指不动，不动率为样品中
12、 d 级精子占精子总数的百分率。样品中(a 级+b 级)精子占精子总数的百分率为活力，样品中(a 级+b 级+c 级)精子占精子总数的百分率为活率。(3) 精子运动速度参数。平均路径速度(VAP)。精子沿轨迹曲线行走的平均速度(m/s); 曲线速度(VCL)。精子头部实际行走的轨迹路径速度(m/s); 直线速度(VSL) 。精子头部呈直线移位的前向运动速度(m/s)。(4) 精子运动方式参数。直线性(LIN) 。表明精子实际的行走路线的曲折程度(%);前向性(STR)。表明精子平均移动轨迹的曲折程度(%);摆动性(WOB)。表明精子实际运动轨迹相对其平均路径摆动的程度(%)。(5) 精子空间位
13、移程度参数。鞭打频率(BCF) 。精子头部跨离精子运动路径的频率(Hz);侧摆幅度(ALH)。实际运动轨迹相对平均移动轨迹的偏离程度(m);平均移动角度(MAD) 。精子头沿其曲线轨迹瞬间转折角度的时间平均绝对值()。3.统计学处理：数据均录入 SPSS15.0 软件，结果以s 表示，并应用方差分析进行统计学检验。结 果一、小鼠体重变化情况灌胃期间小鼠体重持续增长，各剂量组与对照组比较，体重增长的幅度略小，经方差分析，差异有统计学意义(F=3.32，P0.05)，但组间两两比较，差异均无统计学意义(P0.05)，见表 1。表 1 小鼠体重增长比较二、芹菜对小鼠脏器系数的影响各组之间肾脏系数、睾
14、丸系数和附睾重量，组间比较，差异均无统计学意义(P0.05);肝脏重量的变化较大，趋势随着芹菜汁灌胃剂量的增高，肝脏重量有逐渐增大的趋势，中、高剂量组肝脏的绝对重量与对照组比较，差异有统计学意义(P0.05)，见表 2。表 2 芹菜对小鼠脏器系数的影响三、芹菜对小鼠精子密度及活动度的影响高剂量组 b 级精子、精子活力及精子活率增加，d 级精子降低，与对照组比较，差异均有统计学意义(P0.05);芹菜汁灌胃组精子密度有降低的趋势，但与对照组比较，差异无统计学意义(P0.05),见表 3。表 3 芹菜对精子密度及活动度的影响四、芹菜对小鼠精子运动速度的影响高剂量组小鼠精子平均路径速度(VAP)、曲
15、线速度(VCL)明显升高，与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),见表 4。表 4 芹菜对小鼠精子运动速度的影响五、芹菜对小鼠精子运动方式的影响精子运动方式参数的各剂量组间比较，差异均无统计学意义(P0.05)，见表 5。六、芹菜对小鼠精子空间位移程度的影响中、高剂量组小鼠精子侧摆幅度增大，与对照组比较，差异有统计学意义(P0.05); 高剂量组鞭打频率降低，与对照组比较差异亦有统计学意义(P0.05)，见表 6 表 5 芹菜对小鼠精子运动方式的影响表 6 芹菜对小鼠精子空间位移程度的影响讨论体重是动物实验中重要的非特异性观察指标，可综合反映动物机体中毒效应，因此在动物实验中，受到诸多学者
16、的关注2,3。本研究发现，小鼠灌胃期间体重持续增长，各剂量组之间体重增长的差异较小，提示芹菜汁对小鼠体重影响不大。动物脏器系数是鉴定动物遗传品质的重要依据，其变化常可较好地反映化学毒物对该脏器的综合毒性情况，也是寻找毒物作用靶器官的重要线索3。在排除体重对脏器系数变化影响的情况下，脏器系数的异常可旁证组织病理学改变的可能性。本次实验发现，与对照组相比各剂量组小鼠肾脏系数、睾丸系数和附睾系数差异较小。肝脏系数中、高剂量组增大，其原因有待于进一步研究。精子运动参数包括速度参数、运动方式参数、空间位移程度参数。运动参数更能够客观准确反映精子受精能力，评价生育能力。精子运动速度参数都是以精子头部为参照
17、物，测定其在单位时间内精子头部移动距离或相对位移，用来反映精子运动能力的参数4。本研究应用 CASA 系统，观察了小鼠精子运动参数，提高了实验的准确性。研究结果显示：b 级精子、精子活力及精子活率高剂量组增加明显，而 d 级精子有所降低，精子密度随着芹菜汁灌胃浓度的增加有逐步降低的趋势，说明高剂量芹菜汁虽然具有降低精子密度的趋势，但尚未影响精子的“活力” 及“活率”，甚至可以提高这两项指标。小鼠精子 VCL、VAP 高剂量组较对照组增高，提示此剂量下精子“动能”增加;ALH 高剂量组与对照组比较略有增强，BCF 高剂量组与对照组比较降低，提示了芹菜并未降低精子运动能力;LIN、 WOB 和 STR 各剂量组间差异均无统计学意义，说明该剂量下，芹菜对小鼠精子运动方式的影响不明显。本次实验浓度的芹菜汁有降低精子密度的趋势，这与蒲育栋等5的研究结果基本一致，实验结果也显示：芹菜汁在一定程度上可增加精子动能和提高精子运动能力，在今后的研究中值得关注。【
