1、书 书 书中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准犌 犅 食 品 安 全 国 家 标 准食 品 营 养 强 化 剂羟 钴 胺 发 布 实 施中 华 人 民 共 和 国 国 家 卫 生 健 康 委 员 会国 家 市 场 监 督 管 理 总 局发 布书 书 书犌 犅 食 品 安 全 国 家 标 准食 品 营 养 强 化 剂羟 钴 胺 范 围本 标 准 适 用 于 以 粘 着 剑 菌（犈 狀 狊 犻 犳 犲 狉 犪 犱 犺 犪 犲 狉 犲 狀 狊）发 酵 法 生 产，经 提 纯、干 燥 制 得 的 食 品 营 养 强 化 剂羟 钴 胺。分 子 式、结 构 式 和 相 对 分 子 质 量 分 子 式
2、 结 构 式 相 对 分 子 质 量（按 年 国 际 相 对 原 子 质 量）技 术 要 求 感 官 要 求感 官 要 求 应 符 合 表的 规 定。表 感 官 要 求项 目 要 求 检 验 方 法色 泽 深 红 色状 态 晶 体 或 结 晶 性 粉 末取 适 量 试 样 置 于 清 洁、干 燥 的 白 瓷 盘 中，在 自 然 光 线 下，观 察 其 色泽 和 状 态犌 犅 理 化 指 标理 化 指 标 应 符 合 表的 规 定。表 理 化 指 标项 目 指 标 检 验 方 法羟 钴 胺 含 量（以 无 水 和 无 溶 剂 计），狑 附 录 水 分，狑 卡 尔 费 休 法有 关 物 质（以 无
3、 水 和 无 溶 剂 计），狑 附 录 丙 酮，狑 附 录（）附 录 铅（）（）或 总 砷（以 计）（）或 犌 犅 附录 犃检 验 方 法犃 一 般 规 定除 非 另 有 说 明，在 分 析 中 仅 使 用 确 认 为 分 析 纯 的 试 剂 和 中 规 定 的 一 级 水。试 验 方 法 中所 用 标 准 滴 定 溶 液、杂 质 测 定 用 标 准 溶 液、制 剂 及 制 品，在 没 有 注 明 其 他 要 求 时，均 按、的 规 定 制 备。所 用 溶 液 在 未 注 明 用 何 种 溶 剂 配 制 时，均 指 水 溶 液。犃 鉴 别 试 验犃 试 剂 和 溶 液犃 溴 化 钾。犃 焦 硫
4、 酸 钾。犃 盐 酸。犃 冰 醋 酸。犃 乙 酸 钠。犃 酚 酞 指 示 液：酚 酞 用 的 乙 醇 溶 解 并 定 容 到。犃 氢 氧 化 钠 溶 液：。称 取 氢 氧 化 钠，用 水 溶 解 并 定 容 至。犃 醋 酸 溶 液：。移 取 冰 醋 酸 于 的 容 量 瓶 中 并 用 水 定 容。犃 亚 硝 基 萘 酚，二 磺 酸 钠 溶 液：将 亚 硝 基 萘 酚，二 磺 酸 钠 溶 于 适 量 水 中，转至 容 量 瓶 中 并 用 水 定 容。犃 红 外 光 谱 分 析红 外 光 谱 分 析 按 中 执 行，试 样 的 红 外 吸 收 光 谱 图 应 与 盐 酸 羟 钴 胺 的 标 准谱
5、图 一 致，盐 酸 羟 钴 胺 的 标 准 红 外 光 谱 图 如 附 录的 所 示。犃 钴 离 子 鉴 别将 羟 钴 胺 和 约 焦 硫 酸 钾 放 置 于 坩 埚 中，在 电 热 板 上 逐 渐 加 热，直 至 固 体 熔 融，冷 却，用玻 璃 棒 捣 碎，加 入 水，煮 沸 直 至 溶 解，加滴 酚 酞 指 示 液，逐 滴 滴 加 氢 氧 化 钠 溶 液（）直 到 粉红 色 出 现，加 入 乙 酸 钠、醋 酸 溶 液（）和 亚 硝 基 萘 酚，二 磺 酸 钠 溶 液（），立 即 呈 现 红 色 或 橘 红 色。加 入 盐 酸，煮 沸，红 色 或 橘 红 色 保 持 不 变。犃 试 样 与
6、 标 准 溶 液 主 峰 保 留 时 间 的 比 较在 羟 钴 胺 含 量 项 下 试 验 中，试 样 溶 液（）与 标 准 溶 液（）的 主 峰 保 留 时 间 应 一 致。犃 羟 钴 胺 含 量（以 无 水 和 无 溶 剂 计）测 定犃 方 法 提 要用 高 效 液 相 色 谱 法，在 选 定 的 工 作 条 件 下，通 过 色 谱 柱 使 样 品 分 离，用 紫 外 吸 收 检 测 器 或 二 极 管 阵犌 犅 列 检 测 器 检 测，用 外 标 法 定 量，计 算 样 品 中 羟 钴 胺 的 含 量。犃 试 剂 和 溶 液犃 甲 醇：色 谱 纯。犃 磷 酸。犃 磷 酸 二 氢 钠。犃
7、盐 酸 羟 钴 胺 标 准 品：号 为，质 量 分 数 大 于。犃 磷 酸 溶 液：取 磷 酸 于 容 量 瓶 中，加 水 定 容 至 刻 度。犃 缓 冲 液：称 取 磷 酸 二 氢 钠，溶 于 水，并 定 容 至，用 磷 酸 溶 液（）调 至。犃 稀 释 液：将 甲 醇、缓 冲 液（）和 水 按（体 积 比）混 合 均 匀。犃 标 准 溶 液：按 纯 度 折 算，精 密 称 取 适 量 盐 酸 羟 钴 胺 标 准 品，使 之 含 盐 酸 羟 钴 胺，精 确 至，用 稀 释 液（）稀 释 至 容 量 瓶 中，定 容 作 为 标 准 溶 液，使 用 前 用 微 孔 滤膜 过 滤，需 做 平 行
8、试 样。犃 试 样 溶 液：精 密 称 取 试 样（按 水 分 和 溶 剂 残 留 之 和 折 算 后），精 确 至，用 稀 释 液（）溶 解 并 定 容 至，作 为 试 样 溶 液，使 用 前 用 微 孔 滤 膜 过 滤，需 做 平 行 试 样。犃 仪 器 和 设 备犃 电 子 天 平，感 量 为。犃 高 效 液 相 色 谱 仪。犃 参 考 色 谱 条 件犃 检 测 器：紫 外 检 测 器 或 二 极 管 阵 列 检 测 器。犃 检 测 波 长：。犃 色 谱 柱：两 根 极 高 纯 度 烷 氧 基 硅 胶 为 填 料 的 整 体 柱（柱 长，内 径，大 孔，中孔）串 联 或 等 效 柱。犃
9、柱 温：。犃 进 样 量：。犃 流 动 相：为 甲 醇，为 缓 冲 液（），为 水。梯 度 洗 脱 条 件 见 表。表犃 流 动 相 梯 度 洗 脱 条 件时 间 流 动 相 犃 流 速：。犃 系 统 适 用 性盐 酸 羟 钴 胺 的 保 留 时 间 大 约 为。犌 犅 标 准 溶 液（）色 谱 峰 的 拖 尾 因 子 应 不 大 于。标 准 溶 液（）连 续 进 样次，主 峰 面 积 相 对 标 准 偏 差（）应 不 大 于。犃 分 析 步 骤按 照 液 相 色 谱 仪 操 作 规 程 依 法 操 作，取 标 准 溶 液（）、试 样 溶 液（）各 注 入 液 相色 谱 仪 中，记 录 色 谱
10、 图，按 外 标 法 进 行 计 算。犃 结 果 计 算羟 钴 胺 的 质 量 分 数狑，数 值 以表 示，按 式（）计 算。狑 狉 犆 犕 狉 犆 犕（）式 中：狉 试 样 溶 液 峰 面 积；犆 盐 酸 羟 钴 胺 标 准 溶 液 浓 度，单 位 为 毫 克 每 毫 升（）；犕 羟 钴 胺 的 摩 尔 质 量，单 位 为 克 每 摩 尔（）；狉 标 准 溶 液 峰 面 积；犆 试 样 溶 液 中 羟 钴 胺 浓 度，单 位 为 毫 克 每 毫 升（）；犕 盐 酸 羟 钴 胺 的 摩 尔 质 量，单 位 为 克 每 摩 尔（）。犃 精 密 度在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独
11、 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 超 过 其 算 术 平 均 值 的。犃 有 关 物 质（以 无 水 和 无 溶 剂 计）的 测 定犃 试 剂 和 溶 液犃 甲 醇：色 谱 纯。犃 磷 酸 二 氢 钠（）。犃 磷 酸。犃 缓 冲 液：称 取 磷 酸 二 氢 钠，经 漏 斗 倒 入 容 量 瓶 中，加 少 量 水 溶 解，加 水 至 刻 度。摇 匀，经 微 孔 滤 膜 过 滤，用 磷 酸 溶 液 调 至，放 入 超 声 波 水 浴 中 脱 气。犃 试 样 溶 解 液：精 密 量 取 经 微 孔 滤 膜 过 滤 的 水，取 缓 冲 液（）及 甲 醇 进 行 混 合，摇 匀，放 入 超
12、声 波 水 浴 中 脱 气。犃 系 统 适 用 性 溶 液：。按 纯 度 折 算 后，精 密 称 取 适 量 盐 酸 羟 钴 胺 标 准 品（），用 试 样 溶 解 液（）溶 解 定 容 至 容 量 瓶 中，使 之 浓 度 为，作 为 系 统 适 用 性 溶 液。犃 定 量 溶 液：。分 别 精 密 量 取 系 统 适 用 性 溶 液（），用 试 样 溶 解 液（）溶 解 定 容 至 容 量 瓶 中。犃 限 度 溶 液：。精 密 量 取 定 量 溶 液（），用 试 样 溶 解 液（）溶 解 定 容至 容 量 瓶 中，作 为 限 度 溶 液。犃 试 样 溶 液：。精 密 称 取 试 样（按 水
13、分 和 溶 剂 残 留 之 和 折 算 后），用 试 样 溶解 液（）溶 解 定 容 至 容 量 瓶 中，作 为 试 样 溶 液。犃 仪 器犃 电 子 天 平，感 量 为。犌 犅 犃 高 效 液 相 色 谱 仪，配 备 二 极 管 阵 列 检 测 器 或 紫 外 检 测 器。犃 参 考 色 谱 条 件同。犃 系 统 适 用 性按 照 液 相 色 谱 仪 操 作 规 程 依 法 操 作，取 系 统 适 用 性 溶 液（）注 入 液 相 色 谱 仪 中，记 录 色谱 图，羟 钴 胺 与 其 最 近 的 杂 质 之 间 的 峰 谷 比（与 羟 钴 胺 相 邻 的 杂 质 小 峰 的 峰 高 羟 钴
14、胺 主 峰 最 低 点 的 高度）必 须 不 小 于。犃 分 析 步 骤按 照 液 相 色 谱 仪 操 作 规 程 依 法 操 作，取 限 度 溶 液（）、试 样 溶 液（）和 定 量 溶 液（）各 注 入 液 相 色 谱 仪 中，记 录 色 谱 图，按 外 标 法 进 行 计 算。获 得 试 样 溶 液（）的 色 谱 图，忽 略 面 积 小 于 限 度 溶 液（）主 峰 的 倍 的 所 有 峰，将 羟钴 胺 主 峰 保 留 时 间 设 定 为，根 据 杂 质 峰 与 羟 钴 胺 主 峰 相 对 保 留 时 间 记 录 杂 质 峰 面 积 并 计 算 其 含 量。杂 质 相 对 保 留 时 间
15、 见 表。表犃 有 关 物 质 杂 质 峰 相 对 保 留 时 间名 称 相 对 保 留 时 间 羟 甲 基 衍 生 物 羟 甲 基 衍 生 物 杂 质 杂 质 杂 质 杂 质 异 构 体 杂 质 氰 钴 胺 任 一 其 他 杂 质 犃 结 果 计 算羟 钴 胺 有 关 物 质 的 质 量 分 数狑，数 值 以表 示，按 式（）计 算。狑 犢 犻（）某 种 杂 质犢 犻的 质 量 分 数 按 式（）计 算。犢 犻 狉 犻 犆 犕 狉 犆 犻 犉 犕（）式 中：犢 犻 某 种 杂 质犻的 质 量 分 数，；狉 犻 试 样 溶 液 某 个 杂 质 峰 面 积；犆 定 量 溶 液 中 盐 酸 羟 钴
16、 胺 的 浓 度，单 位 为 微 克 每 毫 升（）；犌 犅 犕 羟 钴 胺 的 摩 尔 质 量，单 位 为 克 每 摩 尔（）；狉 定 量 溶 液（）盐 酸 羟 钴 胺 峰 面 积；犆 犻 试 样 溶 液（）中 羟 钴 胺 的 浓 度，单 位 为 微 克 每 毫 升（）；犉 试 样 溶 液 响 应 因 子，氰 钴 胺 为，其 他 杂 质 为；犕 盐 酸 羟 钴 胺 的 摩 尔 质 量，单 位 为 克 每 摩 尔（）。犃 精 密 度在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 超 过 其 算 术 平 均 值 的。犃 丙 酮 含 量 的 测 定犃
17、 方 法 提 要试 样 中 存 在 的 丙 酮 在 密 闭 容 器 中 会 扩 散 到 气 相 中，经 过 一 定 的 时 间 后 可 达 到 气 相 液 相 间 浓 度 的 动态 平 衡，用 顶 空 气 相 色 谱 法 检 测 上 层 气 相 中 丙 酮 的 含 量，即 可 计 算 出 待 测 试 样 中 丙 酮 的 实 际 含 量。犃 试 剂 和 溶 液犃 丙 酮 贮 备 液（）：用 微 量 进 样 器 量 取 丙 酮 标 准（下 丙 酮 的密 度 为），直 接 注 入 已 预 加 水 约 的 容 量 瓶 中（针 头 必 须 没 入 液 面 以 下），再 加水 至 刻 度，摇 匀，即 得。
18、犃 丙 酮 标 准 使 用 液（）：量 取 丙 酮 贮 备 液（），置 于 容 量 瓶 中，加水 至 刻 度，摇 匀，即 得。犃 试 样 溶 液：取 试 样 约（），置 于 顶 空 瓶 中，精 密 加 入 水，封 瓶，超 声 使溶 解，即 得。犃 参 比 溶 液：取 试 样 约（），置 于 顶 空 瓶 中，加 入 丙 酮 标 准 使 用 液（），封 瓶，超 声 使 溶 解，即 得。犃 仪 器 和 设 备犃 仪 器：气 相 色 谱 仪，配 顶 空 进 样 器 和 氢 火 焰 离 子 化 检 测 器。犃 顶 空 瓶：，配 备 铝 盖 和 不 含 烃 类 溶 剂 残 留 的 丁 基 橡 胶 或 硅
19、树 脂 胶 隔 垫。犃 电 子 天 平，感 量 为。犃 参 考 色 谱 条 件犃 色 谱 柱：毛 细 管 柱（，固 定 液 为 氰 丙 基 苯 基 二 甲 基 聚 硅 氧 烷）或 等 效 柱。犃 柱 温：，保 持。犃 检 测 器 温 度：；进 样 口 温 度：。犃 载 气：；柱 流 量：；空 气 流 量：；氢 气 流 量：；尾 吹 气 流 量：；分 流 比：。犃 进 样 方 式：顶 空 进 样，进 样 量。犃 顶 空 进 样 器 条 件：顶 空 瓶 平 衡 温 度，平 衡 时 间；定 量 环 温 度；传 输 线 温 度。犌 犅 犃 系 统 适 用 性 试 验试 样 检 测 前 进 行 系 统
20、适 用 性 试 验，以 丙 酮 标 准 使 用 液（）连 续 进 样次 进 行 重 复 性 测 试，并计 算 其 峰 面 积 的 相 对 标 准 偏 差，要 求 重 复 性 测 试 的 不 大 于，同 时，记 录 第 一 针 丙 酮 标准 使 用 液（）中 丙 酮 峰 的 理 论 板 数，理 论 板 数 应 不 小 于。满 足 条 件 后 进 行 试 样 的 正 常 检 测；若 不 满 足，查 明 原 因 后 继 续 进 行 系 统 适 用 性 测 试，合 格 后 再 进 行 试 样 测 试。每 进批 试 样 及 检 测 结 束 前取 丙 酮 标 准 使 用 液（）进 样，与 开 始针 系 统
21、 适 用 性 的 峰 面 积 及 中 间 每 次 确 认 的 丙 酮 标 准 峰 面 积一 并 计 算，重 复 性 测 试 的 相 对 标 准 偏 差 不 大 于，丙 酮 标 准 使 用 液（）中 丙 酮 峰 的 理 论板 数 应 不 小 于。若 不 满 足 上 述 条 件，则 之 间 的 检 测 数 据 无 效。重 新 进 行 系 统 适 用 性 检 测，系 统 适用 性 合 格 后，重 新 检 测，系 统 适 用 性 有 效。犃 分 析 步 骤系 统 适 用 性针 重 复 性 合 格 后，进针 水 样，再 依 次 进针 参 比 溶 液（）、针 试 样 溶 液（）。将 制 备 好 的 参 比
22、 溶 液（）及 试 样 溶 液（）在 下 平 衡，分 别 取 顶 空 气 进 样，在 以 上 色 谱 条 件 下 测 定，记 录 色 谱 图。犃 结 果 计 算丙 酮 的 质 量 分 数狑，数 值 以表 示，按 式（）计 算。狑 犃（犃 犃）犿（）式 中：参 比 溶 液（）中 丙 酮 标 准 使 用 液 的 浓 度，单 位 为 微 克 每 毫 升（）；参 比 溶 液（）中 丙 酮 标 准 使 用 液 的 体 积，单 位 为 毫 升（）；犃 试 样 溶 液 峰 面 积；犃 参 比 溶 液 峰 面 积；犿 试 样 质 量，单 位 为 克（）。犃 精 密 度结 果 不 大 于 时，两 个 平 行 试
23、 样 的 绝 对 差 值 不 应 超 过；结 果 大 于 时，两 个 平 行 试 样 的 绝 对 差 值 不 超 过 算 术 平 均 值 的。犃 狆 犎的 测 定取 试 样，用 水 溶 解，并 定 容 至，其 他 按 规 定 测 定。犌 犅 附录 犅羟 钴 胺 参 考 红 外 光 谱 图 和 色 谱 图犅 盐 酸 羟 钴 胺 的 标 准 红 外 光 谱 图见 图。图犅 盐 酸 羟 钴 胺 的 标 准 红 外 光 谱 图犅 羟 钴 胺 试 样 参 考 色 谱 图见 图。图犅 羟 钴 胺 试 样 参 考 色 谱 图犅 羟 钴 胺 试 样 有 关 物 质 参 考 色 谱 图见 图。犌 犅 说 明：羟 甲 基 衍 生 物；羟 甲 基 衍 生 物；杂 质；杂 质；杂 质；异 构 体；杂 质；氰 钴 胺。图犅 羟 钴 胺 试 样 有 关 物 质 参 考 色 谱 图犅 羟 钴 胺 试 样 丙 酮 参 考 色 谱 图见 图。图犅 羟 钴 胺 试 样 丙 酮 参 考 色 谱 图
