1、 中华人民共和国国家标准 GB 5009.148 2014 2014-12-01 发布 2015-05-01 实施 食品安全 国家标准 植物性食 品中游离 棉酚的测 定 GB 5009.148 2014 I 前 言 本 标准 代 替 GB/T 5009.148 2003 植 物性 食品 游离 棉酚 的 测定。本标准 与 GB/T 5009.148 2003 相比，主 要变 化如下：修改 了 原理；修 改了 检出 限；增 加了 附录 A 中 样品加标 液相 色谱图 A.2。GB 5009.148 2014 1 食 品安全 国家标准 植 物性食 品中游离 棉酚的 测定 1 范围 本标准 规定 了植
2、 物 油 或以 棉籽饼 为原 料的 其他 液体 食品 中 游离 棉酚 的测 定方 法。本标准 适用 于植 物油 或以 棉籽饼 为原 料的 其他 液体 食品中 游离 棉酚 的测 定。2 原理 植物油 中游 离棉 酚经 无水 乙醇提 取，利用 高效 液相 色谱法 检测，色 谱峰 保留 时间定 性，外标 法 定量。以棉籽 饼为 原料 的 水 溶性 液体样 品中 的游 离棉 酚经 无水乙 醚提 取，浓缩 至干，再加 入乙 醇溶 解，利用高 效液 相色 谱法 检测，色谱 峰保 留时 间定 性，外标法 定量。3 试 剂和 材料 注：除非另有说明，本方法所 用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的
3、一级水。3.1 试剂 3.1.1 磷 酸（H3PO4）。3.1.2 无 水乙 醇（CH3CH2OH）。3.1.3 丙 酮（C3H6O）。3.1.4 氮 气（N2）。3.1.5 甲醇（CH3OH）。3.2 试剂 配制 磷酸溶 液：取300 mL 水，加6.0 mL 磷酸，混匀，经0.45 m 滤膜过 滤。3.3 标准 品 棉酚(C32H34O10)标准 品：纯度95%。3.4 标准 溶液 配制 3.4.1 棉 酚标 准储 备液（1.0 mg/mL）：准 确称取0.1 g（精确 到0.0001 g）棉 酚纯品，用 丙酮 溶解，并定容至100.00mL。3.4.2 棉 酚中 间标 准溶 液（50 g
4、/m L）：取1 mg/mL 棉酚储 备液5.0 mL 于100 mL 容量瓶中，用无 水乙 醇定容至 刻度。3.4.3 棉 酚标 准工 作 液：准确吸 取 1.00mL、2.00 mL、5.00 mL、8.00 mL 棉酚 标准溶 液 于 10 mL 容量瓶中，用 无水 乙醇 稀释 至 刻度，此 溶液 相应 于 5 g/m L、10 g/m L、25 g/m L、40 g/mL 的标准系列。GB 5009.148 2014 2 4 仪 器和 设备 4.1 高效 液相 色谱 仪：带 紫外检 测器 或者 二极 管阵 列检测 器。4.2 浓缩 仪。4.3 离心 机：3000 r/min。5 分 析
5、步 骤 5.1 试样 制备 5.1.1 植 物油：称 取油 样 1g（精 确至 0.01g）于 离心试 管中，加 入 5 mL 无水乙醇，剧 烈振 摇 2 min，静置分 层（或冰箱 过夜），取上清 液滤 纸过 滤，4000 r/min 离心 10 min，上清 液 过 0.45 m 滤膜，即为试样液。5.1.2 以 棉籽 饼为 原料 的 水溶性 液体 样品：称取样品 10 g（精确 至 0.01g）于 离心试 管中，加入 10 mL无水乙 醇，振 摇 2 min，静 置 5 min，取 上层 乙醚 层 5 mL，用氮气吹干，用 1.0 mL 无水乙醇定 容，过0.45 m 滤膜，即 为试 样
6、液。5.2 色谱 测定 5.2.1 参 考色 谱条 件 色 谱柱：C18柱，250 mm 4.6 mm，5 m，或具同等性 能的 色谱 柱。流动 相：甲醇 磷 酸溶 液=85 15。流速：1.0 mL/min。柱温：40 1。测定 波长：235 nm。进样 体积：10 L。5.2.2 标 准曲 线的 绘制 分别将 棉酚 标准 工作 液注 入高效 液相 色谱 仪中，记 录峰高 或峰 面积。以 峰高 或者峰 面积 为纵 坐标，以棉酚 标准 工作 液浓 度为 横坐标 绘制 标准 曲线（标 准溶液 液相 色谱 图参 见附 录A 中图A.1）。5.2.3 试 样测 定 将 试样 液注 入高 效色 谱仪
7、中，记录 峰高 或者 峰面 积，根 据标 准曲 线计 算的 待 测液中 棉酚 的浓 度（样品加标 液相 色谱 图参 见附 录A 中图A.2）。6 分 析结 果的 表述 试 样5.1.1 中 游离 棉酚 含量 按公式（1）计 算：mcX5（1）式中：X 试 样中 棉酚的 含量，单位为 毫克 每千 克（mg/kg）；m 试 样的 质量，单 位 为克（g）；c 测定 试样 液中 棉酚 的 含量，单位 为微 克每 毫升（g/m L）；5 为 5.1.1 折 合所 用无 水乙醇 的体 积，单位 为毫 升（mL）。GB 5009.148 2014 3 试 样 5.1.2 中游 离棉 酚含 量 按公式（2）
8、计 算：mcX2（2）式中：X 试 样中 棉酚的 含量，单位为 毫克 每千 克（mg/kg）；m 试 样的 质量，单 位 为克（g）；c 测定 试样 液中 棉酚 的 含量，单位 为微 克每 毫升（g/m L）；2 为 5.1.2 折 合所 用无 水乙醇 的体 积，单位 为毫 升（mL）。计算结 果 以 重复 性条 件下 获得的 两次 独立 测定 结果 的算术 平均 值表 示，结果 保留二 位有 效 数 字。7 精 密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值 的 10%。8 其他 植物油 体样 品取 样 1.0 g 时，检出 限为 2.5 mg/kg，定量限 为 7.5 mg/kg。以 棉 籽饼为 原料 的水溶性液体 样品 取 样 10 g 时，检 出限为 0.25 mg/kg，定 量限 为 0.75 mg/kg。GB 5009.148 2014 4 附录A 棉酚标 准溶 液和 样品 加标 色谱图 A.1 棉酚 标准 溶液 液相 色 谱图 棉酚 标 准溶 液的 液相 色谱 图见 图 A.1。图 A.1 棉 酚标 准 溶 液液 相色谱 图 A.2 样品 加标 液相 色谱 图 样品加 标液相 色 谱图 见 图 A.2。GB 5009.148 2014 5 图 A.2 样品 加标 液 相色 谱图
