1、ICS 11.020 C 59 WS 中 华 人 民 共 和 国 卫生 行 业 标 准 WS 283 2020 WS 283 2008 炭 疽 诊 断 Diagnosis for anthrax 2020-04-21 发布 2020-11-01 实施 中 华 人 民 共 和 国 国 家 卫 生 健康委员会 发布 WS 283 2020 I 前 言 本标准 第6 章为 强制 性条 款，其余 为推 荐性 条款。GB/T 1.1 2009 WS 283 2008 WS 283 2008 2 4.3,2008 3.3 6.2,2008 5.2 6.3,2008 5.3 A B D E GB 17015
2、 1997 WS 283 2008 WS 283 2020 1 炭 疽 诊 断 1 范围 2 规范性 引用 文件 GB 19489 3 术语和 定义 3.1 炭疽 anthrax 4 诊断依 据 4.1 流行病 学史 14 d 4.2 临床表 现 及 分型 4.2.1 皮肤炭 疽 4.2.2 肠炭疽 WS 283 2020 2 4.2.3 肺炭疽 X 4.2.4 脑膜炎 型炭 疽 4.2.1 4.2.3 4.2.5 败血症 型炭 疽 DIC 4.2.1 4.2.3 4.3 实验室 检查 4.3.1 A B 4.3.2 C 4.3.3 4.3.4 D 4.3.5 E 4.3.6 A B 5 诊断
3、原 则 6 诊断 6.1 疑似病 例 4.1 4.2.1 4.2.5 6.2 临床诊 断病 例 a)4.3.2 4.3.6 1 b)6.3 确诊病 例 a)4.3.1 b)4.3.2 4 4 WS 283 2020 3 c)4.3.2 4.3.6 2 7 鉴别诊 断 7.1 皮肤炭 疽 7.2 肠炭疽 7.3 肺炭疽 WS 283 2020 4 A A 附 录 A（规范 性附 录）炭疽标 本采 集、保存 和运 输 A.1 患者标 本的 采集 A.1.1 采集标 本时 应遵 循的 原则 A.1.1.1 A.1.1.2 A.1.2 血液标 本 5 mL 5 mL A.1.3 皮肤病 灶标 本 A.
4、1.4 粪便与 呕吐 物标 本 A.1.5 鼻（咽）拭 子或 痰标 本 A.1.6 脑脊液 标本 1 mL 2 mL A.1.7 尸体标 本 A.2 动物标本 及 环境 标本 的采 集 A.2.1 动物组 织标 本 WS 283 2020 5 A.2.2 环境标 本 A.3 标本采 集生 物安 全要 求/A.4 标本保 存要 求 2 8-20 A.5 运输要 求 UN2814 UN3373 WS 283 2020 6 B B 附 录 B（规范 性附 录）炭疽细 菌学 检查 B.1 生物安 全要 求 GB 19489 B.2 显微镜 检查 B.3 细菌分 离培 养 B.3.1 标本处 理 1 m
5、L 65 15 min 20 min 100 L 200 L B.3.2 挑选可 疑菌 落 37 8 h 24 h B.4 炭疽芽 胞 杆 菌鉴 定 37 8 h 24 h D WS 283 2020 7 附 录 C（规范 性附 录）炭疽血 清学 检查 C.1 标本要求-20 C.2 酶联免 疫吸 附试 验（ELISA）C.2.1 试剂选 择 C.2.2 试剂准 备 C.2.2.1 ELISA 包被 液 0.01 mol/L PBS pH7.4 8 g NaCl 0.2 g KCl 3.58 g Na2HPO4 2O 0.3 g KH2PO4 2O 900 mL HCl/NaOH pH 7.4
6、 1 000 mL 15 psi 1.05 kg/cm2 C.2.2.2 洗涤液 5 mL-20 995 mL 0.01 mol/L PBS C.2.2.3 血清稀 释液 0.1 mol/L PBS 20 mL 160 mL 10 g 1 mL-20 pH 7.4 200 mL 4 C.2.2.4 ELISA 稀释 液-20 0.1%C.2.2.5 显色液 3,3,5,5-TMB C.2.2.6 显色终 止液（0.5 mol/L H2SO4）2.72 mL 98%90 mL 100 mL C.2.3 酶标板 包被 ELISA 1.0 g/mL 100 L 4 7 d 300 L 3 3 min
7、 WS 283 2020 8 C.2.4 加入待 检血 清 C.2.4.1 样 品初 筛实验 C.2.4.2 1:50 100 L 3 37 60 min 300 L 3 3 min C.2.4.2 复 判实 验 1:50 ELISA 1:3200 100 L 3 37 60 min 300 L 3 3 min C.2.5 酶标抗 体反 应 ELISA IgG 100 L 37 60 min 3 300 L 3 min C.2.6 显色 100 L 20 min 100 L C.2.7 结果判 断 30 min 450 nm OD OD OD 2.5 C.3 胶体金 免疫 层析 法 C.3.1
8、 标本准 备 C.3.2 检测 150 L 200 L 2 min 15 min C.3.3 判读结 果 C T WS 283 2020 9 C C 附 录 D（规范 性附 录）炭疽芽 胞杆 菌的 核酸 检测 D.1 聚合酶 链式 反应（PCR）检 测炭疽 芽胞 杆菌 特异 基因 D.1.1 目标基 因 D.1.2 试剂选 择 D.1.3 参考引物 D.1 10 L/nmol 100 mol/L 10 10 mol/L 表D.1 PCR 用 参考 引物 序 列(5-3)bp pagA F ATTTGCGGTAACACTTCACT 923 pagA R AGACCGTGACAATGATGGAA
9、cap F CCTGGTTGTTCTTTCGTTGC 1242 cap R CGGATTGTATATGGAGTGGG D.1.4 模板制 备 D.1.4.1 试剂盒 法 DNA D.1.4.2 煮沸法 37 18 h 24 h 1 2 L 5 L 800 L TE 1.5 mL 100 10 min 12 000 g 10 min 0.22 m PCR D.1.5 PCR反 应体 系 25 L 12.5 L 10 mol/L 10 mol/L 1 L 1 L 5 L 25 L WS 283 2020 10 D.1.6 PCR扩增 95 5 min 95 1 min 55 1 min 72 1
10、min 30 72 5 min D.1.7 PCR扩 增产 物的 检测 分析 PCR 5 L 1 L 1%DNA 1 3 5 L 6 V/cm 40 min PCR D.1.8 结果判 读 D.2 实时荧 光定 量聚 合酶 链式 反应（Real-Time PCR）检 测炭疽 芽胞 杆菌 特异 基因 D.2.1 目标基 因 D.1.1 D.2.2 试剂选 择 D.2.3 参考引 物和 探针 序列 D.2 D.1.3 表D.2 Real-Time PCR 参 考引物 和探 针序 列(5-3)(bp)GC(%)Tm()pagA-F GCGACCGTACTTGAATTCGAA 21 47.6 52.4
11、 pagA-R TGCGTCGTTCTTTGATATTGGT 22 40.9 51.1 pagA-P TCCTGCAGATACACTCC 17 52.9 69.4 cap-F ATGGTAACCCTTGTCTTTGAATTGT 25 36.0 58.0 cap-R TTGAATTCCGTGGTATTGGAGTT 23 39.1 58.4 cap-P TTTGCAATTAATCCTGGAACAA 22 31.8 69.6 5 FAM 3 D.2.4 模板制 备 D.1.4 D.2.5 Real-Time PCR 反应 体系 WS 283 2020 11 20 L 10 L 10 mol/L 10
12、 mol/L 0.4 L 10 mol/L 0.4 L 1 L 5 L 20 L D.2.6 Real-Time PCR 扩增 95 5 min 95 10 s 58 45 s 40 PCR D.2.7 结果判 定 Ct 35 35 Ct 38 Ct 38 WS 283 2020 12 D D 附 录 E（规范 性附 录）炭疽芽 胞杆 菌 的 抗原 检测 E.1 标本要 求 ELISA E.2 免疫层 析法 检测 炭疽 芽胞 杆菌抗 原 E.2.1 试剂选 择 E.2.2 胶体金 免疫 层析 法检 测炭 疽芽胞 杆菌 抗原 E.2.2.1 标本准 备 E.2.2.2 检测 150 L 200 L 2 min 15 min E.2.2.3 判读结 果 C T _
