1、中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B 5 0 0 9.2 3 12 0 1 6食 品 安 全 国 家 标 准水 产 品 中 挥 发 酚 残 留 量 的 测 定2 0 1 6-0 8-3 1发 布2 0 1 7-0 3-0 1实 施中 华 人 民 共 和 国国 家 卫 生 和 计 划 生 育 委 员 会发 布G B 5 0 0 9.2 3 12 0 1 6 前 言 本 标 准 代 替SC/T30312006 水 产 品 中 挥 发 酚 残 留 量 的 测 定 分 光 光 度 法。本 标 准 与SC/T30312006相 比,主 要 变 化 如 下:将 处 理 方 法 中 的 搅 拌
2、改 为 恒 温 磁 力 搅 拌;增 加 水 蒸 气 蒸 馏 仪 为 处 理 方 法 中 的 提 取 装 置。G B 5 0 0 9.2 3 12 0 1 61 食 品 安 全 国 家 标 准水 产 品 中 挥 发 酚 残 留 量 的 测 定1 范 围本 标 准 规 定 了 水 产 品 中 挥 发 酚 残 留 量 的 分 光 光 度 测 定 方 法。本 标 准 适 用 于 水 产 品 中 可 食 部 分 挥 发 酚 残 留 量 的 测 定。2 原 理用 碱 性 溶 液 破 坏 样 品 组 织 结 构,在 酸 性 条 件 下 用 水 蒸 气 蒸 馏 出 挥 发 酚 类 化 合 物,在 铁 氰 化
3、钾 存 在下,与4-氨 基 安 替 比 林 反 应 生 成 橙 红 色 的 安 替 比 林 染 料,用 三 氯 甲 烷 萃 取,在460nm波 长 测 定 吸 光 度定 量。3 试 剂 和 材 料除 非 另 有 说 明,本 方 法 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯,水 为GB/T6682规 定 的 三 级 水。3.1 试 剂3.1.1 三 氯 甲 烷(CHCl 3)。3.1.2 氨 水(NH3H2O)。3.1.3 硫 酸(H2SO4)。3.1.4 氢 氧 化 钠(NaOH)。3.1.5 铁 氰 化 钾(K3Fe(CN)6)。3.1.6 硫 酸 铜(CuSO45H2O)。3.1.7 甲 基 橙
4、(C 14H15N3NaO3S)。3.1.8 氯 化 铵(NH4Cl)。3.1.9 4-氨 基 安 替 比 林(C 11H13N3O)。3.1.1 0 活 性 炭 粉 末(粒 径0.1mm0.5mm)。3.2 试 剂 配 制3.2.1 无 酚 水:取 实 验 用 水,每 升 水 中 加 入0.2g经200烘 干30mi n的 活 性 炭 粉 末,充 分 振 摇 后,放 置过 夜,用 双 层 中 速 滤 纸 过 滤 后 即 可 使 用;或 向 实 验 用 水 中 加 氢 氧 化 钠(NaOH)使 水 呈 强 碱 性,并 滴 加 高锰 酸 钾 溶 液 至 紫 红 色,移 入 全 玻 璃 蒸 馏 器
5、 中 加 热 蒸 馏,取 馏 出 液 备 用。无 酚 水 应 贮 于 玻 璃 瓶 中,取 用 时应 避 免 与 硅 胶 制 品(橡 皮 塞 或 乳 胶 管 等)接 触。3.2.2 50%硫 酸 溶 液:将 浓 硫 酸 在 搅 拌 下 缓 缓 加 入 等 体 积 的 实 验 用 水 中。3.2.3 10%氢 氧 化 钠 溶 液:称 取10g氢 氧 化 钠 溶 于 水 中,稀 释 至100mL,混 匀。3.2.4 8%铁 氰 化 钾 溶 液:称 取8g铁 氰 化 钾(K3Fe(CN)6)溶 于 水 中,稀 释 至100mL,混 匀,4冷藏,可 使 用 一 周。G B 5 0 0 9.2 3 12
6、0 1 62 3.2.5 10%硫 酸 铜 溶 液:称 取10g硫 酸 铜(CuSO45H2O)溶 于 水 中,稀 释 至100mL,混 匀。3.2.6 0.05%甲 基 橙 指 示 液:称 取 甲 基 橙0.05g溶 于 水 中,稀 释 至100mL,混 匀。3.2.7 缓 冲 溶 液:称 取20g氯 化 铵(NH4Cl)溶 于100mL氨 水(NH3H2O)中,pH约10.7,4冷 藏。3.2.8 2%4-氨 基 安 替 比 林 溶 液:称 取2g4-氨 基 安 替 比 林(C 11H13N3O)溶 于 水 中,稀 释 至100mL,4冷 藏,可 使 用 一 周。3.3 标 准 品苯 酚
7、标 准 品(C 6H6O),纯 度99%。3.4 标 准 溶 液 配 制3.4.1 标 准 储 备 溶 液:称 取 苯 酚0.01g(精 确 至0.1mg)于50mL小 烧 杯 中,加 无 酚 水 溶 解,再 转 移 到100mL容 量 瓶 中,定 容,混 匀,于4保 存,苯 酚 质 量 浓 度 为100g/mL,有 效 期 为7d。3.4.2 标 准 工 作 液:取 适 量 苯 酚 标 准 溶 液,用 无 酚 水 稀 释 至 每 毫 升 含1.00g苯 酚,配 制 后 要 在2h内使 用。4 仪 器 和 设 备4.1 水 蒸 气 蒸 馏 仪 或500mL玻 璃 水 蒸 气 蒸 馏 装 置(见
8、 附 录A)。4.2 天 平:感 量 为0.1mg和0.01g。4.3 500mL(梨 形)分 液 漏 斗。4.4 磁 力 搅 拌 器。4.5 分 光 光 度 计。4.6 调 温 电 炉 或 调 温 电 加 热 套。4.7 组 织 捣 碎 机。5 分 析 步 骤5.1 试 样 制 备 及 保 存水 产 品 取 可 食 部 分 用 组 织 捣 碎 机 匀 浆 后,搅 拌 均 匀,分 装,密 闭 冷 藏 或 冷 冻 保 存。5.2 试 样 处 理5.2.1 蒸 馏 提 取称 取 预 处 理 的 样 品10g20g(精 确 到0.01g,同 时 做 空 白 试 验)放 烧 杯 中,加 入 氢 氧 化
9、 钠 溶 液75mL,用 磁 力 搅 拌 器 搅 拌10mi n。再 加35滴 甲 基 橙 溶 液,用 硫 酸 溶 液 调 节pH4(溶 液 呈 橙 红色),再 加 硫 酸 铜 溶 液5mL,混 匀 后,置 于 水 蒸 气 蒸 馏 仪 提 取 瓶 或500mL蒸 馏 瓶 中,用 少 量 无 酚 水 洗 净烧 杯,洗 涤 液 并 入 水 蒸 气 蒸 馏 仪 提 取 瓶 或 蒸 馏 瓶 中 并 加 数 粒 玻 璃 珠。使 用 玻 璃 水 蒸 气 蒸 馏 装 置(或 水 蒸 气 蒸 馏 仪)进 行 蒸 馏,应 连 接 好 水 蒸 气 蒸 馏 装 置,确 保 严 密 不 漏气,取250mL锥 形 瓶
10、接 收 馏 出 液,中 速 蒸 馏60mi n90mi n,至 馏 出 液 约240mL时,停 止 蒸 馏,并 用10mL无 酚 水 冲 洗 冷 凝 管,洗 涤 液 并 入 馏 出 液 中(蒸 馏 过 程 中 保 持 酸 性)。蒸 馏 液 应 尽 量 避 免 与 橡 胶 制品 接 触(橡 皮 塞、橡 胶 管 和 乳 胶 管 里 含 有 酚 类 化 合 物 添 加 剂),如 需 使 用 时 用 硅 胶 管(塞)代 替。5.2.2 显 色将 馏 出 液 移 入 分 液 漏 斗 中,加2.0mL缓 冲 溶 液,混 匀。加1.5mL4-氨 基 安 替 比 林 溶 液,混 匀,再 加G B 5 0 0
11、9.2 3 12 0 1 63 1.5mL铁 氰 化 钾 溶 液,充 分 混 匀 后,放 置10mi n。5.2.3 萃 取准 确 加 入10.0mL三 氯 甲 烷,密 塞,剧 烈 振 摇2mi n,静 置 分 层,彻 底 澄 清 透 明 后(不 能 存 有 气 泡),用 干 脱 脂 棉 拭 干 分 液 漏 斗 颈 管 内 壁,于 颈 管 内 塞 入 一 小 团 干 脱 脂 棉,将 三 氯 甲 烷 通 过 干 脱 脂 棉 团,弃 去最 初 滤 出 的 数 滴 萃 取 液,直 接 放 入 光 程 为1cm的 比 色 皿 中。安 替 比 林 染 料 用 三 氯 甲 烷 萃 取 后,需6h以 内 测
12、 定。5.2.4 测 定于460nm波 长 下,以 空 白 三 氯 甲 烷 萃 取 液 为 参 比,用 分 光 光 度 计 测 量 吸 光 度。5.2.5 标 准 曲 线 绘 制取8个 分 液 漏 斗,分 别 加 入100mL水,依 次 加 入0.0mL、0.5mL、1.0mL、3.0mL、5.0mL、7.0mL、10.0mL、15.0mL苯 酚 标 准 溶 液,再 分 别 加 无 酚 水 至250mL,显 色、萃 取 后,测 定 吸 光 度 绘 制标 准 曲 线。6 分 析 结 果 的 表 述试 样 中 挥 发 酚 的 含 量 按 式(1)计 算:X=m1-m0m(1)式 中:X 试 样 中
13、 挥 发 酚 的 含 量(以 苯 酚 计),单 位 为 毫 克 每 千 克(mg/kg);m1 由 标 准 曲 线 求 得 试 样 溶 液 中 苯 酚 的 量,单 位 为 微 克(g);m0 空 白 的 苯 酚 量,单 位 为 微 克(g);m 试 样 质 量,单 位 为 克(g)。计 算 结 果 以 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 算 术 平 均 值 表 示,结 果 保 留 两 位 有 效 数 字。7 精 密 度在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的10%。8 检 出 限本 方 法 检 出 限:0.05mg/kg。G B 5 0 0 9.2 3 12 0 1 64 附 录 A水 蒸 气 蒸 馏 装 置 参 考 示 意 图 水 蒸 气 蒸 馏 装 置 参 考 示 意 图 见 图A.1。说 明:1 水 蒸 气 发 生 瓶;2 样 品 蒸 馏 瓶;3 阀 门;4 锥 形 瓶。图A.1 水 蒸 气 蒸 馏 装 置 参 考 示 意 图
