1、1,Relations of Antibodies against G-Protein Coupled Receptors to Cardiac Structure and Functional Activity,G蛋白偶联受体自身抗体与心脏结构和功能活动的关系,刘慧荣 山西医科大学生理教研室,2,受体学概述G-蛋白偶联受体简介 G-蛋白偶联受体自身抗体与心脏结构和功能活动的关系,3, 受体的定义、分类、发展简史,受体 (receptor)的定义 是细胞中直接地、特异地接受细胞间和细胞内化学信号的大分子。, 受体的三个必备条件,4,受体的分类,神经递质受体激素受体摄取血浆蛋白的受体细胞粘附受体
2、化学趋向物质受体直接参与免疫功能的受体药物受体毒素受体病原体受体, 按配体分类, 按受体的存在部位分类,5,受体,膜表面受体 细胞内受体,组成离子 G蛋白 酪氨酸激酶 通道的受体 偶联受体 偶联受体, ,化学门 控通道,6,7,受体的发展简史,受体概念的提出 药理学研究阶段 由概念向实体的跃进阶段 分子生物学研究阶段,8, 受体概念的提出(1),1878年 Langley 提出了receptive substance的概念,烟 碱加在去神经后的骨骼肌上 引起肌肉的收缩,影响肌肉收缩,箭 毒 烟 碱 加在去神经后的骨骼肌上,9, 不能影响直接刺激肌肉引起的收缩,箭 毒 烟 碱 加在神经支配的骨骼
3、肌上, 受体概念的提出(1),10, 受体概念的提出(1),推测：与箭毒、烟碱结合的不是收缩成分，提出了“接受物质”的概念。,箭 毒 烟 碱 与 接 受 物 质 结 合 传 递 刺 激 影 响 肌 肉 收 缩,11, 受体概念的提出(1),Langley 明确提出“接受物质”的两个基本性质：,(1) 结合(2) 结合后引起生物效应,12, 受体概念的提出(2),细胞上有许侧链含亲毒集团 与结构上互补的毒素结合集团结合 使毒素的作用得以发挥,19世纪末Ehrlich提出了“侧链理论”：,Ehrlich将这些细胞上的侧链称为receptor.,13,麦角受体在不同的组织表现出不同的“效价” 提出：
4、受体具有部位特异性,1905年Elliott提出受体的组织特异性, 受体概念的提出(3),14,受体的发展简史,受体概念的提出 药理学研究阶段 由概念向实体的跃进阶段 分子生物学研究阶段,15,1937 年Clark用药理学方法将受体的研究推进了一大步,500g高级乙醇 心肌组织 抑制效果,0.02g乙酰胆碱 心肌组织 抑制,16,如果药物分子需占据全部心肌细胞表面才能发挥作用的话,乙酰胆碱的表面积是细胞表面积的 1/6000 Ach分子只与细胞表面的极少一部分活性分子结合起作用 ,这一少部分活性分子就是,受 体,17, 药物作用的强度与所占据受体的数目成正比；,提出一个重要概念 “受体占有学
5、说”,1937年Clark研究乙酰胆碱对蛙心的作用时发现：, 当占据了全部受体时，反应强度最大。,药物浓度,18,受体的发展简史,受体概念的提出 药理学研究阶段 由概念向实体的跃进阶段 分子生物学研究阶段,19,由概念向实体的跃进阶段,有两项重大进展极大地推动了受体研究,1962 年 Jensen 和Jscobson将放射性同位素应用于受体研究 1965年Sutherland发现了cAMP并创立了“第二信使”学说,20,将合成的高放射比度的氚标记雌二醇(3H-E) 皮下或静脉注入大鼠 ,1962 年 Jensen 和Jscobson的研究,测量靶器官(子宫、阴道)的放射活性,测量非靶器官(肝、
6、肾、肌肉)的放射活性, ,摄取量多、停留时间长、不转变,摄取量少、停留时间短、2小时后大部分已转变为雌三醇或雌酮,21,Jensen 和Jscobson研究的实验步骤,用放射性同位素标记各种配体，先确定是否由有某种配体的特异结合部位 确定这种特异结合部位的组织、细胞分布及细胞内的定位 确定其理化性质。,22,由概念向实体的跃进阶段,有两项重大进展极大地推动了受体研究,1962 年 Jensen 和Jscobson将放射性同位素应用于受体研究 1965年Sutherland发现了cAMP并创立了“第二信使”学说,23,1957年 Sutherland 研究儿茶酚胺对肝糖原分解效应时发现：,Adr
7、+肝组织切片 磷酸化酶活性增强 加速肝糖原分解,结论： 催化肝糖原分解的磷酸化酶是限速酶, Adr能激活此酶,证实,实验 1,24,Adr+磷酸化酶 孵育 未加速肝糖原分解,Adr催化肝糖原分解是间接作用，需某种因子参与,实验 2,25,肝匀浆+Adr 磷酸化酶被激活 加速肝糖原分解,活性物质存在于肝匀浆,实验 3,26,实验 4,将肝匀浆离心 ,取上清+ATP+Mg 2+Adr 磷酸化酶未被激活,活性物质存在于细胞膜,27,实验 5,取含细胞膜碎片的沉淀 +ATP+Mg 2+Adr 磷酸化酶被激活,28,Adr起作用时，只作用于肝细胞的膜表面 经某种发生膜结构中的过程 先在胞浆中生成某种小分
8、子物质 实现Adr分解糖原的作用,结果分析,29,取含细胞膜碎片的沉淀+Adr 离心，取上清+胞浆 糖原分解增加,一种存在于匀浆可溶部分的、耐热的活性因子被发现,实验 6,30,这种耐热的小分子物质于1960年被证明是 cAMP，分子量329.2，对热、微酸、微碱煮沸半小时稳定 Sutherland 于1965年提出“第二信使”学说 Sutherland 于1971年获诺贝尔医学、生理学奖,31,The 1971 Nobel Prize,Earl W. Sutherland, Jr.Vanderbilt University Nashville, TN, USA,32,受体的发展简史,受体概念
9、的提出 药理学研究阶段 由概念向实体的跃进阶段 分子生物学研究阶段,33,1982 年Noda和 Nums用分子生物学方法,根据N-乙酰胆碱受体-亚单位的核苷酸顺序，推出了该受体 -亚单位一级结构的氨基酸顺序，这一成就标志着受体研究进入了分子生物学研究的新阶段。,34, 受体的结合特性, 高亲合力（high affinity）：配体与受体的解离常数Kd值通常在10-9 mol/L10-12 mol/L之间。 特异性 可饱和性 可逆性 组织特异性 竞争性抑制,35, 高亲合力 特异性(specificity): 可饱和性 可逆性 组织特异性 竞争性抑制,受体只对一种特异的配体或同一类配体具有高度
10、亲合力,可保证某种靶细胞在对一种信号起反应时,不受其它信号的干扰。, 受体的结合特性,36, 高亲合力 特异性 可饱和性（saturability）:相同靶细胞所含的特定受体数目相同，故配体与受体达到最大结合值后，不再随配体浓度增高而加大结合值。 可逆性 组织特异性 竞争性抑制, 受体的结合特性,37, 高亲合力 特异性 可饱和性 可逆性（reversibility）: 受体与配体的相互结合，是通过非共价键维系的，两者形成的是络合物而不是化合物，故具有可逆性。 组织特异性 竞争性抑制, 受体的结合特性,38, 高亲合力 特异性 可饱和性 可逆性 组织特异性（target localizatio
11、n）:受体以不同密度存在于靶细胞或靶组织的不同区域，所以不同靶细胞或靶组织所含的特定受体数目也不相同。 竞争性抑制,靶细胞A,靶细胞B, 受体的结合特性,39, 高亲合力 特异性 可饱和性 可逆性 组织特异性 竞争性抑制：与配体结构相似的化合物，也能通过与受体结合，使受体与配体结合的位点减少或消失，这种现象称为竞争性抑制。, 受体的结合特性,40, 受体研究的基本方法,受体的研究方法概述受体的放射配体结合测定 受体功能分析方法,41,受体研究的基本方法-受体基本特征的研究,受体在各个水平的分布； 受体的基本结合参数：Bmax值: 受体结合的最大容量；Kd值： 受体的平衡解离常数； 配体的种类及
12、其性质； 受体型及亚型的确定。,42,利用受体和配体结合的高度特异性以及放射性核素测量的高灵敏度的特点,用放射性核素标记配体(L*),在一定条件下使其与受体结合,形成受体-配体复合物(RL*),通过测量RL*的放射活性,达到了解受体结合活性的目的。,1. 基本原理,受体研究的基本方法-放射配体结合分析,43,B,F,F,B,受体研究的基本方法-放射配体结合分析,44,L*不仅与受体呈特异性结合,还与组织蛋白(P)呈非特异结合,形成PL*.,2. 技术关键-非特异结合的干扰,R+P+L*,RL*+PL*,能否降低PL*是放射配体结合测定的关键,受体研究的基本方法-放射配体结合分析,45, 尽量降
13、低标记配体的浓度(高亲和力) 使用高放射比度的标记配体(高灵敏度) 提高标记配体的放化纯度 (特异性) 在加入L*的同时,再加入500-1000倍的L (可饱和性),3. 降低非特异结合的关键,受体研究的基本方法-放射配体结合分析,46, 样品+L*(系列浓度) 样品+L*+L(500-1000倍) 将B与F分离 将B与F分离 测定放射活性 测定放射活性 计算特异结合的放射活性 测定样品的蛋白浓度,样品的制备,4. 实验步骤,47,5. Scatchard作图-制备饱和曲线,温育,L*,组织或细胞,受体研究的基本方法-放射配体结合分析,48,投入的放射性配体量（pmol/L）,结合的放射性配体
14、量,(fmol/mg Pro),Non-specific,Specific,Total,5. Scatchard作图-制备饱和曲线,49,6.竞争抑制实验,则L与L*竞争性地与R结合， 最后形成的放射性复合物的多少，将取决于两种配体（L和L*）的量以及它们各自与该受体的亲合力，这种反应称为 竞争性结合反应。,如果在R和L*的反应体系中，加入另一种也能与该受体起特异性结合反应、但不带标记的L，,受体研究的基本方法-放射配体结合分析,50,用一种浓度的L*及14-16种浓度的L 与组织或细胞在一定条件下温育 分离已与受体结合的放射配体 放射性测定 L的浓度越大，RL*的量越少 竞争抑制曲线,6.竞
15、争抑制实验,51,100%,L浓度,50%,L*相等,6.竞争抑制实验,52,受体研究的基本方法-受体功能分析方法,受体的两个基本作用,特异结合,功 能,53,受体研究的基本方法-受体功能分析方法,要说明所测得的特异结合是受体，就必须证明它是有功能的,54,先确定是否符合受体的基本特征 具备受体基本判据 确定它是否介导特异性配体的功能 无功能：推定性受体 有功能：受体(putative receptor) (receptor),受体研究的基本方法-受体功能分析方法,55,受体研究的基本方法-受体功能分析方法,了解激动剂对所研究的细胞有无作用？有何作用？ 做激动剂的量效曲线，通过对EC50 和K
16、d值的比较，对所测定的部位是否介导了这种效应，大体上有个估计。 观察竞争性拮抗剂对效应的影响，如果能阻断激动剂所产生的效应，则可判定这种效应是由这种特异结合部位受体，所介导的。,56,100%,最大反应,药物浓度,受体研究的基本方法-受体功能分析方法,57,Lefkowitz(美国)进行-肾上腺素受体功能研究,确定他们所纯化的-肾上腺素受体是否还具有受体的功能,受体研究的基本方法-受体功能分析方法,58,他们将所纯化的蛋白质重建入人工制备的磷脂小泡,再将小泡与非洲爪蟾的红细胞融合,AC Gs,AC Gs,59,以 cAMP的生成量作为腺苷酸环化酶活性的检测指标，检测融合后的红细胞对-肾上腺素的
17、反应,AC Gs,AC Gs,60,cAMP生成增多,AC Gs,AC Gs,异丙肾上腺素,异丙肾上腺素,无 反 应,心得安,cAMP生成减少,61,受体学概述G-蛋白偶联受体简介G-蛋白偶联受体自身抗体与心脏结构和功能活动的关系,62,G-蛋白偶联受体,参与G蛋白耦联受体跨膜信号转导的主要信号分子 G-蛋白偶联受体的结构 G-蛋白耦联受体介导的跨膜信号转导,63,64,Signal transduction pathways consist of a series of steps.,Cell comunication 2003 Garland Science,65,（一）参与G蛋白耦联受体
18、跨膜信号转导的信号分子,1. G蛋白耦联受体G (protein-linked / coupled receptor),也称促代谢型受体（metabotropic receptor）或 7次跨膜受体（7-transmembrane receptor）,66,2. G蛋白,鸟苷酸结合蛋白（guanine nucleotide-binding protein），简称G蛋白（G protein），是耦联膜受体与下游效应器蛋白（酶或离子通道）的膜蛋白。,（一）参与G蛋白耦联受体跨膜信号转导的信号分子,67,（一）参与G蛋白耦联受体跨膜信号转导的信号分子,3. G蛋白效应器（G protein effe
19、ctor）,腺苷酸环化酶 (adenylyl cyclase, AC) 磷脂酶C (phospholipase C,PLC) 磷酸酶A2 (phospholipase A2, PLA2) 鸟苷酸环化酶 (guanylyl cyclase, GC) cGMP磷酸二酯酶 (phosphodiesterase, PDE)等,68,（一）参与G蛋白耦联受体跨膜信号转导的信号分子,4.第二信使（second messenger）,环一磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP) 三磷酸肌醇(inositol triphosphate, IP3) 二酰甘油(diac
20、ylglycerol, DG) 环一磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate, cGMP) Ca2+,69,G-蛋白偶联受体,参与G蛋白耦联受体跨膜信号转导的主要信号分子 G-蛋白偶联受体的结构 G-蛋白耦联受体介导的跨膜信号转导,70,similar in structure differ greatly in amino acid sequences seven (7) transmembrane alpha helices alternating cytoplasmic and extracellular loops,Structure of GPCR,71
21、,N-terminus is extracellular C-terminus is cytoplasmic extracellular domain has a unique messenger (ligand) binding site cytoplasmic domain has a binding site for a specific G-protein,Structure of GPCR,72,GPRC的结构特点,* 受体的N端可有不同的糖基化。,* C-末端的高度保守的Cys残基在肾上腺素受体、肾上腺素受体和视紫质受体中可被棕榈酰化，可稳定受体胞内部分的三级结构。,73,* 受体
22、的C-末端和胞内第三环含有多个Thr和Ser残基可被磷酸化，与抑制蛋白-视紫红质抑制蛋白结合 ，使受体不能再活化G蛋白而失活。,GPRC的结构特点,* 受体内一些高度保守的半胱氨酸残基，对维持受体的结构起到关键作用。,74,G-蛋白偶联受体结构模拟图,75,76,G-蛋白偶联受体,参与G蛋白耦联受体跨膜信号转导的主要信号分子 G-蛋白偶联受体的结构 G-蛋白耦联受体介导的跨膜信号转导,77,G-蛋白偶联受体介导的跨膜信息转导,G-蛋白的发现 G-蛋白的结构特点和分类 G-蛋白的作用机制 G-蛋白耦联受体信号转导的主要途径,78,1965年Sutherland 提出第二 信使学说1971年，Ro
23、dbell发现胰高血糖素激活大鼠cAMP需要GTP存在，提出受体与效应器之间应存在一个转换器 1977年，Ross和Gilman证实此转换器为G蛋白,G-蛋白的发现,79,认为：一些激素可激活C膜的AC，生成第二信使 物质cAMP，并以后者调节C内的代谢。H+ACcAMP 磷酸化酶 糖原分解,1965年Sutherland 提出第二 信使学说,推测：受体与AC的关系 受体与AC直接偶联； 或受体与AC的关系类似酶的调节亚单位与催化亚单位的关系。,80,1971年Rodbell的研究发现,81,细胞外,细胞内,信号A,信号B,识别器,传感器,放大器,受体,细胞内信号第二信使,Martin Rod
24、bell 的信号传导设想,细胞膜,GTP,GDP,82,1981、1983年Gilman的研究,83,1981、1983年Gilman的研究,84,1981、1983年Gilman的研究,?!,85,1981、1983年Gilman的研究,灭活了AC的细胞匀浆中，含有能激活AC的物质,86,87,“for their discovery of G-proteins and the role of these proteins in signal transduction in cells“,The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1994,Alfre
25、d G. Gilman University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas, Dallas, TX, USA,Martin Rodbell National Institute of Environmental Health Sciences, Research Triangle Park, NC, USA,88,G-蛋白偶联受体介导的跨膜信息转导,G-蛋白的发现 G-蛋白的结构特点和分类 G-蛋白的作用机制 G-蛋白耦联受体信号转导的主要途径,89,G蛋白是一个异三聚体的蛋白质，由、三个亚基组成。其中亚基具有GTPase活性。G
26、蛋白是一个有很多成员的蛋白家族，各种G蛋白差异主要在亚基上。至2001年，已确定23种G，5种G和10种G ，可以有上千种组合。,90,91,92,93,94,G-蛋白偶联受体介导的跨膜信息转导,G-蛋白的发现 G-蛋白的结构特点和分类 G-蛋白的作用机制 G-蛋白耦联受体信号转导的主要途径,95,96,97,G-蛋白偶联受体介导的跨膜信息转导,G-蛋白的发现 G-蛋白的结构特点和分类 G-蛋白的作用机制 G-蛋白耦联受体信号转导的主要途径,98,此类受体的信息转导可归纳为,99,The Life-cycle of GPCR,100,1.受体-G蛋白-AC途径,1个,至少100个,G蛋白耦联受
27、体信号转导的主要途径,101,102,103,104,二磷酸磷脂酰肌醇,G蛋白耦联受体信号转导的主要途径,2. 受体-G蛋白-PLC途径,105,受体学概述 G-蛋白偶联受体简介 G-蛋白偶联受体自身抗体与心脏结构和功能活动的关系,106,G-蛋白耦联受体结构模拟图,抗体作用位点,2AR 细胞外第二环肽段（人） H-W-Y-R-A-T-H-G-E-A-I-N-C-Y-A-N-E-T-C-C-D-F-F-T-N-G-C,107,1990年瑞典歌德堡大学的 Magnusson 等的发现； 1993年Fu等的发现； 1995年日本神奈川大学Matsui等的发现； 1996年本研究室的发现 存在的问题
28、,研究背景,108, 心脏受体自身抗体不仅存在IDCM等心脏疾病患者的血清中,而且在健康人中也存在。那么,对于抗体阳性的测定结果,如何判别正常与异常呢?,为阐明心脏受体自身抗体检测的病理意义，需进一步查明正常人自身抗体分布的免疫学特性与影响因素；,研究背景存在的问题(1),109, 在过去的研究中，国外学者，也包括我们自己将焦点过分集中于两种自身抗体在IDCM发病中的病理性作用，及其在急性实验中影响心脏活动的生物效应。,但对在整体动物，心脏病理变化对这些自身抗体产生的影响，及其与机体免疫系统功能变化的关系等，则很少问津。,研究背景存在的问题(2),110, 心脏受体自身抗体虽然在急性实验中具有
29、通过受体影响心脏活动的生物效应，但在整体免疫动物，自身抗体的长期存在会对在体心脏产生何种病理作用，尚不清楚。,对这些内容的研究可以进一步加深理解对IDCM等心脏疾患发病中自身免疫机制的理解。,研究背景存在的问题(3),111,Autoimmunity. 1999；Vol，29： 43-51 Chin J Cardiol. 1998, 26 (1): 15-17.,408例不同年龄健康人血清抗1与M2受体自身抗体的检测Screening of serum autoantibodies to 1 - and M2 -receptors in 408 healthy subjects of vary
30、ing ages,112,方 法, 健康人408例，年龄0.585岁，男/女=231/177，经X线胸片、肝功能、尿常规等检查未见异常；,检测对象, IDCM病人53例，男/女=31/22，, 以上两组均排除内分泌及自身免疫性疾病。,113,114,方 法,1与M2受体抗原多肽的合成,Peptide synthesis: A peptide corresponding to the second extracellular loop of the human 1- and M2- receptors were synthesized (Tab 1) - Receptor Position Se
31、quences -1 197-222 H-W-W-R-A-E-S-D-E-A-R-R-C-Y-N-DP-K-C-C-D-F-V-T-N-R-CM2 169-193 V-R-T-V-E-D-G-E-C-Y-I-Q-F-F-S-N-A-A-V-T-F-G-T-A-I-C -,115,116,Anti-1,Anti-M2,结果 抗体阳性率,117,结果 抗体滴度,Anti-1,Anti-M2,118,结果 抗体阳性率的年龄特点,119,结果 抗体阳性率的性别特点,健康人,心肌病患者,120,结果 建议正常值,分析408例正常人抗体阳性血清的资料，关于抗体效价水平正常值的判定，用R.B. DAgost
32、ino提出的D检验法，以单侧90可信区间的上限作为判别正常与异常的分界限，提示抗体效价1:80时才有异常意义。,121,正常人心脏心脏1与M2受体自身抗体分布特征为低阳性率，低滴度 自身抗体阳性率随年龄增高，特别是50岁以后。提示临床研究选择对照时应注意年龄匹配 性别差异不大，但心肌病病人差异大,第一部分小结 CONCLUDING REMARKS,122,心肌重构与1受体和M2受体自身抗体产生的关系Relations of Myocardial Remodeling to the Genesis of Serum Autoantibodies to Cardiac 1- adrenocepto
33、rs and M2- muscarinic Acetylcholine Receptors in Rats,J Am Coll Cardiol. 2002 Jun 5;39(11):1866-73.,123,“心室重构”(Ventricular remodeling)指心室大小、形状、重量的变化以及心肌细胞形态、数量变化和胶原纤维沉积等改变。,研究目的,复习出现两种自身抗体的心脏疾病类型，不难推断它们与心肌重构可能存在着某种内在的联系。,124,在病人身上观察心室重构与自身免疫反应的关系显然是很困难的,研究目的,为此，选用两种机制不同但均能引起心肌重构的动物模型.借以分析在模型形成过程中，该两
34、种自身抗体的产生规律及可能的病理生理学意义,125,方 法 METHODS, 缩窄主动脉型心功能不全大鼠模型采用缩窄腹主动脉法制备增大左室压力负荷的动物模型。48只12周龄健康Wistar大鼠被分成2组进行处理: 手术组(n=24) 假手术组(n=24),126,方 法 METHODS, 阿霉素中毒型心功能不全大鼠模型采用静脉注射阿霉素引起的药物中毒性心肌损伤的动物模型。48只12周龄健康Wistar大鼠被分成2组进行处理: 阿霉素组(1.0mg/kg/week，连续注射12周，n=24) 生理盐水组(n=24),127,方 法 METHODS,血清自身抗体检测（SA-ELISA）上述两模型大
35、鼠均于实施处理前及处理后第1、2、4、6、8、10、12、14周分别取血样分离血清进行两种自身抗体的测定，测定方法见第一部分。,128,方 法 METHODS,在体心功能的测定 处理后2、8、14周，每组各取8只行在体左室功能的测定。 左心室导管经右颈总动脉插入，导管的另一端借三通管连接P-50压力换能器; 压力信号输入MS302生物信号记录分析系统(广东药学院研制); 记录各心功能参数，包括左心室收缩压力(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)以及室内压上升和下降的最大速率(dp/dtmax)。,129,方 法 METHODS,外周血T淋巴细胞亚群的测定在处理前与处理后的不同时期，用流式
36、细胞仪技术测定抗大鼠CD3+、 CD4+、 CD8+荧光标记抗体与除掉了红细胞的大鼠外周血细胞结合的荧光强度，计算各亚群占T细胞总数的百分比。,130,方 法 METHODS,形态学指标的测定 心脏重量与体重的比值, 左右心室的解剖学测量 心肌染色切片胶原容积百分比的测定 光学显微镜检查 电子显微镜检查等,131,方 法 METHODS,左右心室的解剖学测量,132,方 法 METHODS,形态学指标的测定 心脏重量与体重的比值, 心肌染色切片胶原容积百分比的测定 光学显微镜检查 电子显微镜检查等, 左右心室的解剖学测量,133,方 法 METHODS,受体和M受体的放射配体结合试验流程,13
37、4,方 法 METHODS,乳鼠心肌细胞培养,135, 心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 自身抗体产生的时间过程 外周血T细胞亚群的变化 抗体生物活性的检测,心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 抗体阳性率的变化 抗体滴度的变化 自身抗体产生的时间过程 抗体生物活性的检测 结 果 RESULTS,136,第二部分,心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 抗体阳性率的变化 抗体滴度的变化 自身抗体产生的时间过程 抗体生物活性的检测 结 果 RESULTS,Changes in
38、 heart to body weight ratio (mg/g) in Wistar rats after aortic banding and adriamycin treatment (means SD, n=8). *p0.01 vs. Corresponding control group. AB: aortic banding group; ADR: adriamycin group; sham: sham operated control group; saline: saline control group.,week,*,0 2 8 14,137,心肌形态学变化及大体病理学
39、(Contral,ADR),心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 抗体阳性率的变化 抗体滴度的变化 自身抗体产生的时间过程 抗体生物活性的检测 结 果 RESULTS,C:14W,ADR:14W,138,心肌形态学变化及大体病理学(AB),第二部分,心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 抗体阳性率的变化 抗体滴度的变化 自身抗体产生的时间过程 抗体生物活性的检测 结 果 RESULTS,A,AB:2W,AB:14W,139, 心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 自身抗体产生
40、的时间过程 外周血T细胞亚群的变化 抗体生物活性的检测,心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 抗体阳性率的变化 抗体滴度的变化 自身抗体产生的时间过程 抗体生物活性的检测 结 果 RESULTS,140,心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 抗体阳性率的变化 抗体滴度的变化 自身抗体产生的时间过程 抗体生物活性的检测 结 果 RESULTS,AB,ADR,Fig 2. Changes inleft ventricular dp/dtmax afteraortic banding( AB ) and adria-my
41、cin ( ADR )treatment. *p0.01vs. Control group.,week,week,*,*,141, 心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 自身抗体产生的时间过程 外周血T细胞亚群的变化 抗体生物活性的检测,心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 抗体阳性率的变化 抗体滴度的变化 自身抗体产生的时间过程 抗体生物活性的检测 结 果 RESULTS,142,心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 抗体阳性率的变化 抗体滴度的变化 自身抗体产生的时间过程
42、 抗体生物活性的检测 结 果- 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系, 根据大体解剖学、图象分析技术、光镜、电镜等检查，手术组和阿霉素两处理组均引起了明显的心肌重构。,A,A:ControlB:AB C:ADR,143, 根据大体解剖学、图象分析技术、光镜、电镜等检查，手术组和阿霉素两处理组均引起了明显的心肌重构。,心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 抗体阳性率的变化 抗体滴度的变化 自身抗体产生的时间过程 抗体生物活性的检测 结 果- 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系,144,Fig 6. Changes in the frequency of
43、occurrence of both auto-antibodies in the sera before and after treatment. Values are meansSD. Control:control of both experimental group, n=48; AB:aortic banding group, n=24; ADR:adriamycin group, n=24. *p0.01 vs control,Anti-1,Anti-M2,145,Fig 7. Changes in titres of both autoantibodies in the sera
44、 pre- and post-treatment . Values are meansSD. Control: control of both experimental group, n=48; AB: aotic banding group, n=24; ADR: adriamycin group, n=24, *p0.01 vs. control .,Anti-1,Anti-M2,146, 心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 自身抗体产生的时间过程 外周血T细胞亚群的变化 抗体生物活性的检测,心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受
45、体自身抗体产生的关系 抗体阳性率的变化 抗体滴度的变化 自身抗体产生的时间过程 抗体生物活性的检测 结 果 RESULTS,147,Fig 8. Time course of genesis of both auto- antibodies expressed in terms of changes in titers of auto-antibodies after aortic banding (AB) and adriamycin (ADR) treatment.,148, 心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 自身抗体产生的时间过程 外周血T细胞
46、亚群的变化 抗体生物活性的检测,心肌形态学变化及大体病理学 心功能变化 心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系 抗体阳性率的变化 抗体滴度的变化 自身抗体产生的时间过程 抗体生物活性的检测 结 果 RESULTS,149,Table 3. Changes in T lymphocyte subsets after aortic banding treatmentGroup CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+AB0 52.447.2 39.673.82 18.940.4 1.9 0.4AB2 55.365.41 46.095.14* 16.893.02* 2.860.24*AB8 56.296.38 50.647.62* 15.162.89* 3.260.24*AB14 56.975.94 41.613.67 19.043.94 1.990.51,
