1、手足口病实验室检验问题研究 【摘要】手足口病（HFMD）是由肠道病毒引起的全球性急性传染病，通过检验血常规、心肌酶、cTnI、CRP、血糖、乳酸、血气分析及脑脊液，能够早期诊断HFMD；分离到病毒颗粒是确定诊断的最客观依据，肠道病毒特异性核酸检测阳性，血清学中和实验阳性均可确定诊断。实时荧光RT-PCR 扩增技术是目前检测EV、EV71 和CA16 的首选方法。 【关键词】手足口病； 检验； 治疗； 进展 【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2014）01-0299-011. 对象与方法 1.1 对象：所有 2012年 5 月在某医院手足口病专科就诊的患儿 1
2、694 例，一般症状为急性发热，口腔黏膜或手掌、脚掌部出现散在疱疹，部分患儿伴有咳嗽、流涕等症状。 1.2 试剂：深圳市赛尔生物技术有限公司生产的 CoxA-IgM和 Echo-IgM 试剂盒（胶体金法）。 1.3 方法：将试剂室温平衡 30 min 后在加样孔加 2 滴洗液，待干；加 100 L 血清，待干；再加 4 滴洗液，待干；然后 3 滴显色液，待干；最后再加 4 滴洗涤液，待干。如果小孔中央出现 2 个均匀红色的圆斑为阳性，如果质控段有红斑、测试段无红斑或很浅，均为阴性。 2 .结 果 测定 CoxA-IgM 1646 例，阳性 951 例（57.8%）、Echo-IgM1670 例
3、，阳性 967 例（57.9%）。 3. 讨 论 手足口病是由肠道病毒引起的传染病，多发生于婴幼儿，四季均可发病，以夏秋季高发。它是一种全球性传染病，世界大部分地区均有流行报道。本病常呈暴发流行后散在发生；流行期间，幼儿园和托儿所易发生集体感染。该病主要表现为急性起病，发热；口腔黏膜出现散在疱疹（米粒大小），疼痛明显；手掌或脚掌部出现米粒大小疱疹，臀部或膝盖偶可受累；疱疹周围有炎性红晕，疱内液体较少。部分患儿可伴有咳嗽、流涕、食欲不振、恶心、呕吐、头疼等症状。手足口病只是可引起口腔溃疡的许多种传染病中的一种，另一种常见的口腔溃疡的原因是口腔疱疹病毒感染，因此必须对疑似患儿进行必要的实验室检查。
4、 目前肠道病毒的实验室诊断包括以下三大类： a.血液检查 血常规：白细胞计数正常或降低，病情危重者白细胞计数可明显升高。重症手足口病中WBC计数增高患儿占50.00%。 肌钙蛋白I （cTnI）检查：cTnI 仅存于心脏，是心肌特异性抗原，当受到病毒感染的心肌细胞发生变性坏死时，cTnI 通过破损的细胞膜释放入血，于35 h 升高，24 h 达高峰。在血液中持续较长时间，反映心肌细胞损害的特异性高达97%100%，是理想的心肌细胞特异性标志物。与心肌酶学联合应用，可以提高其检出率。 心肌酶检查：部分病例可有谷草转氨酶（AST）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）升高，尤其是重症患儿，表明FMD患者合
5、并有心肌损伤。心肌炎是一种比较严重的并发症，也是造成患儿死亡的主要原因。但是心肌酶活性增高幅度及比例都有明显差异。 血糖：血糖一般偏低，可能与患者发热以及口腔疱疹影响进食等因素有关，但重症患者可出现应激性高血糖，王晓明等报道最高达22.0 mmol/L，研究表明，HFMD患儿一旦血糖增高，肢体无力，常提示病变累及脑干，多病情危重，预后不佳。 C反应蛋白（C-reactive protein，CRP） ：CRP是一种敏感的急性炎性反应标志物，升高程度常与炎性反应、组织损伤的程度呈正相关，急性细菌性感染时，CRP会升高或明显升高，有些病毒感染造成较大的组织损伤时，可使CRP含量增高，HFMD患儿C
6、RP一般不升高， HFMD患儿HSCRP水平明显升高，CRP检测是有意义的。 乳酸：实验室检查结果显示危重症患儿血乳酸明显高于重症患儿（P 血气分析：呼吸系统受累时可有动脉血氧分压降低、血氧饱和度下降，二氧化碳分压升高，酸中毒。 b.脑脊液检查 HFMD患儿的脑脊液外观清亮，压力增高，白细胞计数增多，多以单核细胞为主，蛋白正常或轻度增多，糖和氯化物正常。重症患儿脑脊液白细胞、多核细胞比例明显升高，脑脊液胱抑素C浓度明显降低。并发神经系统感染患儿脑脊液细胞数均升高，其中以淋巴细胞升高为主。 c.病原学检查 病毒分离培养：分离到病毒颗粒是确定诊断的最客观依据。咽、气道分泌物、疱疹液、粪便阳性率较高
7、。张分离出的肠道病毒大多来自咽拭子和粪便，脑脊液中未分离到病毒。肠道病毒（CoxA16、EV71等）特异性核酸检测阳性，亦可确诊HFMD。 血清学检测：急性期与恢复期血清CoxA16、EV71 等肠道病毒中和抗体有4 倍以上的升高，该方法精确且具有特异性，但不适用于早期诊断，可作为回顾性诊断，且由于肠道病毒血清型别众多，临床使用检测价值有限，而多为流行病学采用。 聚合酶链反应（PCR）技术检测：（1） 逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR） 。该方法检测标本中的EV71 快速、简单、敏感性高，适用于咽拭子、粪便、各种体液及组织中EV71 RNA的检测，是诊断EV71 感染的有效方法。但此法PCR
8、 后仍需进行凝胶电泳分析，操作也较为繁琐，同时存在假阴性、早期患者阳性率低以及无法对多种病毒联合检测等不足。（2）实时荧光PCR （Real-time RT-PCR） 。实时荧光PCR应用与靶序列直接结合的荧光探针可将生产的RNA 加以定量，其特点为检测快速、敏感性强、扩增产物可直接定量、密闭系统防止交叉污染等。实时荧光RT-PCR 扩增技术越来越多的用于肠道病毒的检测，是目前检测EV、EV71 和CA16 的首选方法。（3） 基因芯片技术。该技术可以同时检测多段基因，因此具有较高的灵敏度。也可以有效地降低检测的假阳性率。此外，可以将多种与EV71 早期症状类似的病毒点样到芯片上进行联合诊断，
9、对于确诊患者、排除疑似患者具有重要意义。 本实验室采用操作快速简便的金标法检测柯萨奇病毒和埃可病毒 IgM，为临床及时诊断手足口病提供了有效的实验室依据。每年的 5-7 月是手足口病流行高发季节，发病时间高峰位于 7 月份左右。据调查显示我国今年该病已提前进入高发期，疫情防控形势十分严峻。在对该医院 5 月份在某医院手足口病专科就诊患儿血清中的 Cox-IgM 和 Echo-IgM 进行检测，2 项指标的阳性率均为 58%左右，较去年同期 Cox-IgM（+）37.5%、Echo-IgM（+）38.2%明显上升，数据表明本地区手足口病已提前进入高发，必须加强措施，防止疫情快速扩散。预防手足口病的关键是注意家庭及周围环境卫生，讲究个人卫生。饭前便后、外出后要用肥皂或洗手液洗手；不喝生水，不吃生冷的食物；居室要经常通风；要勤晒衣被。该病流行期间不带孩子到人群密集、空气流通差的公共场所，要避免接触患病儿童。 参考文献 1刘湘云. 肠道病毒感染. 北京： 人民卫生出版社， 2002. 2李兰娟. 手足口病预防控制指南. 杭州：浙江科技出版社，2008. 3中华人民共和国卫生部. 肠道病毒（EV71） 感染诊疗指南. 北京： 中华人民共和国卫生部， 2008.第 6 页 共 6 页
