1、Order: 010-59822688Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。版本号: EP170330产品内容产品组成NG103-01 NG103-02 (24 rxn) (96 rxn) End-Repair Mix 24支 196孔板A-Tailing Mix 24支 196孔板Ligation Mix 24支 196孔板储存条件试剂盒中End-Repair Mix，A-Tailing Mix和Ligation Mix可于室
2、温下（1525）保存，保质期为一年。试剂盒中未使用完的组份（末端修复、A尾添加和接头连接等试剂冻干粉）经自封铝箔袋封装后可在室温条件下保存。铝箔袋开封后请勿丢弃其中的干燥剂，并在2个月内将所有组份用完。TIANSeq DNA Library Prep Kit (illumina)TIANSeq DNA文库构建试剂盒（illumina平台）目录号：NG103浓缩国际权威精华，铸就TIANGEN优秀品质！TIANGEN为您提供国际化标准的生物学产品和服务 PCR、RT-PCR系列 核酸DNA、RNA分离纯化系列 DNA分子量标准 克隆载体、感受态细胞 细胞生物学产品 蛋白分子量标准 蛋白质染色、检
3、测及定量相关产品8产品简介 TIANSeq DNA Library Prep Kit (illumina)是专门针对于illumina高通量测序平台所优化的DNA文库构建试剂盒。由末端修复（End-Repair Mix）、A尾添加（A-Tailing Mix）和接头连接（Ligation Mix）三个模块构成。与同类试剂不同的是：本产品所含有的模块均为一管式包装，且经特殊工艺加工呈冻干粉状，极大增强了试剂稳定性，可在室温条件下运输，保存和实验操作，省去了体系配制，低温保藏等繁琐操作，使得操作更加简便，文库转化效率更高。适用范围：适用于illumina高通量测序平台DNA文库构建。适用样本量：1
4、0 ng1 g DNA。推荐使用的其他试剂1. TIANSeq Single-Indexed Adapter (IlluminaPlatforms) （NG214-01/02/03）。2. TIANSeq NGS Library Amplication Module （NG304-01/02）。3. BECKMAN Agencourt AMPure XP磁珠。产品特点1. 冻干粉形式，单管酶促反应，一管完成一步反应。2. 高文库转化效率， DNA样本起始量可低至10 ng。3. 操作简便，省去体系配制，低温保藏等步骤。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项1. 操作过程请注意避免核酸
5、样品和产物之间的交叉污染。2. 请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。3. 试验开始前，请清洁操作台，并使用RNA酶及DNA酶清除试剂，如RNase Away（Molecular BioProducts, Inc）处理台面。确保没有RNA酶和DNA的污染。4. 进行文库扩增前，请确保PCR仪已经调试好并处于稳定的状态。5. 试验前请仔细阅读说明书，如果需要暂停试验，或者无需立即进行下游试验。可根据说明书推荐将试验产物保存于-20并安排后续试验。19. 将反应管开盖置于磁力架上，室温干燥5 min。磁珠干燥期间请计算片段筛选过程中所需的DNA量（Z）。注：由于不同的片段选择方法所需
6、的上样量不同，用户可以根据后续片段筛选方法确定接头连接产物的洗脱体积（Z+2.5 l）。其中，推荐Z的取值范围为：20Z100。如果不进行片段筛选，则推荐再次使用AMPureXP磁珠进行纯化以降低接头污染（50 l 接头连接产物加入50 l磁珠，Z=50 l）。如果不明确如何选择Z值，请参阅说明书第五部分。20. 将反应管从磁力架上取下，加入(Z+2.5) l洗脱缓冲液（10 mM Tris-HCl, pH8.0; 10 mM Tris, 0.1 mM EDTA, pH 8.0或者去离子水）。用移液器吸打使磁珠悬浮。21. 将反应管置于磁力架上3 min，待溶液澄清。小心吸取上清至新离心管。2
7、2. 小心吸取上清Z l至新离心管，直接进入说明书第五部分或将产物保存于-20（接头连接后的DNA产物可在-20保存7天）。五、片段筛选若使用Illumina平台进行测序或进行基因组测序，文库DNA片段平均大小应为400 bp（包含接头）。片段筛选步骤即旨在特异性地回收得到这部分片段，而去除过大或过小的双链及单链DNA片段。以下是常用的片段筛选方法，以及使用这些方法时所需要的连接产物体积（Z）。1. 琼脂糖凝胶回收（Z=20 l）；2. Sage Science Pippin PrepTM（Z=30 l）；3. Life TechnologiesTM E-GelSizeSelectTM Gel
8、s（Z=20 l）；4. 基于磁珠的片段筛选方法（Z=100 l）。注：片段筛选步骤一般在接头连接后进行，以控制文库中DNA片段大小。但用户也可以根据自身需要在末端修复完成后即进行片段筛选。六、文库扩增本试剂盒不含PCR试剂及引物。用户需要自行选择PCR试剂，并根据文库DNA上样量确定扩增循环数。PCR结束后，可使用AMPureXP磁珠（Cat# A63881）对产物进行纯化，并使用凝胶电泳、Qubit、qPCR以及Angilent生物分析仪对纯化后的DNA文库进行分析。推荐试剂为TIANGEN的TIANSeq NGS Library Amplication Module （NG304）。2
9、74. 按下表建立接头连接反应体系：组分 用量添加A尾后DNA纯化产物 X lDNA接头* Y l总体系 50 l注：本试剂盒中不含DNA接头。接头用量需根据文库DNA片段用量进行调整。推荐接头产品为TIANGEN 的TIANSeq Single-Indexed Adapter (IlluminaPlatforms) （NG214-01/02/03）。该产品说明书中详细给出了不同情况下，DNA片段与接头的最佳摩尔比，客户可进行参考。若使用其他公司的接头产品，则需参考其说明书操作。5. 用移液器轻柔吸打68次混匀反应体系。6. 20孵育15 min。7. 使用AMPureXP磁珠纯化末端修复产物
10、。8. 纯化开始前将AMPureXP磁珠平衡至室温。9. 使用前将AMPureXP磁珠涡旋使其充分悬浮。10. 若反应管与磁力架不兼容，可将末端补平反应液转移至与磁力架兼容的离心管中。注：此离心管须能够容纳200 l液体。11. 每50 l末端修复反应液中加入50 lAMPureXP磁珠，吸打混匀至少5 次。12. 室温放置5 min。13. 将含磁珠的反应液置磁力架上3 min，待溶液变清澈。14. 用移液器吸除上清，约95 l。注：在吸入上清的过程中不要扰动磁珠，除去上清后管底剩余少量液体不影响后续试验。15. 保持反应管置于磁力架上，向反应管管底轻柔加入200 l 80%乙醇(注意不要扰
11、动磁珠)，室温孵育30 sec。16. 小心去除80%乙醇（200 l），不要扰动磁珠。17. 用80%乙醇重复洗涤一次（步骤15-16）。18. 将反应管瞬时离心后置于磁力架上，使用 20 l量程的移液器小心去除管底残留的乙醇。操作步骤一、DNA片段化本试剂盒不包含DNA片段化相关试剂。对于DNA的片段化过程，客户可在超声处理、化学处理和酶处理等常用方法中选择，具体操作请参考相关产品说明。二、末端修复1. 沿锡箔纸封口袋顶部切口位置撕开试剂包装袋。2. 取出一支管盖呈蓝色的1.5 ml离心管用于末端修复反应。每支1.5ml离心管中所含的冻干粉试剂可供一次文库构建反应使用。3. 如有需要，可瞬
12、时离心以确保冻干粉聚集于离心管底。4. 按下表建立末端修复反应体系：组分 用量双链DNA（ds DNA）片段（10 ng-1000 ng） X lddH2O 100-X l总体系 100 l5. 用移液器轻柔吸打68次混匀反应体系。6. 20孵育30 min。7. 使用AMPureXP磁珠纯化末端修复产物。8. 纯化开始前将AMPureXP磁珠平衡至室温。9. 使用前将AMPureXP磁珠涡旋使其充分悬浮。10. 若反应管与磁力架不兼容，可将末端补平反应液转移至与磁力架兼容的离心管中。注：此离心管须能够容纳260 l液体。11. 每100 l末端修复反应液中加入160 l AMPureXP磁珠
13、，吸打混匀至少5 次。12. 室温放置5 min。13. 将含磁珠的反应液置磁力架上3 min，待溶液变清澈。6 34. 按下表建立接头连接反应体系：组分 用量添加A尾后DNA纯化产物 X lDNA接头* Y l总体系 50 l注：本试剂盒中不含DNA接头。接头用量需根据文库DNA片段用量进行调整。推荐接头产品为TIANGEN 的TIANSeq Single-Indexed Adapter (IlluminaPlatforms) （NG214-01/02/03）。该产品说明书中详细给出了不同情况下，DNA片段与接头的最佳摩尔比，客户可进行参考。若使用其他公司的接头产品，则需参考其说明书操作。5
14、. 用移液器轻柔吸打68次混匀反应体系。6. 20孵育15 min。7. 使用AMPureXP磁珠纯化末端修复产物。8. 纯化开始前将AMPureXP磁珠平衡至室温。9. 使用前将AMPureXP磁珠涡旋使其充分悬浮。10. 若反应管与磁力架不兼容，可将末端补平反应液转移至与磁力架兼容的离心管中。注：此离心管须能够容纳200 l液体。11. 每50 l末端修复反应液中加入50 lAMPureXP磁珠，吸打混匀至少5 次。12. 室温放置5 min。13. 将含磁珠的反应液置磁力架上3 min，待溶液变清澈。14. 用移液器吸除上清，约95 l。注：在吸入上清的过程中不要扰动磁珠，除去上清后管底
15、剩余少量液体不影响后续试验。15. 保持反应管置于磁力架上，向反应管管底轻柔加入200 l 80%乙醇(注意不要扰动磁珠)，室温孵育30 sec。16. 小心去除80%乙醇（200 l），不要扰动磁珠。17. 用80%乙醇重复洗涤一次（步骤15-16）。18. 将反应管瞬时离心后置于磁力架上，使用 20 l量程的移液器小心去除管底残留的乙醇。操作步骤一、DNA片段化本试剂盒不包含DNA片段化相关试剂。对于DNA的片段化过程，客户可在超声处理、化学处理和酶处理等常用方法中选择，具体操作请参考相关产品说明。二、末端修复1. 沿锡箔纸封口袋顶部切口位置撕开试剂包装袋。2. 取出一支管盖呈蓝色的1.5
16、 ml离心管用于末端修复反应。每支1.5ml离心管中所含的冻干粉试剂可供一次文库构建反应使用。3. 如有需要，可瞬时离心以确保冻干粉聚集于离心管底。4. 按下表建立末端修复反应体系：组分 用量双链DNA（ds DNA）片段（10 ng-1000 ng） X lddH2O 100-X l总体系 100 l5. 用移液器轻柔吸打68次混匀反应体系。6. 20孵育30 min。7. 使用AMPureXP磁珠纯化末端修复产物。8. 纯化开始前将AMPureXP磁珠平衡至室温。9. 使用前将AMPureXP磁珠涡旋使其充分悬浮。10. 若反应管与磁力架不兼容，可将末端补平反应液转移至与磁力架兼容的离心管
17、中。注：此离心管须能够容纳260 l液体。11. 每100 l末端修复反应液中加入160 l AMPureXP磁珠，吸打混匀至少5 次。12. 室温放置5 min。13. 将含磁珠的反应液置磁力架上3 min，待溶液变清澈。6 314. 用移液器分两次吸除上清，每次128 l。注意在吸入上清的过程中不要扰动磁珠，除去上清后管底剩余少量液体不影响后续试验。15. 保持反应管置于磁力架上， 向反应管管底轻柔加入200 l 80%乙醇（注意不要扰动磁珠），室温孵育30 sec。16. 小心去除80%乙醇（200 l），不要扰动磁珠。17. 用80%乙醇重复洗涤一次（步骤15-16）。18. 将反应管
18、瞬时离心后置于磁力架上，使用 20 l量程的移液器小心去除管底残留的乙醇。19. 将反应管开盖置于磁力架上，室温干燥5 min20. 将反应管从磁力架上取下，加入52.5 l洗脱缓冲液（10 mM Tris-HCl, pH8.0; 10mM Tris, 0.1 mM EDTA, pH 8.0或者去离子水）。用移液器吸打使磁珠悬浮。21. 将反应管置于磁力架上3 min，待溶液澄清。小心吸取上清至新离心管。22. 立刻进入A尾添加程序或将产物保存于-20 （末端补平产物可在-20保存7天）。三、A尾添加1. 沿锡箔纸封口袋顶部切口位置撕开试剂包装袋。2. 取出一支管盖呈黄色的1.5 ml离心管用
19、于A尾添加反应。每支1.5 ml离心管中所含的冻干粉 试剂可供一次文库构建反应使用。3. 如有需要，可瞬时离心以确保冻干粉聚集于离心管底。4. 向反应管内加入50 l末端修复后的DNA纯化产物（末端修复之步骤22）。 5. 用移液器轻柔吸打68次混匀反应体系。6. 30孵育30 min。7. 使用AMPureXP磁珠纯化A尾添加产物。8. 纯化开始前将AMPureXP磁珠平衡至室温。9. 使用前将AMPureXP磁珠涡旋使其充分悬浮。10. 若反应管与磁力架不兼容，可将A尾添加反应液转移至与磁力架兼容的离心管中。注：此离心管须能够容纳200 l液体。11. 每50 l末端修复反应液中加入90
20、l AMPureXP磁珠，吸打混匀至少5 次。12. 室温放置5 min。13. 将含磁珠的反应液置磁力架上3 min，待溶液变清澈。14. 用移液器吸除上清，约135 l。注：吸入上清的过程中不要扰动磁珠，除去上清后管底剩余少量液体不影响后续试验。15. 保持反应管置于磁力架上， 向反应管管底轻柔加入200 l 80%乙醇（注意不要扰动磁珠），室温孵育30 sec。16. 小心去除80%乙醇（200 l），不要扰动磁珠。17. 用80%乙醇重复洗涤一次（步骤15-16）。18. 将反应管瞬时离心后置于磁力架上，使用 20 l量程的移液器小心去除管底残留的乙醇。19. 将反应管开盖置于磁力架上
21、，室温干燥5 min。磁珠干燥期间请计算接头连接过程中所需的DNA量（X）以及接头用量（接头连接步骤中第4步）。注：文库DNA与接头在适当的摩尔比范围内可以增加接头连接效率，进而提高文库质量和丰度。另外，使用过小体积溶液洗脱会造成DNA得率显著降低，故应使X20 l。20. 将反应管从磁力架上取下，加入(X+2.5) l洗脱缓冲液（10 mM Tris-HCl, pH8.0; 10 mM Tris, 0.1 mM EDTA, pH 8.0或者去离子水）。用移液器吸打使磁珠悬浮。21. 将反应管置于磁力架上3 min，待溶液澄清。小心吸取上清至新离心管。22. 直接进入接头连接步骤或将产物保存于
22、-20（添加A尾后的DNA产物可在-20 保存7天）。四、接头连接1. 沿锡箔纸封口袋顶部切口位置撕开试剂包装袋。2. 取出一支管盖呈紫色的1.5 ml离心管用于末端修复反应。每支1.5 ml离心管中所含的冻干粉试剂可供一次文库构建反应使用。3. 如有需要，可瞬时离心以确保冻干粉聚集于离心管底。4 514. 用移液器分两次吸除上清，每次128 l。注意在吸入上清的过程中不要扰动磁珠，除去上清后管底剩余少量液体不影响后续试验。15. 保持反应管置于磁力架上， 向反应管管底轻柔加入200 l 80%乙醇（注意不要扰动磁珠），室温孵育30 sec。16. 小心去除80%乙醇（200 l），不要扰动磁
23、珠。17. 用80%乙醇重复洗涤一次（步骤15-16）。18. 将反应管瞬时离心后置于磁力架上，使用 20 l量程的移液器小心去除管底残留的乙醇。19. 将反应管开盖置于磁力架上，室温干燥5 min20. 将反应管从磁力架上取下，加入52.5 l洗脱缓冲液（10 mM Tris-HCl, pH8.0; 10mM Tris, 0.1 mM EDTA, pH 8.0或者去离子水）。用移液器吸打使磁珠悬浮。21. 将反应管置于磁力架上3 min，待溶液澄清。小心吸取上清至新离心管。22. 立刻进入A尾添加程序或将产物保存于-20 （末端补平产物可在-20保存7天）。三、A尾添加1. 沿锡箔纸封口袋顶
24、部切口位置撕开试剂包装袋。2. 取出一支管盖呈黄色的1.5 ml离心管用于A尾添加反应。每支1.5 ml离心管中所含的冻干粉 试剂可供一次文库构建反应使用。3. 如有需要，可瞬时离心以确保冻干粉聚集于离心管底。4. 向反应管内加入50 l末端修复后的DNA纯化产物（末端修复之步骤22）。 5. 用移液器轻柔吸打68次混匀反应体系。6. 30孵育30 min。7. 使用AMPureXP磁珠纯化A尾添加产物。8. 纯化开始前将AMPureXP磁珠平衡至室温。9. 使用前将AMPureXP磁珠涡旋使其充分悬浮。10. 若反应管与磁力架不兼容，可将A尾添加反应液转移至与磁力架兼容的离心管中。注：此离心
25、管须能够容纳200 l液体。11. 每50 l末端修复反应液中加入90 l AMPureXP磁珠，吸打混匀至少5 次。12. 室温放置5 min。13. 将含磁珠的反应液置磁力架上3 min，待溶液变清澈。14. 用移液器吸除上清，约135 l。注：吸入上清的过程中不要扰动磁珠，除去上清后管底剩余少量液体不影响后续试验。15. 保持反应管置于磁力架上， 向反应管管底轻柔加入200 l 80%乙醇（注意不要扰动磁珠），室温孵育30 sec。16. 小心去除80%乙醇（200 l），不要扰动磁珠。17. 用80%乙醇重复洗涤一次（步骤15-16）。18. 将反应管瞬时离心后置于磁力架上，使用 20
26、 l量程的移液器小心去除管底残留的乙醇。19. 将反应管开盖置于磁力架上，室温干燥5 min。磁珠干燥期间请计算接头连接过程中所需的DNA量（X）以及接头用量（接头连接步骤中第4步）。注：文库DNA与接头在适当的摩尔比范围内可以增加接头连接效率，进而提高文库质量和丰度。另外，使用过小体积溶液洗脱会造成DNA得率显著降低，故应使X20 l。20. 将反应管从磁力架上取下，加入(X+2.5) l洗脱缓冲液（10 mM Tris-HCl, pH8.0; 10 mM Tris, 0.1 mM EDTA, pH 8.0或者去离子水）。用移液器吸打使磁珠悬浮。21. 将反应管置于磁力架上3 min，待溶液
27、澄清。小心吸取上清至新离心管。22. 直接进入接头连接步骤或将产物保存于-20（添加A尾后的DNA产物可在-20 保存7天）。四、接头连接1. 沿锡箔纸封口袋顶部切口位置撕开试剂包装袋。2. 取出一支管盖呈紫色的1.5 ml离心管用于末端修复反应。每支1.5 ml离心管中所含的冻干粉试剂可供一次文库构建反应使用。3. 如有需要，可瞬时离心以确保冻干粉聚集于离心管底。4 54. 按下表建立接头连接反应体系：组分 用量添加A尾后DNA纯化产物 X lDNA接头* Y l总体系 50 l注：本试剂盒中不含DNA接头。接头用量需根据文库DNA片段用量进行调整。推荐接头产品为TIANGEN 的TIANS
28、eq Single-Indexed Adapter (IlluminaPlatforms) （NG214-01/02/03）。该产品说明书中详细给出了不同情况下，DNA片段与接头的最佳摩尔比，客户可进行参考。若使用其他公司的接头产品，则需参考其说明书操作。5. 用移液器轻柔吸打68次混匀反应体系。6. 20孵育15 min。7. 使用AMPureXP磁珠纯化末端修复产物。8. 纯化开始前将AMPureXP磁珠平衡至室温。9. 使用前将AMPureXP磁珠涡旋使其充分悬浮。10. 若反应管与磁力架不兼容，可将末端补平反应液转移至与磁力架兼容的离心管中。注：此离心管须能够容纳200 l液体。11.
29、 每50 l末端修复反应液中加入50 lAMPureXP磁珠，吸打混匀至少5 次。12. 室温放置5 min。13. 将含磁珠的反应液置磁力架上3 min，待溶液变清澈。14. 用移液器吸除上清，约95 l。注：在吸入上清的过程中不要扰动磁珠，除去上清后管底剩余少量液体不影响后续试验。15. 保持反应管置于磁力架上，向反应管管底轻柔加入200 l 80%乙醇(注意不要扰动磁珠)，室温孵育30 sec。16. 小心去除80%乙醇（200 l），不要扰动磁珠。17. 用80%乙醇重复洗涤一次（步骤15-16）。18. 将反应管瞬时离心后置于磁力架上，使用 20 l量程的移液器小心去除管底残留的乙醇
30、。操作步骤一、DNA片段化本试剂盒不包含DNA片段化相关试剂。对于DNA的片段化过程，客户可在超声处理、化学处理和酶处理等常用方法中选择，具体操作请参考相关产品说明。二、末端修复1. 沿锡箔纸封口袋顶部切口位置撕开试剂包装袋。2. 取出一支管盖呈蓝色的1.5 ml离心管用于末端修复反应。每支1.5ml离心管中所含的冻干粉试剂可供一次文库构建反应使用。3. 如有需要，可瞬时离心以确保冻干粉聚集于离心管底。4. 按下表建立末端修复反应体系：组分 用量双链DNA（ds DNA）片段（10 ng-1000 ng） X lddH2O 100-X l总体系 100 l5. 用移液器轻柔吸打68次混匀反应体
31、系。6. 20孵育30 min。7. 使用AMPureXP磁珠纯化末端修复产物。8. 纯化开始前将AMPureXP磁珠平衡至室温。9. 使用前将AMPureXP磁珠涡旋使其充分悬浮。10. 若反应管与磁力架不兼容，可将末端补平反应液转移至与磁力架兼容的离心管中。注：此离心管须能够容纳260 l液体。11. 每100 l末端修复反应液中加入160 l AMPureXP磁珠，吸打混匀至少5 次。12. 室温放置5 min。13. 将含磁珠的反应液置磁力架上3 min，待溶液变清澈。6 3产品简介 TIANSeq DNA Library Prep Kit (illumina)是专门针对于illumi
32、na高通量测序平台所优化的DNA文库构建试剂盒。由末端修复（End-Repair Mix）、A尾添加（A-Tailing Mix）和接头连接（Ligation Mix）三个模块构成。与同类试剂不同的是：本产品所含有的模块均为一管式包装，且经特殊工艺加工呈冻干粉状，极大增强了试剂稳定性，可在室温条件下运输，保存和实验操作，省去了体系配制，低温保藏等繁琐操作，使得操作更加简便，文库转化效率更高。适用范围：适用于illumina高通量测序平台DNA文库构建。适用样本量：10 ng1 g DNA。推荐使用的其他试剂1. TIANSeq Single-Indexed Adapter (IlluminaP
33、latforms) （NG214-01/02/03）。2. TIANSeq NGS Library Amplication Module （NG304-01/02）。3. BECKMAN Agencourt AMPure XP磁珠。产品特点1. 冻干粉形式，单管酶促反应，一管完成一步反应。2. 高文库转化效率， DNA样本起始量可低至10 ng。3. 操作简便，省去体系配制，低温保藏等步骤。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项1. 操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。2. 请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。3. 试验开始前，请清洁操作台，并使用RNA酶
34、及DNA酶清除试剂，如RNase Away（Molecular BioProducts, Inc）处理台面。确保没有RNA酶和DNA的污染。4. 进行文库扩增前，请确保PCR仪已经调试好并处于稳定的状态。5. 试验前请仔细阅读说明书，如果需要暂停试验，或者无需立即进行下游试验。可根据说明书推荐将试验产物保存于-20并安排后续试验。19. 将反应管开盖置于磁力架上，室温干燥5 min。磁珠干燥期间请计算片段筛选过程中所需的DNA量（Z）。注：由于不同的片段选择方法所需的上样量不同，用户可以根据后续片段筛选方法确定接头连接产物的洗脱体积（Z+2.5 l）。其中，推荐Z的取值范围为：20Z100。如
35、果不进行片段筛选，则推荐再次使用AMPureXP磁珠进行纯化以降低接头污染（50 l 接头连接产物加入50 l磁珠，Z=50 l）。如果不明确如何选择Z值，请参阅说明书第五部分。20. 将反应管从磁力架上取下，加入(Z+2.5) l洗脱缓冲液（10 mM Tris-HCl, pH8.0; 10 mM Tris, 0.1 mM EDTA, pH 8.0或者去离子水）。用移液器吸打使磁珠悬浮。21. 将反应管置于磁力架上3 min，待溶液澄清。小心吸取上清至新离心管。22. 小心吸取上清Z l至新离心管，直接进入说明书第五部分或将产物保存于-20（接头连接后的DNA产物可在-20保存7天）。五、片
36、段筛选若使用Illumina平台进行测序或进行基因组测序，文库DNA片段平均大小应为400 bp（包含接头）。片段筛选步骤即旨在特异性地回收得到这部分片段，而去除过大或过小的双链及单链DNA片段。以下是常用的片段筛选方法，以及使用这些方法时所需要的连接产物体积（Z）。1. 琼脂糖凝胶回收（Z=20 l）；2. Sage Science Pippin PrepTM（Z=30 l）；3. Life TechnologiesTM E-GelSizeSelectTM Gels（Z=20 l）；4. 基于磁珠的片段筛选方法（Z=100 l）。注：片段筛选步骤一般在接头连接后进行，以控制文库中DNA片段大
37、小。但用户也可以根据自身需要在末端修复完成后即进行片段筛选。六、文库扩增本试剂盒不含PCR试剂及引物。用户需要自行选择PCR试剂，并根据文库DNA上样量确定扩增循环数。PCR结束后，可使用AMPureXP磁珠（Cat# A63881）对产物进行纯化，并使用凝胶电泳、Qubit、qPCR以及Angilent生物分析仪对纯化后的DNA文库进行分析。推荐试剂为TIANGEN的TIANSeq NGS Library Amplication Module （NG304）。2 74. 按下表建立接头连接反应体系：组分 用量添加A尾后DNA纯化产物 X lDNA接头* Y l总体系 50 l注：本试剂盒中不
38、含DNA接头。接头用量需根据文库DNA片段用量进行调整。推荐接头产品为TIANGEN 的TIANSeq Single-Indexed Adapter (IlluminaPlatforms) （NG214-01/02/03）。该产品说明书中详细给出了不同情况下，DNA片段与接头的最佳摩尔比，客户可进行参考。若使用其他公司的接头产品，则需参考其说明书操作。5. 用移液器轻柔吸打68次混匀反应体系。6. 20孵育15 min。7. 使用AMPureXP磁珠纯化末端修复产物。8. 纯化开始前将AMPureXP磁珠平衡至室温。9. 使用前将AMPureXP磁珠涡旋使其充分悬浮。10. 若反应管与磁力架不
39、兼容，可将末端补平反应液转移至与磁力架兼容的离心管中。注：此离心管须能够容纳200 l液体。11. 每50 l末端修复反应液中加入50 lAMPureXP磁珠，吸打混匀至少5 次。12. 室温放置5 min。13. 将含磁珠的反应液置磁力架上3 min，待溶液变清澈。14. 用移液器吸除上清，约95 l。注：在吸入上清的过程中不要扰动磁珠，除去上清后管底剩余少量液体不影响后续试验。15. 保持反应管置于磁力架上，向反应管管底轻柔加入200 l 80%乙醇(注意不要扰动磁珠)，室温孵育30 sec。16. 小心去除80%乙醇（200 l），不要扰动磁珠。17. 用80%乙醇重复洗涤一次（步骤15
40、-16）。18. 将反应管瞬时离心后置于磁力架上，使用 20 l量程的移液器小心去除管底残留的乙醇。操作步骤一、DNA片段化本试剂盒不包含DNA片段化相关试剂。对于DNA的片段化过程，客户可在超声处理、化学处理和酶处理等常用方法中选择，具体操作请参考相关产品说明。二、末端修复1. 沿锡箔纸封口袋顶部切口位置撕开试剂包装袋。2. 取出一支管盖呈蓝色的1.5 ml离心管用于末端修复反应。每支1.5ml离心管中所含的冻干粉试剂可供一次文库构建反应使用。3. 如有需要，可瞬时离心以确保冻干粉聚集于离心管底。4. 按下表建立末端修复反应体系：组分 用量双链DNA（ds DNA）片段（10 ng-1000
41、 ng） X lddH2O 100-X l总体系 100 l5. 用移液器轻柔吸打68次混匀反应体系。6. 20孵育30 min。7. 使用AMPureXP磁珠纯化末端修复产物。8. 纯化开始前将AMPureXP磁珠平衡至室温。9. 使用前将AMPureXP磁珠涡旋使其充分悬浮。10. 若反应管与磁力架不兼容，可将末端补平反应液转移至与磁力架兼容的离心管中。注：此离心管须能够容纳260 l液体。11. 每100 l末端修复反应液中加入160 l AMPureXP磁珠，吸打混匀至少5 次。12. 室温放置5 min。13. 将含磁珠的反应液置磁力架上3 min，待溶液变清澈。6 3产品简介 TI
42、ANSeq DNA Library Prep Kit (illumina)是专门针对于illumina高通量测序平台所优化的DNA文库构建试剂盒。由末端修复（End-Repair Mix）、A尾添加（A-Tailing Mix）和接头连接（Ligation Mix）三个模块构成。与同类试剂不同的是：本产品所含有的模块均为一管式包装，且经特殊工艺加工呈冻干粉状，极大增强了试剂稳定性，可在室温条件下运输，保存和实验操作，省去了体系配制，低温保藏等繁琐操作，使得操作更加简便，文库转化效率更高。适用范围：适用于illumina高通量测序平台DNA文库构建。适用样本量：10 ng1 g DNA。推荐使用
43、的其他试剂1. TIANSeq Single-Indexed Adapter (IlluminaPlatforms) （NG214-01/02/03）。2. TIANSeq NGS Library Amplication Module （NG304-01/02）。3. BECKMAN Agencourt AMPure XP磁珠。产品特点1. 冻干粉形式，单管酶促反应，一管完成一步反应。2. 高文库转化效率， DNA样本起始量可低至10 ng。3. 操作简便，省去体系配制，低温保藏等步骤。注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项1. 操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。2.
44、请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。3. 试验开始前，请清洁操作台，并使用RNA酶及DNA酶清除试剂，如RNase Away（Molecular BioProducts, Inc）处理台面。确保没有RNA酶和DNA的污染。4. 进行文库扩增前，请确保PCR仪已经调试好并处于稳定的状态。5. 试验前请仔细阅读说明书，如果需要暂停试验，或者无需立即进行下游试验。可根据说明书推荐将试验产物保存于-20并安排后续试验。19. 将反应管开盖置于磁力架上，室温干燥5 min。磁珠干燥期间请计算片段筛选过程中所需的DNA量（Z）。注：由于不同的片段选择方法所需的上样量不同，用户可以根据后续片
45、段筛选方法确定接头连接产物的洗脱体积（Z+2.5 l）。其中，推荐Z的取值范围为：20Z100。如果不进行片段筛选，则推荐再次使用AMPureXP磁珠进行纯化以降低接头污染（50 l 接头连接产物加入50 l磁珠，Z=50 l）。如果不明确如何选择Z值，请参阅说明书第五部分。20. 将反应管从磁力架上取下，加入(Z+2.5) l洗脱缓冲液（10 mM Tris-HCl, pH8.0; 10 mM Tris, 0.1 mM EDTA, pH 8.0或者去离子水）。用移液器吸打使磁珠悬浮。21. 将反应管置于磁力架上3 min，待溶液澄清。小心吸取上清至新离心管。22. 小心吸取上清Z l至新离心
46、管，直接进入说明书第五部分或将产物保存于-20（接头连接后的DNA产物可在-20保存7天）。五、片段筛选若使用Illumina平台进行测序或进行基因组测序，文库DNA片段平均大小应为400 bp（包含接头）。片段筛选步骤即旨在特异性地回收得到这部分片段，而去除过大或过小的双链及单链DNA片段。以下是常用的片段筛选方法，以及使用这些方法时所需要的连接产物体积（Z）。1. 琼脂糖凝胶回收（Z=20 l）；2. Sage Science Pippin PrepTM（Z=30 l）；3. Life TechnologiesTM E-GelSizeSelectTM Gels（Z=20 l）；4. 基于磁
47、珠的片段筛选方法（Z=100 l）。注：片段筛选步骤一般在接头连接后进行，以控制文库中DNA片段大小。但用户也可以根据自身需要在末端修复完成后即进行片段筛选。六、文库扩增本试剂盒不含PCR试剂及引物。用户需要自行选择PCR试剂，并根据文库DNA上样量确定扩增循环数。PCR结束后，可使用AMPureXP磁珠（Cat# A63881）对产物进行纯化，并使用凝胶电泳、Qubit、qPCR以及Angilent生物分析仪对纯化后的DNA文库进行分析。推荐试剂为TIANGEN的TIANSeq NGS Library Amplication Module （NG304）。2 7Order: 010-5982
48、2688Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。版本号: EP170330产品内容产品组成NG103-01 NG103-02 (24 rxn) (96 rxn) End-Repair Mix 24支 196孔板A-Tailing Mix 24支 196孔板Ligation Mix 24支 196孔板储存条件试剂盒中End-Repair Mix，A-Tailing Mix和Ligation Mix可于室温下（1525）保存，保质期为一年。试剂盒中未使用完的组份（末端修复、A尾添加和接头连接等试剂冻干粉）经自封铝箔袋封装后可在室温条件下保存。铝箔袋开封后请勿丢弃其中的干燥剂，并在2个月内将所有组份用完。TIANSeq DNA Library Prep Kit (illumina)TIANSeq DNA文库构建试剂盒（illumina平台）目录号：NG103浓缩国际权威精华，铸就TIANGEN优秀品质！TIANGEN为您提供国际化标准的生物学产品和服务 PCR、RT-PCR系列 核酸DNA、RNA分离纯化系列 DNA分子量标准 克隆载体、感受态细胞 细胞生物学产品 蛋白分子量标准 蛋白质染色、检测及定量相关产品8
