1、动物学专业毕业论文 精品论文 异时性基因在 Caenorhabditis elegans寿命调控中的作用及在小鼠发育中的表达研究关键词：Caenorhabditis elegans 异时性基因 寿命调控 生长发育摘要：异时性基因控制着整个发育过程的时间性和空间性，确定细胞的命运，从而保证各种器官的准确定位和适时发育。异时性基因发生突变，会造成整个发育过程提前或推后。在 C.elegans中研究最多的异时性基因有：lin-14、lin-28、lin-41、hbl-1、lin-29、MicroRNA lin-4 和 let-7等。异时性基因在调控细胞的增殖、发育及凋亡中有重要作用，在寿命调控、肿瘤
2、发生以及其他生理病变中也起着关键的作用。本文主要通过 RNAi、寿命分析、Western Blot、免疫共沉淀、质谱分析和 RT-PCR等方法来研究异时性基因在寿命调控中的作用，并对脊椎动物中与肿瘤发生相关的异时性同源基因 lin-28和 lin-41进行了初步研究。 我们首先对各种异时性基因突变体的寿命和温度耐受性进行分析，首次发现了 lin-28突变体的寿命是延长的，而 let-7和lin-41突变体的寿命则是缩短的，lin-29 突变体的寿命与 N2相比没有明显的差异。用 lin-28 RNAi长寿型虫株 daf-2(-)和寿命缩短型虫株 daf-16(-)观察寿命的变化。结果发现：da
3、f-2、lin-28 双突变时平均寿命与 daf-2单突变相比延长。而 daf-16、lin-28 双突变时与 daf-16单突变相比平均寿命没有显著性差异。RNA 干扰 lin-28后观察 DAF-16:GFP荧光分布的变化，发现 DAF-16:GFP的核定位并没有发生明显改变。 我们用 western blot检测 LIN-28在长寿虫株体内和寿命缩短虫株体内的表达，结果发现：除了 lin-14突变体和lin-4、lin-14 双突变之外，在包括 daf-2(-)的长寿型的突变体中，LIN-28 的表达含量都很低。而在包括 daf-16(-)的寿命缩短型虫株体内，LIN-28 的表达含量都
4、非常高。免疫共沉淀和 RNAi结果显示：LIN-28 和寿命相关基因 DAF-16是相互抑制的。lin-28 过表达可以抑制 daf-16的表达，而 daf-16突变后，lin-28的表达丰度又很高。 通过免疫共沉淀和 MALDI-TOF-MS质谱技术，我们初步确定了和 LIN-28相互作用的几种蛋白。这些蛋白包括：T22H9.3 翻译起始因子 2C(eIF-2C)；在线虫生殖系发育中起主要作用的 P颗粒蛋白 PGL-2、R13A1.10 和 Aff_ZK484.8。 在本次实验中，我们还研究了通过胰岛素/IGF-1途径影响寿命的异时性基因 lin-14在生化水平上和 daf-16的相互关系。
5、实验研究表明，在 daf-2突变的背景下，lin-14 突变后，DAF-16 的表达有所增加；免疫共沉淀后 western blot检测实验显示 lin-14和 daf-16有直接的微弱相互作用；通过质谱分析方法我们初步确定了和 LIN-14相互作用的四种蛋白：Y55F3C.9、R12E2.1、C50C3.7 和线粒体 ATP酶抑制子家族-2(mai-2)。 在脊椎动物中，我们从小鼠的第九天胚胎中成功得到了 C.elegans lin-28和 lin-41同源基因的部分 cDNA片段，在小鼠胚胎和组织中分别通过 western blot和RT-PCR检测 lin-28和 lin-41的表达。W
6、estern blot 结果显示：LIN-28 在第9天、第 10.5天和第 12天的胚胎中有表达，但在第 9天的胚胎中表达含量较低；在成体组织的心脏和小肠中表达含量最高，其次是肾脏，在其他组织如肝脏、肌肉和脑中也有表达，但含量很低；LIN-41 在小鼠胚胎第 9天、第 10.5和第 12天有特异性的表达，而在第 13天的胚胎中几乎没有表达，另外 LIN-41在成体心脏、肌肉和小肠组织中有特异性表达。RT-PCR 结果显示：lin-41mRNA在胚胎的第 9天、第 10.5天和第 12天有特异性的表达；lin-28 在第 9天和第10.5天有特异性的表达。Co-IP 和质谱的分析结果显示：与
7、LIN-41相互作用的蛋白主要包括亮氨酸拉链转录调控因子、表皮生长因子受体、血凝素-4(Galectin-4)、线粒体和 Ras相关蛋白 Rab-13。正文内容异时性基因控制着整个发育过程的时间性和空间性，确定细胞的命运，从而保证各种器官的准确定位和适时发育。异时性基因发生突变，会造成整个发育过程提前或推后。在 C.elegans中研究最多的异时性基因有：lin-14、lin-28、lin-41、hbl-1、lin-29、MicroRNA lin-4 和 let-7等。异时性基因在调控细胞的增殖、发育及凋亡中有重要作用，在寿命调控、肿瘤发生以及其他生理病变中也起着关键的作用。本文主要通过 RN
8、Ai、寿命分析、Western Blot、免疫共沉淀、质谱分析和 RT-PCR等方法来研究异时性基因在寿命调控中的作用，并对脊椎动物中与肿瘤发生相关的异时性同源基因 lin-28和 lin-41进行了初步研究。 我们首先对各种异时性基因突变体的寿命和温度耐受性进行分析，首次发现了 lin-28突变体的寿命是延长的，而 let-7和 lin-41突变体的寿命则是缩短的，lin-29 突变体的寿命与 N2相比没有明显的差异。用 lin-28 RNAi长寿型虫株 daf-2(-)和寿命缩短型虫株 daf-16(-)观察寿命的变化。结果发现：daf-2、lin-28 双突变时平均寿命与 daf-2单突
9、变相比延长。而 daf-16、lin-28双突变时与 daf-16单突变相比平均寿命没有显著性差异。RNA 干扰 lin-28后观察 DAF-16:GFP荧光分布的变化，发现 DAF-16:GFP的核定位并没有发生明显改变。 我们用 western blot检测 LIN-28在长寿虫株体内和寿命缩短虫株体内的表达，结果发现：除了 lin-14突变体和 lin-4、lin-14 双突变之外，在包括 daf-2(-)的长寿型的突变体中，LIN-28 的表达含量都很低。而在包括daf-16(-)的寿命缩短型虫株体内，LIN-28 的表达含量都非常高。免疫共沉淀和 RNAi结果显示：LIN-28 和寿
10、命相关基因 DAF-16是相互抑制的。lin-28 过表达可以抑制 daf-16的表达，而 daf-16突变后，lin-28 的表达丰度又很高。 通过免疫共沉淀和 MALDI-TOF-MS质谱技术，我们初步确定了和 LIN-28相互作用的几种蛋白。这些蛋白包括：T22H9.3 翻译起始因子 2C(eIF-2C)；在线虫生殖系发育中起主要作用的 P颗粒蛋白 PGL-2、R13A1.10 和 Aff_ZK484.8。 在本次实验中，我们还研究了通过胰岛素/IGF-1 途径影响寿命的异时性基因 lin-14在生化水平上和 daf-16的相互关系。实验研究表明，在 daf-2突变的背景下，lin-14
11、 突变后，DAF-16 的表达有所增加；免疫共沉淀后 western blot检测实验显示 lin-14和 daf-16有直接的微弱相互作用；通过质谱分析方法我们初步确定了和 LIN-14相互作用的四种蛋白：Y55F3C.9、R12E2.1、C50C3.7 和线粒体 ATP酶抑制子家族-2(mai-2)。 在脊椎动物中，我们从小鼠的第九天胚胎中成功得到了 C.elegans lin-28和 lin-41同源基因的部分 cDNA片段，在小鼠胚胎和组织中分别通过 western blot和 RT-PCR检测 lin-28和 lin-41的表达。Western blot 结果显示：LIN-28 在第
12、 9天、第 10.5天和第 12天的胚胎中有表达，但在第 9天的胚胎中表达含量较低；在成体组织的心脏和小肠中表达含量最高，其次是肾脏，在其他组织如肝脏、肌肉和脑中也有表达，但含量很低；LIN-41 在小鼠胚胎第 9天、第 10.5和第 12天有特异性的表达，而在第13天的胚胎中几乎没有表达，另外 LIN-41在成体心脏、肌肉和小肠组织中有特异性表达。RT-PCR 结果显示：lin-41mRNA 在胚胎的第 9天、第 10.5天和第12天有特异性的表达；lin-28 在第 9天和第 10.5天有特异性的表达。Co-IP和质谱的分析结果显示：与 LIN-41相互作用的蛋白主要包括亮氨酸拉链转录调控
13、因子、表皮生长因子受体、血凝素-4(Galectin-4)、线粒体和 Ras相关蛋白Rab-13。异时性基因控制着整个发育过程的时间性和空间性，确定细胞的命运，从而保证各种器官的准确定位和适时发育。异时性基因发生突变，会造成整个发育过程提前或推后。在 C.elegans中研究最多的异时性基因有：lin-14、lin-28、lin-41、hbl-1、lin-29、MicroRNA lin-4 和 let-7等。异时性基因在调控细胞的增殖、发育及凋亡中有重要作用，在寿命调控、肿瘤发生以及其他生理病变中也起着关键的作用。本文主要通过 RNAi、寿命分析、Western Blot、免疫共沉淀、质谱分析
14、和 RT-PCR等方法来研究异时性基因在寿命调控中的作用，并对脊椎动物中与肿瘤发生相关的异时性同源基因 lin-28和 lin-41进行了初步研究。 我们首先对各种异时性基因突变体的寿命和温度耐受性进行分析，首次发现了 lin-28突变体的寿命是延长的，而 let-7和 lin-41突变体的寿命则是缩短的，lin-29 突变体的寿命与 N2相比没有明显的差异。用 lin-28 RNAi长寿型虫株 daf-2(-)和寿命缩短型虫株 daf-16(-)观察寿命的变化。结果发现：daf-2、lin-28 双突变时平均寿命与 daf-2单突变相比延长。而 daf-16、lin-28双突变时与 daf-
15、16单突变相比平均寿命没有显著性差异。RNA 干扰 lin-28后观察 DAF-16:GFP荧光分布的变化，发现 DAF-16:GFP的核定位并没有发生明显改变。 我们用 western blot检测 LIN-28在长寿虫株体内和寿命缩短虫株体内的表达，结果发现：除了 lin-14突变体和 lin-4、lin-14 双突变之外，在包括 daf-2(-)的长寿型的突变体中，LIN-28 的表达含量都很低。而在包括daf-16(-)的寿命缩短型虫株体内，LIN-28 的表达含量都非常高。免疫共沉淀和 RNAi结果显示：LIN-28 和寿命相关基因 DAF-16是相互抑制的。lin-28 过表达可以
16、抑制 daf-16的表达，而 daf-16突变后，lin-28 的表达丰度又很高。 通过免疫共沉淀和 MALDI-TOF-MS质谱技术，我们初步确定了和 LIN-28相互作用的几种蛋白。这些蛋白包括：T22H9.3 翻译起始因子 2C(eIF-2C)；在线虫生殖系发育中起主要作用的 P颗粒蛋白 PGL-2、R13A1.10 和 Aff_ZK484.8。 在本次实验中，我们还研究了通过胰岛素/IGF-1 途径影响寿命的异时性基因 lin-14在生化水平上和 daf-16的相互关系。实验研究表明，在 daf-2突变的背景下，lin-14 突变后，DAF-16 的表达有所增加；免疫共沉淀后 west
17、ern blot检测实验显示 lin-14和 daf-16有直接的微弱相互作用；通过质谱分析方法我们初步确定了和 LIN-14相互作用的四种蛋白：Y55F3C.9、R12E2.1、C50C3.7 和线粒体 ATP酶抑制子家族-2(mai-2)。 在脊椎动物中，我们从小鼠的第九天胚胎中成功得到了 C.elegans lin-28和 lin-41同源基因的部分 cDNA片段，在小鼠胚胎和组织中分别通过 western blot和 RT-PCR检测 lin-28和 lin-41的表达。Western blot 结果显示：LIN-28 在第 9天、第 10.5天和第 12天的胚胎中有表达，但在第 9天
18、的胚胎中表达含量较低；在成体组织的心脏和小肠中表达含量最高，其次是肾脏，在其他组织如肝脏、肌肉和脑中也有表达，但含量很低；LIN-41 在小鼠胚胎第 9天、第 10.5和第 12天有特异性的表达，而在第13天的胚胎中几乎没有表达，另外 LIN-41在成体心脏、肌肉和小肠组织中有特异性表达。RT-PCR 结果显示：lin-41mRNA 在胚胎的第 9天、第 10.5天和第12天有特异性的表达；lin-28 在第 9天和第 10.5天有特异性的表达。Co-IP和质谱的分析结果显示：与 LIN-41相互作用的蛋白主要包括亮氨酸拉链转录调控因子、表皮生长因子受体、血凝素-4(Galectin-4)、线
19、粒体和 Ras相关蛋白Rab-13。异时性基因控制着整个发育过程的时间性和空间性，确定细胞的命运，从而保证各种器官的准确定位和适时发育。异时性基因发生突变，会造成整个发育过程提前或推后。在 C.elegans中研究最多的异时性基因有：lin-14、lin-28、lin-41、hbl-1、lin-29、MicroRNA lin-4 和 let-7等。异时性基因在调控细胞的增殖、发育及凋亡中有重要作用，在寿命调控、肿瘤发生以及其他生理病变中也起着关键的作用。本文主要通过 RNAi、寿命分析、Western Blot、免疫共沉淀、质谱分析和 RT-PCR等方法来研究异时性基因在寿命调控中的作用，并对
20、脊椎动物中与肿瘤发生相关的异时性同源基因 lin-28和 lin-41进行了初步研究。 我们首先对各种异时性基因突变体的寿命和温度耐受性进行分析，首次发现了 lin-28突变体的寿命是延长的，而 let-7和 lin-41突变体的寿命则是缩短的，lin-29 突变体的寿命与 N2相比没有明显的差异。用 lin-28 RNAi长寿型虫株 daf-2(-)和寿命缩短型虫株 daf-16(-)观察寿命的变化。结果发现：daf-2、lin-28 双突变时平均寿命与 daf-2单突变相比延长。而 daf-16、lin-28双突变时与 daf-16单突变相比平均寿命没有显著性差异。RNA 干扰 lin-2
21、8后观察 DAF-16:GFP荧光分布的变化，发现 DAF-16:GFP的核定位并没有发生明显改变。 我们用 western blot检测 LIN-28在长寿虫株体内和寿命缩短虫株体内的表达，结果发现：除了 lin-14突变体和 lin-4、lin-14 双突变之外，在包括 daf-2(-)的长寿型的突变体中，LIN-28 的表达含量都很低。而在包括daf-16(-)的寿命缩短型虫株体内，LIN-28 的表达含量都非常高。免疫共沉淀和 RNAi结果显示：LIN-28 和寿命相关基因 DAF-16是相互抑制的。lin-28 过表达可以抑制 daf-16的表达，而 daf-16突变后，lin-28
22、 的表达丰度又很高。 通过免疫共沉淀和 MALDI-TOF-MS质谱技术，我们初步确定了和 LIN-28相互作用的几种蛋白。这些蛋白包括：T22H9.3 翻译起始因子 2C(eIF-2C)；在线虫生殖系发育中起主要作用的 P颗粒蛋白 PGL-2、R13A1.10 和 Aff_ZK484.8。 在本次实验中，我们还研究了通过胰岛素/IGF-1 途径影响寿命的异时性基因 lin-14在生化水平上和 daf-16的相互关系。实验研究表明，在 daf-2突变的背景下，lin-14 突变后，DAF-16 的表达有所增加；免疫共沉淀后 western blot检测实验显示 lin-14和 daf-16有直
23、接的微弱相互作用；通过质谱分析方法我们初步确定了和 LIN-14相互作用的四种蛋白：Y55F3C.9、R12E2.1、C50C3.7 和线粒体 ATP酶抑制子家族-2(mai-2)。 在脊椎动物中，我们从小鼠的第九天胚胎中成功得到了 C.elegans lin-28和 lin-41同源基因的部分 cDNA片段，在小鼠胚胎和组织中分别通过 western blot和 RT-PCR检测 lin-28和 lin-41的表达。Western blot 结果显示：LIN-28 在第 9天、第 10.5天和第 12天的胚胎中有表达，但在第 9天的胚胎中表达含量较低；在成体组织的心脏和小肠中表达含量最高，其
24、次是肾脏，在其他组织如肝脏、肌肉和脑中也有表达，但含量很低；LIN-41 在小鼠胚胎第 9天、第 10.5和第 12天有特异性的表达，而在第13天的胚胎中几乎没有表达，另外 LIN-41在成体心脏、肌肉和小肠组织中有特异性表达。RT-PCR 结果显示：lin-41mRNA 在胚胎的第 9天、第 10.5天和第12天有特异性的表达；lin-28 在第 9天和第 10.5天有特异性的表达。Co-IP和质谱的分析结果显示：与 LIN-41相互作用的蛋白主要包括亮氨酸拉链转录调控因子、表皮生长因子受体、血凝素-4(Galectin-4)、线粒体和 Ras相关蛋白Rab-13。异时性基因控制着整个发育过
25、程的时间性和空间性，确定细胞的命运，从而保证各种器官的准确定位和适时发育。异时性基因发生突变，会造成整个发育过程提前或推后。在 C.elegans中研究最多的异时性基因有：lin-14、lin-28、lin-41、hbl-1、lin-29、MicroRNA lin-4 和 let-7等。异时性基因在调控细胞的增殖、发育及凋亡中有重要作用，在寿命调控、肿瘤发生以及其他生理病变中也起着关键的作用。本文主要通过 RNAi、寿命分析、Western Blot、免疫共沉淀、质谱分析和 RT-PCR等方法来研究异时性基因在寿命调控中的作用，并对脊椎动物中与肿瘤发生相关的异时性同源基因 lin-28和 li
26、n-41进行了初步研究。 我们首先对各种异时性基因突变体的寿命和温度耐受性进行分析，首次发现了 lin-28突变体的寿命是延长的，而 let-7和 lin-41突变体的寿命则是缩短的，lin-29 突变体的寿命与 N2相比没有明显的差异。用 lin-28 RNAi长寿型虫株 daf-2(-)和寿命缩短型虫株 daf-16(-)观察寿命的变化。结果发现：daf-2、lin-28 双突变时平均寿命与 daf-2单突变相比延长。而 daf-16、lin-28双突变时与 daf-16单突变相比平均寿命没有显著性差异。RNA 干扰 lin-28后观察 DAF-16:GFP荧光分布的变化，发现 DAF-1
27、6:GFP的核定位并没有发生明显改变。 我们用 western blot检测 LIN-28在长寿虫株体内和寿命缩短虫株体内的表达，结果发现：除了 lin-14突变体和 lin-4、lin-14 双突变之外，在包括 daf-2(-)的长寿型的突变体中，LIN-28 的表达含量都很低。而在包括daf-16(-)的寿命缩短型虫株体内，LIN-28 的表达含量都非常高。免疫共沉淀和 RNAi结果显示：LIN-28 和寿命相关基因 DAF-16是相互抑制的。lin-28 过表达可以抑制 daf-16的表达，而 daf-16突变后，lin-28 的表达丰度又很高。 通过免疫共沉淀和 MALDI-TOF-M
28、S质谱技术，我们初步确定了和 LIN-28相互作用的几种蛋白。这些蛋白包括：T22H9.3 翻译起始因子 2C(eIF-2C)；在线虫生殖系发育中起主要作用的 P颗粒蛋白 PGL-2、R13A1.10 和 Aff_ZK484.8。 在本次实验中，我们还研究了通过胰岛素/IGF-1 途径影响寿命的异时性基因 lin-14在生化水平上和 daf-16的相互关系。实验研究表明，在 daf-2突变的背景下，lin-14 突变后，DAF-16 的表达有所增加；免疫共沉淀后 western blot检测实验显示 lin-14和 daf-16有直接的微弱相互作用；通过质谱分析方法我们初步确定了和 LIN-1
29、4相互作用的四种蛋白：Y55F3C.9、R12E2.1、C50C3.7 和线粒体 ATP酶抑制子家族-2(mai-2)。 在脊椎动物中，我们从小鼠的第九天胚胎中成功得到了 C.elegans lin-28和 lin-41同源基因的部分 cDNA片段，在小鼠胚胎和组织中分别通过 western blot和 RT-PCR检测 lin-28和 lin-41的表达。Western blot 结果显示：LIN-28 在第 9天、第 10.5天和第 12天的胚胎中有表达，但在第 9天的胚胎中表达含量较低；在成体组织的心脏和小肠中表达含量最高，其次是肾脏，在其他组织如肝脏、肌肉和脑中也有表达，但含量很低；L
30、IN-41 在小鼠胚胎第 9天、第 10.5和第 12天有特异性的表达，而在第13天的胚胎中几乎没有表达，另外 LIN-41在成体心脏、肌肉和小肠组织中有特异性表达。RT-PCR 结果显示：lin-41mRNA 在胚胎的第 9天、第 10.5天和第12天有特异性的表达；lin-28 在第 9天和第 10.5天有特异性的表达。Co-IP和质谱的分析结果显示：与 LIN-41相互作用的蛋白主要包括亮氨酸拉链转录调控因子、表皮生长因子受体、血凝素-4(Galectin-4)、线粒体和 Ras相关蛋白Rab-13。异时性基因控制着整个发育过程的时间性和空间性，确定细胞的命运，从而保证各种器官的准确定位
31、和适时发育。异时性基因发生突变，会造成整个发育过程提前或推后。在 C.elegans中研究最多的异时性基因有：lin-14、lin-28、lin-41、hbl-1、lin-29、MicroRNA lin-4 和 let-7等。异时性基因在调控细胞的增殖、发育及凋亡中有重要作用，在寿命调控、肿瘤发生以及其他生理病变中也起着关键的作用。本文主要通过 RNAi、寿命分析、Western Blot、免疫共沉淀、质谱分析和 RT-PCR等方法来研究异时性基因在寿命调控中的作用，并对脊椎动物中与肿瘤发生相关的异时性同源基因 lin-28和 lin-41进行了初步研究。 我们首先对各种异时性基因突变体的寿命
32、和温度耐受性进行分析，首次发现了 lin-28突变体的寿命是延长的，而 let-7和 lin-41突变体的寿命则是缩短的，lin-29 突变体的寿命与 N2相比没有明显的差异。用 lin-28 RNAi长寿型虫株 daf-2(-)和寿命缩短型虫株 daf-16(-)观察寿命的变化。结果发现：daf-2、lin-28 双突变时平均寿命与 daf-2单突变相比延长。而 daf-16、lin-28双突变时与 daf-16单突变相比平均寿命没有显著性差异。RNA 干扰 lin-28后观察 DAF-16:GFP荧光分布的变化，发现 DAF-16:GFP的核定位并没有发生明显改变。 我们用 western
33、 blot检测 LIN-28在长寿虫株体内和寿命缩短虫株体内的表达，结果发现：除了 lin-14突变体和 lin-4、lin-14 双突变之外，在包括 daf-2(-)的长寿型的突变体中，LIN-28 的表达含量都很低。而在包括daf-16(-)的寿命缩短型虫株体内，LIN-28 的表达含量都非常高。免疫共沉淀和 RNAi结果显示：LIN-28 和寿命相关基因 DAF-16是相互抑制的。lin-28 过表达可以抑制 daf-16的表达，而 daf-16突变后，lin-28 的表达丰度又很高。 通过免疫共沉淀和 MALDI-TOF-MS质谱技术，我们初步确定了和 LIN-28相互作用的几种蛋白。
34、这些蛋白包括：T22H9.3 翻译起始因子 2C(eIF-2C)；在线虫生殖系发育中起主要作用的 P颗粒蛋白 PGL-2、R13A1.10 和 Aff_ZK484.8。 在本次实验中，我们还研究了通过胰岛素/IGF-1 途径影响寿命的异时性基因 lin-14在生化水平上和 daf-16的相互关系。实验研究表明，在 daf-2突变的背景下，lin-14 突变后，DAF-16 的表达有所增加；免疫共沉淀后 western blot检测实验显示 lin-14和 daf-16有直接的微弱相互作用；通过质谱分析方法我们初步确定了和 LIN-14相互作用的四种蛋白：Y55F3C.9、R12E2.1、C50
35、C3.7 和线粒体 ATP酶抑制子家族-2(mai-2)。 在脊椎动物中，我们从小鼠的第九天胚胎中成功得到了 C.elegans lin-28和 lin-41同源基因的部分 cDNA片段，在小鼠胚胎和组织中分别通过 western blot和 RT-PCR检测 lin-28和 lin-41的表达。Western blot 结果显示：LIN-28 在第 9天、第 10.5天和第 12天的胚胎中有表达，但在第 9天的胚胎中表达含量较低；在成体组织的心脏和小肠中表达含量最高，其次是肾脏，在其他组织如肝脏、肌肉和脑中也有表达，但含量很低；LIN-41 在小鼠胚胎第 9天、第 10.5和第 12天有特异
36、性的表达，而在第13天的胚胎中几乎没有表达，另外 LIN-41在成体心脏、肌肉和小肠组织中有特异性表达。RT-PCR 结果显示：lin-41mRNA 在胚胎的第 9天、第 10.5天和第12天有特异性的表达；lin-28 在第 9天和第 10.5天有特异性的表达。Co-IP和质谱的分析结果显示：与 LIN-41相互作用的蛋白主要包括亮氨酸拉链转录调控因子、表皮生长因子受体、血凝素-4(Galectin-4)、线粒体和 Ras相关蛋白Rab-13。异时性基因控制着整个发育过程的时间性和空间性，确定细胞的命运，从而保证各种器官的准确定位和适时发育。异时性基因发生突变，会造成整个发育过程提前或推后。
37、在 C.elegans中研究最多的异时性基因有：lin-14、lin-28、lin-41、hbl-1、lin-29、MicroRNA lin-4 和 let-7等。异时性基因在调控细胞的增殖、发育及凋亡中有重要作用，在寿命调控、肿瘤发生以及其他生理病变中也起着关键的作用。本文主要通过 RNAi、寿命分析、Western Blot、免疫共沉淀、质谱分析和 RT-PCR等方法来研究异时性基因在寿命调控中的作用，并对脊椎动物中与肿瘤发生相关的异时性同源基因 lin-28和 lin-41进行了初步研究。 我们首先对各种异时性基因突变体的寿命和温度耐受性进行分析，首次发现了 lin-28突变体的寿命是延
38、长的，而 let-7和 lin-41突变体的寿命则是缩短的，lin-29 突变体的寿命与 N2相比没有明显的差异。用 lin-28 RNAi长寿型虫株 daf-2(-)和寿命缩短型虫株 daf-16(-)观察寿命的变化。结果发现：daf-2、lin-28 双突变时平均寿命与 daf-2单突变相比延长。而 daf-16、lin-28双突变时与 daf-16单突变相比平均寿命没有显著性差异。RNA 干扰 lin-28后观察 DAF-16:GFP荧光分布的变化，发现 DAF-16:GFP的核定位并没有发生明显改变。 我们用 western blot检测 LIN-28在长寿虫株体内和寿命缩短虫株体内的
39、表达，结果发现：除了 lin-14突变体和 lin-4、lin-14 双突变之外，在包括 daf-2(-)的长寿型的突变体中，LIN-28 的表达含量都很低。而在包括daf-16(-)的寿命缩短型虫株体内，LIN-28 的表达含量都非常高。免疫共沉淀和 RNAi结果显示：LIN-28 和寿命相关基因 DAF-16是相互抑制的。lin-28 过表达可以抑制 daf-16的表达，而 daf-16突变后，lin-28 的表达丰度又很高。 通过免疫共沉淀和 MALDI-TOF-MS质谱技术，我们初步确定了和 LIN-28相互作用的几种蛋白。这些蛋白包括：T22H9.3 翻译起始因子 2C(eIF-2C
40、)；在线虫生殖系发育中起主要作用的 P颗粒蛋白 PGL-2、R13A1.10 和 Aff_ZK484.8。 在本次实验中，我们还研究了通过胰岛素/IGF-1 途径影响寿命的异时性基因 lin-14在生化水平上和 daf-16的相互关系。实验研究表明，在 daf-2突变的背景下，lin-14 突变后，DAF-16 的表达有所增加；免疫共沉淀后 western blot检测实验显示 lin-14和 daf-16有直接的微弱相互作用；通过质谱分析方法我们初步确定了和 LIN-14相互作用的四种蛋白：Y55F3C.9、R12E2.1、C50C3.7 和线粒体 ATP酶抑制子家族-2(mai-2)。 在
41、脊椎动物中，我们从小鼠的第九天胚胎中成功得到了 C.elegans lin-28和 lin-41同源基因的部分 cDNA片段，在小鼠胚胎和组织中分别通过 western blot和 RT-PCR检测 lin-28和 lin-41的表达。Western blot 结果显示：LIN-28 在第 9天、第 10.5天和第 12天的胚胎中有表达，但在第 9天的胚胎中表达含量较低；在成体组织的心脏和小肠中表达含量最高，其次是肾脏，在其他组织如肝脏、肌肉和脑中也有表达，但含量很低；LIN-41 在小鼠胚胎第 9天、第 10.5和第 12天有特异性的表达，而在第13天的胚胎中几乎没有表达，另外 LIN-41
42、在成体心脏、肌肉和小肠组织中有特异性表达。RT-PCR 结果显示：lin-41mRNA 在胚胎的第 9天、第 10.5天和第12天有特异性的表达；lin-28 在第 9天和第 10.5天有特异性的表达。Co-IP和质谱的分析结果显示：与 LIN-41相互作用的蛋白主要包括亮氨酸拉链转录调控因子、表皮生长因子受体、血凝素-4(Galectin-4)、线粒体和 Ras相关蛋白Rab-13。异时性基因控制着整个发育过程的时间性和空间性，确定细胞的命运，从而保证各种器官的准确定位和适时发育。异时性基因发生突变，会造成整个发育过程提前或推后。在 C.elegans中研究最多的异时性基因有：lin-14、
43、lin-28、lin-41、hbl-1、lin-29、MicroRNA lin-4 和 let-7等。异时性基因在调控细胞的增殖、发育及凋亡中有重要作用，在寿命调控、肿瘤发生以及其他生理病变中也起着关键的作用。本文主要通过 RNAi、寿命分析、Western Blot、免疫共沉淀、质谱分析和 RT-PCR等方法来研究异时性基因在寿命调控中的作用，并对脊椎动物中与肿瘤发生相关的异时性同源基因 lin-28和 lin-41进行了初步研究。 我们首先对各种异时性基因突变体的寿命和温度耐受性进行分析，首次发现了 lin-28突变体的寿命是延长的，而 let-7和 lin-41突变体的寿命则是缩短的，l
44、in-29 突变体的寿命与 N2相比没有明显的差异。用 lin-28 RNAi长寿型虫株 daf-2(-)和寿命缩短型虫株 daf-16(-)观察寿命的变化。结果发现：daf-2、lin-28 双突变时平均寿命与 daf-2单突变相比延长。而 daf-16、lin-28双突变时与 daf-16单突变相比平均寿命没有显著性差异。RNA 干扰 lin-28后观察 DAF-16:GFP荧光分布的变化，发现 DAF-16:GFP的核定位并没有发生明显改变。 我们用 western blot检测 LIN-28在长寿虫株体内和寿命缩短虫株体内的表达，结果发现：除了 lin-14突变体和 lin-4、lin
45、-14 双突变之外，在包括 daf-2(-)的长寿型的突变体中，LIN-28 的表达含量都很低。而在包括daf-16(-)的寿命缩短型虫株体内，LIN-28 的表达含量都非常高。免疫共沉淀和 RNAi结果显示：LIN-28 和寿命相关基因 DAF-16是相互抑制的。lin-28 过表达可以抑制 daf-16的表达，而 daf-16突变后，lin-28 的表达丰度又很高。 通过免疫共沉淀和 MALDI-TOF-MS质谱技术，我们初步确定了和 LIN-28相互作用的几种蛋白。这些蛋白包括：T22H9.3 翻译起始因子 2C(eIF-2C)；在线虫生殖系发育中起主要作用的 P颗粒蛋白 PGL-2、R
46、13A1.10 和 Aff_ZK484.8。 在本次实验中，我们还研究了通过胰岛素/IGF-1 途径影响寿命的异时性基因 lin-14在生化水平上和 daf-16的相互关系。实验研究表明，在 daf-2突变的背景下，lin-14 突变后，DAF-16 的表达有所增加；免疫共沉淀后 western blot检测实验显示 lin-14和 daf-16有直接的微弱相互作用；通过质谱分析方法我们初步确定了和 LIN-14相互作用的四种蛋白：Y55F3C.9、R12E2.1、C50C3.7 和线粒体 ATP酶抑制子家族-2(mai-2)。 在脊椎动物中，我们从小鼠的第九天胚胎中成功得到了 C.elega
47、ns lin-28和 lin-41同源基因的部分 cDNA片段，在小鼠胚胎和组织中分别通过 western blot和 RT-PCR检测 lin-28和 lin-41的表达。Western blot 结果显示：LIN-28 在第 9天、第 10.5天和第 12天的胚胎中有表达，但在第 9天的胚胎中表达含量较低；在成体组织的心脏和小肠中表达含量最高，其次是肾脏，在其他组织如肝脏、肌肉和脑中也有表达，但含量很低；LIN-41 在小鼠胚胎第 9天、第 10.5和第 12天有特异性的表达，而在第13天的胚胎中几乎没有表达，另外 LIN-41在成体心脏、肌肉和小肠组织中有特异性表达。RT-PCR 结果显
48、示：lin-41mRNA 在胚胎的第 9天、第 10.5天和第12天有特异性的表达；lin-28 在第 9天和第 10.5天有特异性的表达。Co-IP和质谱的分析结果显示：与 LIN-41相互作用的蛋白主要包括亮氨酸拉链转录调控因子、表皮生长因子受体、血凝素-4(Galectin-4)、线粒体和 Ras相关蛋白Rab-13。异时性基因控制着整个发育过程的时间性和空间性，确定细胞的命运，从而保证各种器官的准确定位和适时发育。异时性基因发生突变，会造成整个发育过程提前或推后。在 C.elegans中研究最多的异时性基因有：lin-14、lin-28、lin-41、hbl-1、lin-29、Micr
49、oRNA lin-4 和 let-7等。异时性基因在调控细胞的增殖、发育及凋亡中有重要作用，在寿命调控、肿瘤发生以及其他生理病变中也起着关键的作用。本文主要通过 RNAi、寿命分析、Western Blot、免疫共沉淀、质谱分析和 RT-PCR等方法来研究异时性基因在寿命调控中的作用，并对脊椎动物中与肿瘤发生相关的异时性同源基因 lin-28和 lin-41进行了初步研究。 我们首先对各种异时性基因突变体的寿命和温度耐受性进行分析，首次发现了 lin-28突变体的寿命是延长的，而 let-7和 lin-41突变体的寿命则是缩短的，lin-29 突变体的寿命与 N2相比没有明显的差异。用 lin-28 RNAi长寿型虫株 daf-2(-)和寿命缩短型虫株 daf-16(-)观察寿命的变化。结果发现：daf-2、lin-28 双突变时平均寿命与 daf-2单突变相比延长。而 daf-16、lin-28双突变时与 daf-16单突变相比平均寿命没有显著性差异。RNA 干扰 lin-28后观察 DAF-16:GFP荧光分布的变化，发现 DAF-16:GFP的核定位并没有发生明显改变。 我们用 western blot检测 LIN-28在长寿虫株体内和寿命缩短虫株体内的
