1、动物遗传育种与繁殖专业优秀论文 小鼠 M期卵母细胞体外受精与孤雌激活关键词：MII 期 卵母细胞 体外受精 孤雌激活 胚胎培养 化学激活摘要：对小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。 本试验在小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。结果如下： 1.分析体外受精过程中的各种影响因素，探讨精子获能液、成熟卵子的采集时间、方法及处理方法对小鼠体
2、外受精效果的影响。试验，HTF 与 mKSOM 获能液均适用于小鼠体外受精，差异不显著(Pgt;0.05)。试验，注射 hCG 后 13-15h 采集的卵母细胞受精率高于 17h(Plt;0.05)，而 2-细胞发育率差异不显著(Pgt;0.05)。试验，用透明质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著(Pgt;0.05)。试验，自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵 2-细胞发育率较高，差异显著(Plt;0.05)。 2.分析 LIF 对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在精子获能及早期胚胎体外发育中的调控及作用机理。获能液中添加 0.1-
3、10ng/ml 浓度 LIF 后，精子活力、卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，但当浓度为 100ng/ml 时，明显低于对照组(Plt;0.01)。培养液中添加 0.1-25ng/ml 浓度的 LIF 能提高 8-细胞期的比例，但与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，添加 50ng/ml、100ng/ml 组囊胚发育率与对照组差异显著(Plt;0.05)。而 0.1ng/ml LIF 处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚率显著高于其他试验组与对照组(Plt;0.05)，其他组作用不明显。 3.采用不同化学激活方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活研究。分别采用氯化锶与细胞
4、松弛素 B(CB)，钙离子载体 A23187 和乙醇分别与 6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和 CB联合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合6-DMAP+CB 与 A23187 联合 6-DMAP+CB 的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15mmol/L srcLlt;,2gt;联合 CB 处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。 4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚卵裂率差异显著(Plt;0.05)，而桑椹胚与囊胚发
5、育率差异不显著(Pgt;0.05)；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊胚发育的总体比率差异不显著(Pgt;0.05)。正文内容对小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。 本试验在小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。结果如下： 1.分析体外受精过程中的各种影响因素，探讨精子获能液、成熟卵子的采集时间、方法及处
6、理方法对小鼠体外受精效果的影响。试验，HTF 与 mKSOM 获能液均适用于小鼠体外受精，差异不显著(Pgt;0.05)。试验，注射 hCG 后 13-15h 采集的卵母细胞受精率高于 17h(Plt;0.05)，而 2-细胞发育率差异不显著(Pgt;0.05)。试验，用透明质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著(Pgt;0.05)。试验，自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵 2-细胞发育率较高，差异显著(Plt;0.05)。 2.分析 LIF 对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在精子获能及早期胚胎体外发育中的调控及作用机理。获能液中
7、添加 0.1-10ng/ml 浓度 LIF 后，精子活力、卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，但当浓度为 100ng/ml 时，明显低于对照组(Plt;0.01)。培养液中添加 0.1-25ng/ml 浓度的 LIF 能提高 8-细胞期的比例，但与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，添加 50ng/ml、100ng/ml 组囊胚发育率与对照组差异显著(Plt;0.05)。而 0.1ng/ml LIF 处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚率显著高于其他试验组与对照组(Plt;0.05)，其他组作用不明显。 3.采用不同化学激活方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活研究。分别采
8、用氯化锶与细胞松弛素 B(CB)，钙离子载体 A23187 和乙醇分别与 6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和 CB联合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合6-DMAP+CB 与 A23187 联合 6-DMAP+CB 的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15mmol/L srcLlt;,2gt;联合 CB 处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。 4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚卵裂率差异显著(Plt;0.05)，而
9、桑椹胚与囊胚发育率差异不显著(Pgt;0.05)；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊胚发育的总体比率差异不显著(Pgt;0.05)。对小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。 本试验在小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。 结果如下： 1.分析体外受精过程中的各种影响因素，探讨精子获能液、成熟卵子的采集时间、
10、方法及处理方法对小鼠体外受精效果的影响。试验，HTF 与mKSOM 获能液均适用于小鼠体外受精，差异不显著(Pgt;0.05)。试验，注射 hCG 后 13-15h 采集的卵母细胞受精率高于 17h(Plt;0.05)，而 2-细胞发育率差异不显著(Pgt;0.05)。试验，用透明质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著(Pgt;0.05)。试验，自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵 2-细胞发育率较高，差异显著(Plt;0.05)。 2.分析 LIF 对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在精子获能及早期胚胎体外发育中的调控及作用机理。获
11、能液中添加 0.1-10ng/ml 浓度 LIF 后，精子活力、卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，但当浓度为 100ng/ml 时，明显低于对照组(Plt;0.01)。培养液中添加 0.1-25ng/ml 浓度的 LIF 能提高 8-细胞期的比例，但与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，添加50ng/ml、100ng/ml 组囊胚发育率与对照组差异显著(Plt;0.05)。而0.1ng/ml LIF 处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚率显著高于其他试验组与对照组(Plt;0.05)，其他组作用不明显。 3.采用不同化学激活方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活研究。分别
12、采用氯化锶与细胞松弛素 B(CB)，钙离子载体 A23187 和乙醇分别与 6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和 CB 联合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合 6-DMAP+CB 与 A23187 联合 6-DMAP+CB 的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15mmol/L srcLlt;,2gt;联合 CB 处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。 4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚卵裂率差异显著(Plt;0.05
13、)，而桑椹胚与囊胚发育率差异不显著(Pgt;0.05)；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊胚发育的总体比率差异不显著(Pgt;0.05)。对小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。 本试验在小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。 结果如下： 1.分析体外受精过程中的各种影响因素，探讨精子获能液、成熟卵子的采集
14、时间、方法及处理方法对小鼠体外受精效果的影响。试验，HTF 与mKSOM 获能液均适用于小鼠体外受精，差异不显著(Pgt;0.05)。试验，注射 hCG 后 13-15h 采集的卵母细胞受精率高于 17h(Plt;0.05)，而 2-细胞发育率差异不显著(Pgt;0.05)。试验，用透明质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著(Pgt;0.05)。试验，自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵 2-细胞发育率较高，差异显著(Plt;0.05)。 2.分析 LIF 对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在精子获能及早期胚胎体外发育中的调控及作用机
15、理。获能液中添加 0.1-10ng/ml 浓度 LIF 后，精子活力、卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，但当浓度为 100ng/ml 时，明显低于对照组(Plt;0.01)。培养液中添加 0.1-25ng/ml 浓度的 LIF 能提高 8-细胞期的比例，但与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，添加50ng/ml、100ng/ml 组囊胚发育率与对照组差异显著(Plt;0.05)。而0.1ng/ml LIF 处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚率显著高于其他试验组与对照组(Plt;0.05)，其他组作用不明显。 3.采用不同化学激活方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活研究
16、。分别采用氯化锶与细胞松弛素 B(CB)，钙离子载体 A23187 和乙醇分别与 6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和 CB 联合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合 6-DMAP+CB 与 A23187 联合 6-DMAP+CB 的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15mmol/L srcLlt;,2gt;联合 CB 处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。 4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚卵裂率差异显著(Plt;0
17、.05)，而桑椹胚与囊胚发育率差异不显著(Pgt;0.05)；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊胚发育的总体比率差异不显著(Pgt;0.05)。对小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。 本试验在小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。 结果如下： 1.分析体外受精过程中的各种影响因素，探讨精子获能液、成熟卵子
18、的采集时间、方法及处理方法对小鼠体外受精效果的影响。试验，HTF 与mKSOM 获能液均适用于小鼠体外受精，差异不显著(Pgt;0.05)。试验，注射 hCG 后 13-15h 采集的卵母细胞受精率高于 17h(Plt;0.05)，而 2-细胞发育率差异不显著(Pgt;0.05)。试验，用透明质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著(Pgt;0.05)。试验，自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵 2-细胞发育率较高，差异显著(Plt;0.05)。 2.分析 LIF 对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在精子获能及早期胚胎体外发育中的调控及
19、作用机理。获能液中添加 0.1-10ng/ml 浓度 LIF 后，精子活力、卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，但当浓度为 100ng/ml 时，明显低于对照组(Plt;0.01)。培养液中添加 0.1-25ng/ml 浓度的 LIF 能提高 8-细胞期的比例，但与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，添加50ng/ml、100ng/ml 组囊胚发育率与对照组差异显著(Plt;0.05)。而0.1ng/ml LIF 处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚率显著高于其他试验组与对照组(Plt;0.05)，其他组作用不明显。 3.采用不同化学激活方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激
20、活研究。分别采用氯化锶与细胞松弛素 B(CB)，钙离子载体 A23187 和乙醇分别与 6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和 CB 联合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合 6-DMAP+CB 与 A23187 联合 6-DMAP+CB 的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15mmol/L srcLlt;,2gt;联合 CB 处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。 4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚卵裂率差异显著(Pl
21、t;0.05)，而桑椹胚与囊胚发育率差异不显著(Pgt;0.05)；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊胚发育的总体比率差异不显著(Pgt;0.05)。对小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。 本试验在小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。 结果如下： 1.分析体外受精过程中的各种影响因素，探讨精子获能液、成
22、熟卵子的采集时间、方法及处理方法对小鼠体外受精效果的影响。试验，HTF 与mKSOM 获能液均适用于小鼠体外受精，差异不显著(Pgt;0.05)。试验，注射 hCG 后 13-15h 采集的卵母细胞受精率高于 17h(Plt;0.05)，而 2-细胞发育率差异不显著(Pgt;0.05)。试验，用透明质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著(Pgt;0.05)。试验，自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵 2-细胞发育率较高，差异显著(Plt;0.05)。 2.分析 LIF 对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在精子获能及早期胚胎体外发育中的
23、调控及作用机理。获能液中添加 0.1-10ng/ml 浓度 LIF 后，精子活力、卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，但当浓度为 100ng/ml 时，明显低于对照组(Plt;0.01)。培养液中添加 0.1-25ng/ml 浓度的 LIF 能提高 8-细胞期的比例，但与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，添加50ng/ml、100ng/ml 组囊胚发育率与对照组差异显著(Plt;0.05)。而0.1ng/ml LIF 处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚率显著高于其他试验组与对照组(Plt;0.05)，其他组作用不明显。 3.采用不同化学激活方法对小鼠卵母细胞进行
24、孤雌激活研究。分别采用氯化锶与细胞松弛素 B(CB)，钙离子载体 A23187 和乙醇分别与 6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和 CB 联合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合 6-DMAP+CB 与 A23187 联合 6-DMAP+CB 的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15mmol/L srcLlt;,2gt;联合 CB 处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。 4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚卵裂率差异显著
25、(Plt;0.05)，而桑椹胚与囊胚发育率差异不显著(Pgt;0.05)；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊胚发育的总体比率差异不显著(Pgt;0.05)。对小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。 本试验在小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。 结果如下： 1.分析体外受精过程中的各种影响因素，探讨精子获能
26、液、成熟卵子的采集时间、方法及处理方法对小鼠体外受精效果的影响。试验，HTF 与mKSOM 获能液均适用于小鼠体外受精，差异不显著(Pgt;0.05)。试验，注射 hCG 后 13-15h 采集的卵母细胞受精率高于 17h(Plt;0.05)，而 2-细胞发育率差异不显著(Pgt;0.05)。试验，用透明质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著(Pgt;0.05)。试验，自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵 2-细胞发育率较高，差异显著(Plt;0.05)。 2.分析 LIF 对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在精子获能及早期胚胎体外发
27、育中的调控及作用机理。获能液中添加 0.1-10ng/ml 浓度 LIF 后，精子活力、卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，但当浓度为 100ng/ml 时，明显低于对照组(Plt;0.01)。培养液中添加 0.1-25ng/ml 浓度的 LIF 能提高 8-细胞期的比例，但与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，添加50ng/ml、100ng/ml 组囊胚发育率与对照组差异显著(Plt;0.05)。而0.1ng/ml LIF 处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚率显著高于其他试验组与对照组(Plt;0.05)，其他组作用不明显。 3.采用不同化学激活方法对小鼠卵母细
28、胞进行孤雌激活研究。分别采用氯化锶与细胞松弛素 B(CB)，钙离子载体 A23187 和乙醇分别与 6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和 CB 联合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合 6-DMAP+CB 与 A23187 联合 6-DMAP+CB 的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15mmol/L srcLlt;,2gt;联合 CB 处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。 4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚卵裂率差
29、异显著(Plt;0.05)，而桑椹胚与囊胚发育率差异不显著(Pgt;0.05)；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊胚发育的总体比率差异不显著(Pgt;0.05)。对小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。 本试验在小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。 结果如下： 1.分析体外受精过程中的各种影响因素，探讨精
30、子获能液、成熟卵子的采集时间、方法及处理方法对小鼠体外受精效果的影响。试验，HTF 与mKSOM 获能液均适用于小鼠体外受精，差异不显著(Pgt;0.05)。试验，注射 hCG 后 13-15h 采集的卵母细胞受精率高于 17h(Plt;0.05)，而 2-细胞发育率差异不显著(Pgt;0.05)。试验，用透明质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著(Pgt;0.05)。试验，自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵 2-细胞发育率较高，差异显著(Plt;0.05)。 2.分析 LIF 对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在精子获能及早期胚胎
31、体外发育中的调控及作用机理。获能液中添加 0.1-10ng/ml 浓度 LIF 后，精子活力、卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，但当浓度为 100ng/ml 时，明显低于对照组(Plt;0.01)。培养液中添加 0.1-25ng/ml 浓度的 LIF 能提高 8-细胞期的比例，但与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，添加50ng/ml、100ng/ml 组囊胚发育率与对照组差异显著(Plt;0.05)。而0.1ng/ml LIF 处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚率显著高于其他试验组与对照组(Plt;0.05)，其他组作用不明显。 3.采用不同化学激活方法对小鼠
32、卵母细胞进行孤雌激活研究。分别采用氯化锶与细胞松弛素 B(CB)，钙离子载体 A23187 和乙醇分别与 6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和 CB 联合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合 6-DMAP+CB 与 A23187 联合 6-DMAP+CB 的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15mmol/L srcLlt;,2gt;联合 CB 处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。 4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚卵
33、裂率差异显著(Plt;0.05)，而桑椹胚与囊胚发育率差异不显著(Pgt;0.05)；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊胚发育的总体比率差异不显著(Pgt;0.05)。对小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。 本试验在小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。 结果如下： 1.分析体外受精过程中的各种影响因素，
34、探讨精子获能液、成熟卵子的采集时间、方法及处理方法对小鼠体外受精效果的影响。试验，HTF 与mKSOM 获能液均适用于小鼠体外受精，差异不显著(Pgt;0.05)。试验，注射 hCG 后 13-15h 采集的卵母细胞受精率高于 17h(Plt;0.05)，而 2-细胞发育率差异不显著(Pgt;0.05)。试验，用透明质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著(Pgt;0.05)。试验，自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵 2-细胞发育率较高，差异显著(Plt;0.05)。 2.分析 LIF 对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在精子获能及早
35、期胚胎体外发育中的调控及作用机理。获能液中添加 0.1-10ng/ml 浓度 LIF 后，精子活力、卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，但当浓度为 100ng/ml 时，明显低于对照组(Plt;0.01)。培养液中添加 0.1-25ng/ml 浓度的 LIF 能提高 8-细胞期的比例，但与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，添加50ng/ml、100ng/ml 组囊胚发育率与对照组差异显著(Plt;0.05)。而0.1ng/ml LIF 处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚率显著高于其他试验组与对照组(Plt;0.05)，其他组作用不明显。 3.采用不同化学激活方法
36、对小鼠卵母细胞进行孤雌激活研究。分别采用氯化锶与细胞松弛素 B(CB)，钙离子载体 A23187 和乙醇分别与 6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和 CB 联合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合 6-DMAP+CB 与 A23187 联合 6-DMAP+CB 的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15mmol/L srcLlt;,2gt;联合 CB 处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。 4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤雌激活胚与体外受
37、精胚卵裂率差异显著(Plt;0.05)，而桑椹胚与囊胚发育率差异不显著(Pgt;0.05)；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊胚发育的总体比率差异不显著(Pgt;0.05)。对小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。 本试验在小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。 结果如下： 1.分析体外受精过程中的各种影响
38、因素，探讨精子获能液、成熟卵子的采集时间、方法及处理方法对小鼠体外受精效果的影响。试验，HTF 与mKSOM 获能液均适用于小鼠体外受精，差异不显著(Pgt;0.05)。试验，注射 hCG 后 13-15h 采集的卵母细胞受精率高于 17h(Plt;0.05)，而 2-细胞发育率差异不显著(Pgt;0.05)。试验，用透明质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著(Pgt;0.05)。试验，自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵 2-细胞发育率较高，差异显著(Plt;0.05)。 2.分析 LIF 对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在精子获
39、能及早期胚胎体外发育中的调控及作用机理。获能液中添加 0.1-10ng/ml 浓度 LIF 后，精子活力、卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，但当浓度为 100ng/ml 时，明显低于对照组(Plt;0.01)。培养液中添加 0.1-25ng/ml 浓度的 LIF 能提高 8-细胞期的比例，但与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，添加50ng/ml、100ng/ml 组囊胚发育率与对照组差异显著(Plt;0.05)。而0.1ng/ml LIF 处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚率显著高于其他试验组与对照组(Plt;0.05)，其他组作用不明显。 3.采用不同化学激
40、活方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活研究。分别采用氯化锶与细胞松弛素 B(CB)，钙离子载体 A23187 和乙醇分别与 6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和 CB 联合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合 6-DMAP+CB 与 A23187 联合 6-DMAP+CB 的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15mmol/L srcLlt;,2gt;联合 CB 处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。 4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤雌激活胚与
41、体外受精胚卵裂率差异显著(Plt;0.05)，而桑椹胚与囊胚发育率差异不显著(Pgt;0.05)；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊胚发育的总体比率差异不显著(Pgt;0.05)。对小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的研究，有助于揭示小鼠卵母细胞活化机制，为提高核移植效率和优化胚胎体外生产系统提供理论依据。 本试验在小鼠 MII 期卵母细胞体外受精与孤雌激活的基础上，重点研究体外受精影响因素、胚胎培养、化学激活方法及对比孤雌激活胚与体外受精胚的早期发育。为随后的核移植、转基因、干细胞研究提供必需的技术路线和试验依据。 结果如下： 1.分析体外受精过程中的各
42、种影响因素，探讨精子获能液、成熟卵子的采集时间、方法及处理方法对小鼠体外受精效果的影响。试验，HTF 与mKSOM 获能液均适用于小鼠体外受精，差异不显著(Pgt;0.05)。试验，注射 hCG 后 13-15h 采集的卵母细胞受精率高于 17h(Plt;0.05)，而 2-细胞发育率差异不显著(Pgt;0.05)。试验，用透明质酸酶处理对成熟卵母细胞受精率和卵裂率影响不大，与不处理组差异不显著(Pgt;0.05)。试验，自然周期卵组与超排卵组的受精率无明显差异，但自然周期卵 2-细胞发育率较高，差异显著(Plt;0.05)。 2.分析 LIF 对体外受精及体外受精胚早期发育的影响，以观察其在
43、精子获能及早期胚胎体外发育中的调控及作用机理。获能液中添加 0.1-10ng/ml 浓度 LIF 后，精子活力、卵母细胞受精率没有显著提高，与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，但当浓度为 100ng/ml 时，明显低于对照组(Plt;0.01)。培养液中添加 0.1-25ng/ml 浓度的 LIF 能提高 8-细胞期的比例，但与对照组差异不显著(Pgt;0.05)，添加50ng/ml、100ng/ml 组囊胚发育率与对照组差异显著(Plt;0.05)。而0.1ng/ml LIF 处理组扩张囊胚发育率、孵化囊胚率显著高于其他试验组与对照组(Plt;0.05)，其他组作用不明显。 3.采用不同
44、化学激活方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活研究。分别采用氯化锶与细胞松弛素 B(CB)，钙离子载体 A23187 和乙醇分别与 6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和 CB 联合的方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。在几种化学激活方法中，乙醇联合 6-DMAP+CB 与 A23187 联合 6-DMAP+CB 的激活率、桑椹胚、囊胚率效果较好，15mmol/L srcLlt;,2gt;联合 CB 处理效果次之，为核移植后小鼠重构卵的激活提供了技术参数。 4.比较体外受精胚与孤雌激活胚在相同的体外培养条件下的发育率与发育速度，探讨是否可以用孤雌激活技术代替体外受精技术来检测体外培养系统。在相同条件下，孤雌激
45、活胚与体外受精胚卵裂率差异显著(Plt;0.05)，而桑椹胚与囊胚发育率差异不显著(Pgt;0.05)；在相同条件下，孤雌激活胚与体外受精胚的囊胚出现时间基本一致，且囊胚发育的总体比率差异不显著(Pgt;0.05)。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x 滌甸?*U 躆 跦?l, 墀 VGi?o 嫅#4K 錶 c#x
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