去上皮人羊膜修复兔输尿管缺损的实验研究.doc

1、泌尿外科学专业毕业论文 精品论文 去上皮人羊膜修复兔输尿管缺损的实验研究关键词：去上皮人羊膜 膀胱移行上皮细胞 输尿管缺损 组织工程摘要：目的： 探讨使用去上皮人羊膜重建兔输尿管缺损的可行性及其效果。 方法： 实验分两个部分进行。 第一部分：采用胰蛋白酶消化法获取大白兔膀胱移行上皮细胞，放入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基中培养，倒置显微镜下观察细胞的生长增殖情况。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮细胞层，制成去上皮人羊膜标本，再取兔膀胱移行上皮细胞负载于去上皮人羊膜上加入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基共同培养，观察兔膀胱移行上皮在去上皮人羊膜上贴附、生长及增殖情况。 第二部分：使用裁剪成

2、4.5 cm0.5 cm 的片状去上皮人羊膜，围绕硬膜外导管缝合成袖套状；将兔左侧输尿管从中上段切除 4 cm，制成单侧输尿管缺损模型。使用缝合好的其内有支架管的袖套状去上皮人羊膜输尿管上下两侧端端吻合于兔输尿管，手术共成功进行 18 例。术后饲养兔 3 个月，行静脉尿路造影检查，观察输尿管畅通状况。造影后将兔处死，解剖观察人羊膜支架体内状况；取人羊膜输尿管组织行 HE 染色检查，免疫组织化学平滑肌细胞 -Actin 和移行上皮细胞角蛋白 CKAE1/AE3 检查，观察去上皮人羊膜支架输尿管上平滑肌和上皮细胞生长情况。 结果： 体外兔膀胱移行上皮细胞培养发现，原代细胞 1224 小时可贴壁，3

3、6 小时后生长加速，57 天可以达到80融合，呈铺路石状排列。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上生长良好，接种第 2 天细胞即已附着于羊膜基底面，72 小时细胞基本形成层状排列，714 天内融合成单细胞层。大白兔输尿管缺损修复手术共进行 18 例，6 例在术后 3 月内因感染死亡，剩余 12 只兔在 3 个月时进行了静脉尿路造影，检查显示术侧输尿管通畅，造影剂顺利通过，管腔与未手术侧相比无明显狭窄，肾盂内无积水，其中术侧输尿管显影良好 7 只，部分显影 3 只，显影不佳 2 只。肉眼观察发现人羊膜输尿管与周围组织粘连，羊膜输尿管表面有丰富的血运，管腔大小正常，无明显挛缩。显微镜下观察，人羊膜输

4、尿管已形成移行上皮层和平滑肌层，免疫组化检查人羊膜输尿管组织平滑肌细胞 -Actin 染色和移行上皮细胞 CKAE1/AE3 染色均为阳性。 结论： 在合适的培养环境中，兔膀胱移行上皮细胞可以较大规模培养。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上能够很好的贴附、生长和增殖，2 周左右可以形成单细胞层；去上皮人羊膜是兔膀胱移行上皮细胞体外培养的良好载体。以去上皮人羊膜作为重建大白兔输尿管缺损的支架材料，术后人羊膜支架无明显挛缩或坏死，其上可以形成输尿管上皮层和肌肉层，能够恢复正常的泌尿管道连接功能。去上皮人羊膜具有作为泌尿系统腔道组织工程支架的潜在应用价值。正文内容目的： 探讨使用去上皮人羊膜重建兔输

5、尿管缺损的可行性及其效果。 方法： 实验分两个部分进行。 第一部分：采用胰蛋白酶消化法获取大白兔膀胱移行上皮细胞，放入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基中培养，倒置显微镜下观察细胞的生长增殖情况。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮细胞层，制成去上皮人羊膜标本，再取兔膀胱移行上皮细胞负载于去上皮人羊膜上加入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基共同培养，观察兔膀胱移行上皮在去上皮人羊膜上贴附、生长及增殖情况。 第二部分：使用裁剪成 4.5 cm0.5 cm 的片状去上皮人羊膜，围绕硬膜外导管缝合成袖套状；将兔左侧输尿管从中上段切除 4 cm，制成单侧输尿管缺损模型。使用缝合好的其内有支架管的袖套状去上皮

6、人羊膜输尿管上下两侧端端吻合于兔输尿管，手术共成功进行 18 例。术后饲养兔 3 个月，行静脉尿路造影检查，观察输尿管畅通状况。造影后将兔处死，解剖观察人羊膜支架体内状况；取人羊膜输尿管组织行 HE 染色检查，免疫组织化学平滑肌细胞 -Actin 和移行上皮细胞角蛋白 CKAE1/AE3 检查，观察去上皮人羊膜支架输尿管上平滑肌和上皮细胞生长情况。 结果： 体外兔膀胱移行上皮细胞培养发现，原代细胞 1224 小时可贴壁，36 小时后生长加速，57 天可以达到80融合，呈铺路石状排列。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上生长良好，接种第 2 天细胞即已附着于羊膜基底面，72 小时细胞基本形成层状排

7、列，714 天内融合成单细胞层。大白兔输尿管缺损修复手术共进行 18 例，6 例在术后 3 月内因感染死亡，剩余 12 只兔在 3 个月时进行了静脉尿路造影，检查显示术侧输尿管通畅，造影剂顺利通过，管腔与未手术侧相比无明显狭窄，肾盂内无积水，其中术侧输尿管显影良好 7 只，部分显影 3 只，显影不佳 2 只。肉眼观察发现人羊膜输尿管与周围组织粘连，羊膜输尿管表面有丰富的血运，管腔大小正常，无明显挛缩。显微镜下观察，人羊膜输尿管已形成移行上皮层和平滑肌层，免疫组化检查人羊膜输尿管组织平滑肌细胞 -Actin 染色和移行上皮细胞 CKAE1/AE3 染色均为阳性。 结论： 在合适的培养环境中，兔膀

8、胱移行上皮细胞可以较大规模培养。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上能够很好的贴附、生长和增殖，2 周左右可以形成单细胞层；去上皮人羊膜是兔膀胱移行上皮细胞体外培养的良好载体。以去上皮人羊膜作为重建大白兔输尿管缺损的支架材料，术后人羊膜支架无明显挛缩或坏死，其上可以形成输尿管上皮层和肌肉层，能够恢复正常的泌尿管道连接功能。去上皮人羊膜具有作为泌尿系统腔道组织工程支架的潜在应用价值。目的： 探讨使用去上皮人羊膜重建兔输尿管缺损的可行性及其效果。 方法： 实验分两个部分进行。 第一部分：采用胰蛋白酶消化法获取大白兔膀胱移行上皮细胞，放入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基中培养，倒置显微镜下观察细胞

9、的生长增殖情况。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮细胞层，制成去上皮人羊膜标本，再取兔膀胱移行上皮细胞负载于去上皮人羊膜上加入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基共同培养，观察兔膀胱移行上皮在去上皮人羊膜上贴附、生长及增殖情况。 第二部分：使用裁剪成 4.5 cm0.5 cm 的片状去上皮人羊膜，围绕硬膜外导管缝合成袖套状；将兔左侧输尿管从中上段切除 4 cm，制成单侧输尿管缺损模型。使用缝合好的其内有支架管的袖套状去上皮人羊膜输尿管上下两侧端端吻合于兔输尿管，手术共成功进行 18 例。术后饲养兔 3 个月，行静脉尿路造影检查，观察输尿管畅通状况。造影后将兔处死，解剖观察人羊膜支架体内状况；取人羊膜输

10、尿管组织行 HE 染色检查，免疫组织化学平滑肌细胞 -Actin 和移行上皮细胞角蛋白 CKAE1/AE3 检查，观察去上皮人羊膜支架输尿管上平滑肌和上皮细胞生长情况。 结果： 体外兔膀胱移行上皮细胞培养发现，原代细胞 1224 小时可贴壁，36 小时后生长加速，57 天可以达到80融合，呈铺路石状排列。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上生长良好，接种第 2 天细胞即已附着于羊膜基底面，72 小时细胞基本形成层状排列，714 天内融合成单细胞层。大白兔输尿管缺损修复手术共进行 18 例，6 例在术后 3 月内因感染死亡，剩余 12 只兔在 3 个月时进行了静脉尿路造影，检查显示术侧输尿管通畅，

11、造影剂顺利通过，管腔与未手术侧相比无明显狭窄，肾盂内无积水，其中术侧输尿管显影良好 7 只，部分显影 3 只，显影不佳 2 只。肉眼观察发现人羊膜输尿管与周围组织粘连，羊膜输尿管表面有丰富的血运，管腔大小正常，无明显挛缩。显微镜下观察，人羊膜输尿管已形成移行上皮层和平滑肌层，免疫组化检查人羊膜输尿管组织平滑肌细胞 -Actin 染色和移行上皮细胞 CKAE1/AE3 染色均为阳性。 结论： 在合适的培养环境中，兔膀胱移行上皮细胞可以较大规模培养。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上能够很好的贴附、生长和增殖，2 周左右可以形成单细胞层；去上皮人羊膜是兔膀胱移行上皮细胞体外培养的良好载体。以去上皮

12、人羊膜作为重建大白兔输尿管缺损的支架材料，术后人羊膜支架无明显挛缩或坏死，其上可以形成输尿管上皮层和肌肉层，能够恢复正常的泌尿管道连接功能。去上皮人羊膜具有作为泌尿系统腔道组织工程支架的潜在应用价值。目的： 探讨使用去上皮人羊膜重建兔输尿管缺损的可行性及其效果。 方法： 实验分两个部分进行。 第一部分：采用胰蛋白酶消化法获取大白兔膀胱移行上皮细胞，放入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基中培养，倒置显微镜下观察细胞的生长增殖情况。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮细胞层，制成去上皮人羊膜标本，再取兔膀胱移行上皮细胞负载于去上皮人羊膜上加入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基共同培养，观察兔膀胱移行上皮

13、在去上皮人羊膜上贴附、生长及增殖情况。 第二部分：使用裁剪成 4.5 cm0.5 cm 的片状去上皮人羊膜，围绕硬膜外导管缝合成袖套状；将兔左侧输尿管从中上段切除 4 cm，制成单侧输尿管缺损模型。使用缝合好的其内有支架管的袖套状去上皮人羊膜输尿管上下两侧端端吻合于兔输尿管，手术共成功进行 18 例。术后饲养兔 3 个月，行静脉尿路造影检查，观察输尿管畅通状况。造影后将兔处死，解剖观察人羊膜支架体内状况；取人羊膜输尿管组织行 HE 染色检查，免疫组织化学平滑肌细胞 -Actin 和移行上皮细胞角蛋白 CKAE1/AE3 检查，观察去上皮人羊膜支架输尿管上平滑肌和上皮细胞生长情况。 结果： 体外

14、兔膀胱移行上皮细胞培养发现，原代细胞 1224 小时可贴壁，36 小时后生长加速，57 天可以达到80融合，呈铺路石状排列。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上生长良好，接种第 2 天细胞即已附着于羊膜基底面，72 小时细胞基本形成层状排列，714 天内融合成单细胞层。大白兔输尿管缺损修复手术共进行 18 例，6 例在术后 3 月内因感染死亡，剩余 12 只兔在 3 个月时进行了静脉尿路造影，检查显示术侧输尿管通畅，造影剂顺利通过，管腔与未手术侧相比无明显狭窄，肾盂内无积水，其中术侧输尿管显影良好 7 只，部分显影 3 只，显影不佳 2 只。肉眼观察发现人羊膜输尿管与周围组织粘连，羊膜输尿管表面

15、有丰富的血运，管腔大小正常，无明显挛缩。显微镜下观察，人羊膜输尿管已形成移行上皮层和平滑肌层，免疫组化检查人羊膜输尿管组织平滑肌细胞 -Actin 染色和移行上皮细胞 CKAE1/AE3 染色均为阳性。 结论： 在合适的培养环境中，兔膀胱移行上皮细胞可以较大规模培养。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上能够很好的贴附、生长和增殖，2 周左右可以形成单细胞层；去上皮人羊膜是兔膀胱移行上皮细胞体外培养的良好载体。以去上皮人羊膜作为重建大白兔输尿管缺损的支架材料，术后人羊膜支架无明显挛缩或坏死，其上可以形成输尿管上皮层和肌肉层，能够恢复正常的泌尿管道连接功能。去上皮人羊膜具有作为泌尿系统腔道组织工程支

16、架的潜在应用价值。目的： 探讨使用去上皮人羊膜重建兔输尿管缺损的可行性及其效果。 方法： 实验分两个部分进行。 第一部分：采用胰蛋白酶消化法获取大白兔膀胱移行上皮细胞，放入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基中培养，倒置显微镜下观察细胞的生长增殖情况。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮细胞层，制成去上皮人羊膜标本，再取兔膀胱移行上皮细胞负载于去上皮人羊膜上加入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基共同培养，观察兔膀胱移行上皮在去上皮人羊膜上贴附、生长及增殖情况。 第二部分：使用裁剪成 4.5 cm0.5 cm 的片状去上皮人羊膜，围绕硬膜外导管缝合成袖套状；将兔左侧输尿管从中上段切除 4 cm，制成单侧

17、输尿管缺损模型。使用缝合好的其内有支架管的袖套状去上皮人羊膜输尿管上下两侧端端吻合于兔输尿管，手术共成功进行 18 例。术后饲养兔 3 个月，行静脉尿路造影检查，观察输尿管畅通状况。造影后将兔处死，解剖观察人羊膜支架体内状况；取人羊膜输尿管组织行 HE 染色检查，免疫组织化学平滑肌细胞 -Actin 和移行上皮细胞角蛋白 CKAE1/AE3 检查，观察去上皮人羊膜支架输尿管上平滑肌和上皮细胞生长情况。 结果： 体外兔膀胱移行上皮细胞培养发现，原代细胞 1224 小时可贴壁，36 小时后生长加速，57 天可以达到80融合，呈铺路石状排列。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上生长良好，接种第 2 天

18、细胞即已附着于羊膜基底面，72 小时细胞基本形成层状排列，714 天内融合成单细胞层。大白兔输尿管缺损修复手术共进行 18 例，6 例在术后 3 月内因感染死亡，剩余 12 只兔在 3 个月时进行了静脉尿路造影，检查显示术侧输尿管通畅，造影剂顺利通过，管腔与未手术侧相比无明显狭窄，肾盂内无积水，其中术侧输尿管显影良好 7 只，部分显影 3 只，显影不佳 2 只。肉眼观察发现人羊膜输尿管与周围组织粘连，羊膜输尿管表面有丰富的血运，管腔大小正常，无明显挛缩。显微镜下观察，人羊膜输尿管已形成移行上皮层和平滑肌层，免疫组化检查人羊膜输尿管组织平滑肌细胞 -Actin 染色和移行上皮细胞 CKAE1/A

19、E3 染色均为阳性。 结论： 在合适的培养环境中，兔膀胱移行上皮细胞可以较大规模培养。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上能够很好的贴附、生长和增殖，2 周左右可以形成单细胞层；去上皮人羊膜是兔膀胱移行上皮细胞体外培养的良好载体。以去上皮人羊膜作为重建大白兔输尿管缺损的支架材料，术后人羊膜支架无明显挛缩或坏死，其上可以形成输尿管上皮层和肌肉层，能够恢复正常的泌尿管道连接功能。去上皮人羊膜具有作为泌尿系统腔道组织工程支架的潜在应用价值。目的： 探讨使用去上皮人羊膜重建兔输尿管缺损的可行性及其效果。 方法： 实验分两个部分进行。 第一部分：采用胰蛋白酶消化法获取大白兔膀胱移行上皮细胞，放入含 10胎

20、牛血清的 DMEM 培养基中培养，倒置显微镜下观察细胞的生长增殖情况。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮细胞层，制成去上皮人羊膜标本，再取兔膀胱移行上皮细胞负载于去上皮人羊膜上加入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基共同培养，观察兔膀胱移行上皮在去上皮人羊膜上贴附、生长及增殖情况。 第二部分：使用裁剪成 4.5 cm0.5 cm 的片状去上皮人羊膜，围绕硬膜外导管缝合成袖套状；将兔左侧输尿管从中上段切除 4 cm，制成单侧输尿管缺损模型。使用缝合好的其内有支架管的袖套状去上皮人羊膜输尿管上下两侧端端吻合于兔输尿管，手术共成功进行 18 例。术后饲养兔 3 个月，行静脉尿路造影检查，观察输尿管畅通状况。

21、造影后将兔处死，解剖观察人羊膜支架体内状况；取人羊膜输尿管组织行 HE 染色检查，免疫组织化学平滑肌细胞 -Actin 和移行上皮细胞角蛋白 CKAE1/AE3 检查，观察去上皮人羊膜支架输尿管上平滑肌和上皮细胞生长情况。 结果： 体外兔膀胱移行上皮细胞培养发现，原代细胞 1224 小时可贴壁，36 小时后生长加速，57 天可以达到80融合，呈铺路石状排列。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上生长良好，接种第 2 天细胞即已附着于羊膜基底面，72 小时细胞基本形成层状排列，714 天内融合成单细胞层。大白兔输尿管缺损修复手术共进行 18 例，6 例在术后 3 月内因感染死亡，剩余 12 只兔在

22、3 个月时进行了静脉尿路造影，检查显示术侧输尿管通畅，造影剂顺利通过，管腔与未手术侧相比无明显狭窄，肾盂内无积水，其中术侧输尿管显影良好 7 只，部分显影 3 只，显影不佳 2 只。肉眼观察发现人羊膜输尿管与周围组织粘连，羊膜输尿管表面有丰富的血运，管腔大小正常，无明显挛缩。显微镜下观察，人羊膜输尿管已形成移行上皮层和平滑肌层，免疫组化检查人羊膜输尿管组织平滑肌细胞 -Actin 染色和移行上皮细胞 CKAE1/AE3 染色均为阳性。 结论： 在合适的培养环境中，兔膀胱移行上皮细胞可以较大规模培养。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上能够很好的贴附、生长和增殖，2 周左右可以形成单细胞层；去上皮

23、人羊膜是兔膀胱移行上皮细胞体外培养的良好载体。以去上皮人羊膜作为重建大白兔输尿管缺损的支架材料，术后人羊膜支架无明显挛缩或坏死，其上可以形成输尿管上皮层和肌肉层，能够恢复正常的泌尿管道连接功能。去上皮人羊膜具有作为泌尿系统腔道组织工程支架的潜在应用价值。目的： 探讨使用去上皮人羊膜重建兔输尿管缺损的可行性及其效果。 方法： 实验分两个部分进行。 第一部分：采用胰蛋白酶消化法获取大白兔膀胱移行上皮细胞，放入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基中培养，倒置显微镜下观察细胞的生长增殖情况。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮细胞层，制成去上皮人羊膜标本，再取兔膀胱移行上皮细胞负载于去上皮人羊膜上加入含 10胎

24、牛血清的 DMEM 培养基共同培养，观察兔膀胱移行上皮在去上皮人羊膜上贴附、生长及增殖情况。 第二部分：使用裁剪成 4.5 cm0.5 cm 的片状去上皮人羊膜，围绕硬膜外导管缝合成袖套状；将兔左侧输尿管从中上段切除 4 cm，制成单侧输尿管缺损模型。使用缝合好的其内有支架管的袖套状去上皮人羊膜输尿管上下两侧端端吻合于兔输尿管，手术共成功进行 18 例。术后饲养兔 3 个月，行静脉尿路造影检查，观察输尿管畅通状况。造影后将兔处死，解剖观察人羊膜支架体内状况；取人羊膜输尿管组织行 HE 染色检查，免疫组织化学平滑肌细胞 -Actin 和移行上皮细胞角蛋白 CKAE1/AE3 检查，观察去上皮人羊

25、膜支架输尿管上平滑肌和上皮细胞生长情况。 结果： 体外兔膀胱移行上皮细胞培养发现，原代细胞 1224 小时可贴壁，36 小时后生长加速，57 天可以达到80融合，呈铺路石状排列。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上生长良好，接种第 2 天细胞即已附着于羊膜基底面，72 小时细胞基本形成层状排列，714 天内融合成单细胞层。大白兔输尿管缺损修复手术共进行 18 例，6 例在术后 3 月内因感染死亡，剩余 12 只兔在 3 个月时进行了静脉尿路造影，检查显示术侧输尿管通畅，造影剂顺利通过，管腔与未手术侧相比无明显狭窄，肾盂内无积水，其中术侧输尿管显影良好 7 只，部分显影 3 只，显影不佳 2 只。

26、肉眼观察发现人羊膜输尿管与周围组织粘连，羊膜输尿管表面有丰富的血运，管腔大小正常，无明显挛缩。显微镜下观察，人羊膜输尿管已形成移行上皮层和平滑肌层，免疫组化检查人羊膜输尿管组织平滑肌细胞 -Actin 染色和移行上皮细胞 CKAE1/AE3 染色均为阳性。 结论： 在合适的培养环境中，兔膀胱移行上皮细胞可以较大规模培养。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上能够很好的贴附、生长和增殖，2 周左右可以形成单细胞层；去上皮人羊膜是兔膀胱移行上皮细胞体外培养的良好载体。以去上皮人羊膜作为重建大白兔输尿管缺损的支架材料，术后人羊膜支架无明显挛缩或坏死，其上可以形成输尿管上皮层和肌肉层，能够恢复正常的泌尿管

27、道连接功能。去上皮人羊膜具有作为泌尿系统腔道组织工程支架的潜在应用价值。目的： 探讨使用去上皮人羊膜重建兔输尿管缺损的可行性及其效果。 方法： 实验分两个部分进行。 第一部分：采用胰蛋白酶消化法获取大白兔膀胱移行上皮细胞，放入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基中培养，倒置显微镜下观察细胞的生长增殖情况。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮细胞层，制成去上皮人羊膜标本，再取兔膀胱移行上皮细胞负载于去上皮人羊膜上加入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基共同培养，观察兔膀胱移行上皮在去上皮人羊膜上贴附、生长及增殖情况。 第二部分：使用裁剪成 4.5 cm0.5 cm 的片状去上皮人羊膜，围绕硬膜外导管缝合成

28、袖套状；将兔左侧输尿管从中上段切除 4 cm，制成单侧输尿管缺损模型。使用缝合好的其内有支架管的袖套状去上皮人羊膜输尿管上下两侧端端吻合于兔输尿管，手术共成功进行 18 例。术后饲养兔 3 个月，行静脉尿路造影检查，观察输尿管畅通状况。造影后将兔处死，解剖观察人羊膜支架体内状况；取人羊膜输尿管组织行 HE 染色检查，免疫组织化学平滑肌细胞 -Actin 和移行上皮细胞角蛋白 CKAE1/AE3 检查，观察去上皮人羊膜支架输尿管上平滑肌和上皮细胞生长情况。 结果： 体外兔膀胱移行上皮细胞培养发现，原代细胞 1224 小时可贴壁，36 小时后生长加速，57 天可以达到80融合，呈铺路石状排列。兔膀

29、胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上生长良好，接种第 2 天细胞即已附着于羊膜基底面，72 小时细胞基本形成层状排列，714 天内融合成单细胞层。大白兔输尿管缺损修复手术共进行 18 例，6 例在术后 3 月内因感染死亡，剩余 12 只兔在 3 个月时进行了静脉尿路造影，检查显示术侧输尿管通畅，造影剂顺利通过，管腔与未手术侧相比无明显狭窄，肾盂内无积水，其中术侧输尿管显影良好 7 只，部分显影 3 只，显影不佳 2 只。肉眼观察发现人羊膜输尿管与周围组织粘连，羊膜输尿管表面有丰富的血运，管腔大小正常，无明显挛缩。显微镜下观察，人羊膜输尿管已形成移行上皮层和平滑肌层，免疫组化检查人羊膜输尿管组织平滑肌

30、细胞 -Actin 染色和移行上皮细胞 CKAE1/AE3 染色均为阳性。 结论： 在合适的培养环境中，兔膀胱移行上皮细胞可以较大规模培养。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上能够很好的贴附、生长和增殖，2 周左右可以形成单细胞层；去上皮人羊膜是兔膀胱移行上皮细胞体外培养的良好载体。以去上皮人羊膜作为重建大白兔输尿管缺损的支架材料，术后人羊膜支架无明显挛缩或坏死，其上可以形成输尿管上皮层和肌肉层，能够恢复正常的泌尿管道连接功能。去上皮人羊膜具有作为泌尿系统腔道组织工程支架的潜在应用价值。目的： 探讨使用去上皮人羊膜重建兔输尿管缺损的可行性及其效果。 方法： 实验分两个部分进行。 第一部分：采用胰

31、蛋白酶消化法获取大白兔膀胱移行上皮细胞，放入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基中培养，倒置显微镜下观察细胞的生长增殖情况。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮细胞层，制成去上皮人羊膜标本，再取兔膀胱移行上皮细胞负载于去上皮人羊膜上加入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基共同培养，观察兔膀胱移行上皮在去上皮人羊膜上贴附、生长及增殖情况。 第二部分：使用裁剪成 4.5 cm0.5 cm 的片状去上皮人羊膜，围绕硬膜外导管缝合成袖套状；将兔左侧输尿管从中上段切除 4 cm，制成单侧输尿管缺损模型。使用缝合好的其内有支架管的袖套状去上皮人羊膜输尿管上下两侧端端吻合于兔输尿管，手术共成功进行 18 例。术后饲养

32、兔 3 个月，行静脉尿路造影检查，观察输尿管畅通状况。造影后将兔处死，解剖观察人羊膜支架体内状况；取人羊膜输尿管组织行 HE 染色检查，免疫组织化学平滑肌细胞 -Actin 和移行上皮细胞角蛋白 CKAE1/AE3 检查，观察去上皮人羊膜支架输尿管上平滑肌和上皮细胞生长情况。 结果： 体外兔膀胱移行上皮细胞培养发现，原代细胞 1224 小时可贴壁，36 小时后生长加速，57 天可以达到80融合，呈铺路石状排列。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上生长良好，接种第 2 天细胞即已附着于羊膜基底面，72 小时细胞基本形成层状排列，714 天内融合成单细胞层。大白兔输尿管缺损修复手术共进行 18 例，

33、6 例在术后 3 月内因感染死亡，剩余 12 只兔在 3 个月时进行了静脉尿路造影，检查显示术侧输尿管通畅，造影剂顺利通过，管腔与未手术侧相比无明显狭窄，肾盂内无积水，其中术侧输尿管显影良好 7 只，部分显影 3 只，显影不佳 2 只。肉眼观察发现人羊膜输尿管与周围组织粘连，羊膜输尿管表面有丰富的血运，管腔大小正常，无明显挛缩。显微镜下观察，人羊膜输尿管已形成移行上皮层和平滑肌层，免疫组化检查人羊膜输尿管组织平滑肌细胞 -Actin 染色和移行上皮细胞 CKAE1/AE3 染色均为阳性。 结论： 在合适的培养环境中，兔膀胱移行上皮细胞可以较大规模培养。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上能够很好

34、的贴附、生长和增殖，2 周左右可以形成单细胞层；去上皮人羊膜是兔膀胱移行上皮细胞体外培养的良好载体。以去上皮人羊膜作为重建大白兔输尿管缺损的支架材料，术后人羊膜支架无明显挛缩或坏死，其上可以形成输尿管上皮层和肌肉层，能够恢复正常的泌尿管道连接功能。去上皮人羊膜具有作为泌尿系统腔道组织工程支架的潜在应用价值。目的： 探讨使用去上皮人羊膜重建兔输尿管缺损的可行性及其效果。 方法： 实验分两个部分进行。 第一部分：采用胰蛋白酶消化法获取大白兔膀胱移行上皮细胞，放入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基中培养，倒置显微镜下观察细胞的生长增殖情况。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮细胞层，制成去上皮人羊膜标本，再

35、取兔膀胱移行上皮细胞负载于去上皮人羊膜上加入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基共同培养，观察兔膀胱移行上皮在去上皮人羊膜上贴附、生长及增殖情况。 第二部分：使用裁剪成 4.5 cm0.5 cm 的片状去上皮人羊膜，围绕硬膜外导管缝合成袖套状；将兔左侧输尿管从中上段切除 4 cm，制成单侧输尿管缺损模型。使用缝合好的其内有支架管的袖套状去上皮人羊膜输尿管上下两侧端端吻合于兔输尿管，手术共成功进行 18 例。术后饲养兔 3 个月，行静脉尿路造影检查，观察输尿管畅通状况。造影后将兔处死，解剖观察人羊膜支架体内状况；取人羊膜输尿管组织行 HE 染色检查，免疫组织化学平滑肌细胞 -Actin 和移行上

36、皮细胞角蛋白 CKAE1/AE3 检查，观察去上皮人羊膜支架输尿管上平滑肌和上皮细胞生长情况。 结果： 体外兔膀胱移行上皮细胞培养发现，原代细胞 1224 小时可贴壁，36 小时后生长加速，57 天可以达到80融合，呈铺路石状排列。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上生长良好，接种第 2 天细胞即已附着于羊膜基底面，72 小时细胞基本形成层状排列，714 天内融合成单细胞层。大白兔输尿管缺损修复手术共进行 18 例，6 例在术后 3 月内因感染死亡，剩余 12 只兔在 3 个月时进行了静脉尿路造影，检查显示术侧输尿管通畅，造影剂顺利通过，管腔与未手术侧相比无明显狭窄，肾盂内无积水，其中术侧输尿管

37、显影良好 7 只，部分显影 3 只，显影不佳 2 只。肉眼观察发现人羊膜输尿管与周围组织粘连，羊膜输尿管表面有丰富的血运，管腔大小正常，无明显挛缩。显微镜下观察，人羊膜输尿管已形成移行上皮层和平滑肌层，免疫组化检查人羊膜输尿管组织平滑肌细胞 -Actin 染色和移行上皮细胞 CKAE1/AE3 染色均为阳性。 结论： 在合适的培养环境中，兔膀胱移行上皮细胞可以较大规模培养。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上能够很好的贴附、生长和增殖，2 周左右可以形成单细胞层；去上皮人羊膜是兔膀胱移行上皮细胞体外培养的良好载体。以去上皮人羊膜作为重建大白兔输尿管缺损的支架材料，术后人羊膜支架无明显挛缩或坏死，

38、其上可以形成输尿管上皮层和肌肉层，能够恢复正常的泌尿管道连接功能。去上皮人羊膜具有作为泌尿系统腔道组织工程支架的潜在应用价值。目的： 探讨使用去上皮人羊膜重建兔输尿管缺损的可行性及其效果。 方法： 实验分两个部分进行。 第一部分：采用胰蛋白酶消化法获取大白兔膀胱移行上皮细胞，放入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基中培养，倒置显微镜下观察细胞的生长增殖情况。胰蛋白酶消化去除人羊膜上皮细胞层，制成去上皮人羊膜标本，再取兔膀胱移行上皮细胞负载于去上皮人羊膜上加入含 10胎牛血清的 DMEM 培养基共同培养，观察兔膀胱移行上皮在去上皮人羊膜上贴附、生长及增殖情况。 第二部分：使用裁剪成 4.5 cm

39、0.5 cm 的片状去上皮人羊膜，围绕硬膜外导管缝合成袖套状；将兔左侧输尿管从中上段切除 4 cm，制成单侧输尿管缺损模型。使用缝合好的其内有支架管的袖套状去上皮人羊膜输尿管上下两侧端端吻合于兔输尿管，手术共成功进行 18 例。术后饲养兔 3 个月，行静脉尿路造影检查，观察输尿管畅通状况。造影后将兔处死，解剖观察人羊膜支架体内状况；取人羊膜输尿管组织行 HE 染色检查，免疫组织化学平滑肌细胞 -Actin 和移行上皮细胞角蛋白 CKAE1/AE3 检查，观察去上皮人羊膜支架输尿管上平滑肌和上皮细胞生长情况。 结果： 体外兔膀胱移行上皮细胞培养发现，原代细胞 1224 小时可贴壁，36 小时后生

40、长加速，57 天可以达到80融合，呈铺路石状排列。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上生长良好，接种第 2 天细胞即已附着于羊膜基底面，72 小时细胞基本形成层状排列，714 天内融合成单细胞层。大白兔输尿管缺损修复手术共进行 18 例，6 例在术后 3 月内因感染死亡，剩余 12 只兔在 3 个月时进行了静脉尿路造影，检查显示术侧输尿管通畅，造影剂顺利通过，管腔与未手术侧相比无明显狭窄，肾盂内无积水，其中术侧输尿管显影良好 7 只，部分显影 3 只，显影不佳 2 只。肉眼观察发现人羊膜输尿管与周围组织粘连，羊膜输尿管表面有丰富的血运，管腔大小正常，无明显挛缩。显微镜下观察，人羊膜输尿管已形成移

41、行上皮层和平滑肌层，免疫组化检查人羊膜输尿管组织平滑肌细胞 -Actin 染色和移行上皮细胞 CKAE1/AE3 染色均为阳性。 结论： 在合适的培养环境中，兔膀胱移行上皮细胞可以较大规模培养。兔膀胱移行上皮细胞在去上皮人羊膜上能够很好的贴附、生长和增殖，2 周左右可以形成单细胞层；去上皮人羊膜是兔膀胱移行上皮细胞体外培养的良好载体。以去上皮人羊膜作为重建大白兔输尿管缺损的支架材料，术后人羊膜支架无明显挛缩或坏死，其上可以形成输尿管上皮层和肌肉层，能够恢复正常的泌尿管道连接功能。去上皮人羊膜具有作为泌尿系统腔道组织工程支架的潜在应用价值。特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未

42、有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x 滌?U 閩 AZ箾 FTP 鈦X 飼?狛P? 燚?琯嫼 b?袍*甒?颙嫯?4)=r 宵?i?j 彺帖 B3 锝檡骹笪 yLrQ#?0 鯖 l 壛枒l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛枒 l 壛渓?擗#?“?# 綫 G 刿#K 芿$?7. 耟?Wa 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 皗 E|?pDb 癳$Fb 癳$Fb癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$Fb 癳$F?責鯻 0 橔 C,f 薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵薍秾腵秾腵薍秾腵%?秾腵薍秾腵薍