1、内科学内分泌专业毕业论文 精品论文 LRP16 基因增加脂肪细胞胰岛素抵抗的机制研究关键词：LRP16 基因 脂肪细胞分化 胰岛素抵抗 葡萄糖摄取率 蛋白表达 恶性肿瘤摘要：LRP16 是从健康成人外周血淋巴细胞中克隆的人类基因，它在多种雌激素依赖的肿瘤中高表达。既往研究证明，LRP16 通过上调乳腺癌细胞周期蛋白的表达，促进细胞从 G1 期进入 S 期，最终促进乳腺癌细胞的增殖。前脂肪细胞的分化是以生长抑制为前提的，而生长抑制状态的维持需要将细胞停滞于 G1 期。因此推测：LRP16 可能参与前脂肪细胞的分化。胰岛素抵抗与恶性肿瘤关系密切，一方面多种肿瘤可同时伴有胰岛素抵抗，另一方面胰岛素抵
2、抗又可促进某些肿瘤的发生发展。LRP16 作为一个癌基因，它是否会参与胰岛素抵抗的形成?因此，本研究探讨了 LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化、LRP16 对脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的影响及机制。研究共分为 3 部分：一、LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化以及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达调控的研究 目的：LRP16 蛋白在 3T3-L1 细胞诱导分化过程中表达量的变化及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达的调控。 方法：(1)经典脂肪细胞诱导方案诱导前脂肪细胞为成熟脂肪细胞，每天(0-8天)均留取蛋白标本。(2
3、)不同浓度(0，1，10，100 nmol/L)胰岛素刺激脂肪细胞 24 小时，分别留取蛋白标本。(3)Western-Blot 方法检测样本中 LRP16 蛋白的表达量。 结果：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞无表达或极低表达，从诱导的第 3、4 天开始，随着脂滴的出现表达量迅速上升到峰值，此后维持在高表达水平。LRP16 蛋白在第 68 天之间表达水平无统计学差异(P0.05)，在余各时段间表达水平均有显著差异(P0.01)。(2)细胞内 LRP16 蛋白表达量与胰岛素作用浓度负相关。LRP16 蛋白在胰岛素各浓度段间的表达水平均有显著差异(P0.01)。 结论：(1)LRP16 蛋白在
4、前脂肪细胞诱导分化过程中存在表达量的变化。(2)胰岛素负调控脂肪细胞 LRP16 蛋白的表达。 二、LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化影响的研究 目的：探讨 LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响及机制。 方法：(1)LRP16 稳定过表达前脂肪细胞株建立：将 LRP16真核表达质粒(pcDNA3.1-LRP16)及对照空载体(pcDNA3.1)分别转染 3T3-L1 前脂肪细胞，抗性筛选(G418)出 LRP16 过表达组细胞株(3T3-16)及对照组细胞株(3T3-3.1)。(2)Western-Blot 方法鉴定 LRP16 过表达前脂肪细胞株成功建立。(3)倒置显
5、微镜观察 LRP16 对前脂肪细胞诱导分化过程形态变化的影响。(4)油红 O 染色后，倒置显微镜观察 LRP16 对脂肪细胞成脂分化的影响。(5)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 组与 3T3-3.1 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBP mRNA表达量。 结果：(1)3T3-16 组细胞株，其 LRP16 蛋白量明显高于 3T3-3.1 组(P0.01)。(2)3T3-16 组细胞的分化滞后于 3T3-3.1 组，着色脂滴明显少于3T3-3.1 组，油红 O 染色定量法比较：两组间 OD 值具有显著差异(P0.01)。(3)3T3-16 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBP
6、mRNA 表达量明显低于 3T3-3.1 组(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR 及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 三、LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗影响的研究 目的：探讨 LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及机制。 方法：(1)检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组的脂肪细胞，在基础及胰岛素刺激状态下，对 2-脱氧-3H-D-葡萄糖的摄取率。(2)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量。 结果：(1)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞的基础及胰岛素刺
7、激后的葡萄糖摄取率均减低(P0.01)。(2)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量明显减低(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 全文结论： 1LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 2LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 3胰岛素下调脂肪细胞中 LRP16 蛋白的表达。 以上研究结果表明，LRP16 可能在脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的机制
8、中发挥着十分重要的作用。正文内容LRP16 是从健康成人外周血淋巴细胞中克隆的人类基因，它在多种雌激素依赖的肿瘤中高表达。既往研究证明，LRP16 通过上调乳腺癌细胞周期蛋白的表达，促进细胞从 G1 期进入 S 期，最终促进乳腺癌细胞的增殖。前脂肪细胞的分化是以生长抑制为前提的，而生长抑制状态的维持需要将细胞停滞于 G1 期。因此推测：LRP16 可能参与前脂肪细胞的分化。胰岛素抵抗与恶性肿瘤关系密切，一方面多种肿瘤可同时伴有胰岛素抵抗，另一方面胰岛素抵抗又可促进某些肿瘤的发生发展。LRP16 作为一个癌基因，它是否会参与胰岛素抵抗的形成?因此，本研究探讨了 LRP16 蛋白在 3T3-L1
9、前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化、LRP16 对脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的影响及机制。研究共分为 3 部分：一、LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化以及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达调控的研究 目的：LRP16 蛋白在 3T3-L1 细胞诱导分化过程中表达量的变化及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达的调控。 方法：(1)经典脂肪细胞诱导方案诱导前脂肪细胞为成熟脂肪细胞，每天(0-8天)均留取蛋白标本。(2)不同浓度(0，1，10，100 nmol/L)胰岛素刺激脂肪细胞 24 小时，分别留取蛋白标本。(3)Western-Blot 方法检测样本
10、中 LRP16 蛋白的表达量。 结果：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞无表达或极低表达，从诱导的第 3、4 天开始，随着脂滴的出现表达量迅速上升到峰值，此后维持在高表达水平。LRP16 蛋白在第 68 天之间表达水平无统计学差异(P0.05)，在余各时段间表达水平均有显著差异(P0.01)。(2)细胞内 LRP16 蛋白表达量与胰岛素作用浓度负相关。LRP16 蛋白在胰岛素各浓度段间的表达水平均有显著差异(P0.01)。 结论：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞诱导分化过程中存在表达量的变化。(2)胰岛素负调控脂肪细胞 LRP16 蛋白的表达。 二、LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分
11、化影响的研究 目的：探讨 LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响及机制。 方法：(1)LRP16 稳定过表达前脂肪细胞株建立：将 LRP16真核表达质粒(pcDNA3.1-LRP16)及对照空载体(pcDNA3.1)分别转染 3T3-L1 前脂肪细胞，抗性筛选(G418)出 LRP16 过表达组细胞株(3T3-16)及对照组细胞株(3T3-3.1)。(2)Western-Blot 方法鉴定 LRP16 过表达前脂肪细胞株成功建立。(3)倒置显微镜观察 LRP16 对前脂肪细胞诱导分化过程形态变化的影响。(4)油红 O 染色后，倒置显微镜观察 LRP16 对脂肪细胞成脂分化的影响。(
12、5)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 组与 3T3-3.1 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBP mRNA表达量。 结果：(1)3T3-16 组细胞株，其 LRP16 蛋白量明显高于 3T3-3.1 组(P0.01)。(2)3T3-16 组细胞的分化滞后于 3T3-3.1 组，着色脂滴明显少于3T3-3.1 组，油红 O 染色定量法比较：两组间 OD 值具有显著差异(P0.01)。(3)3T3-16 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBPmRNA 表达量明显低于 3T3-3.1 组(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR 及 C/EBP 的表达，进而
13、抑制脂肪细胞的分化。 三、LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗影响的研究 目的：探讨 LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及机制。 方法：(1)检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组的脂肪细胞，在基础及胰岛素刺激状态下，对 2-脱氧-3H-D-葡萄糖的摄取率。(2)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量。 结果：(1)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率均减低(P0.01)。(2)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量明显减低(P0.01
14、)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 全文结论： 1LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 2LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 3胰岛素下调脂肪细胞中 LRP16 蛋白的表达。 以上研究结果表明，LRP16 可能在脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的机制中发挥着十分重要的作用。LRP16 是从健康成人外周血淋巴细胞中克隆的人类基因，它在多种雌激素依赖的肿瘤中高表达。既往研究证明，LRP16 通
15、过上调乳腺癌细胞周期蛋白的表达，促进细胞从 G1 期进入 S 期，最终促进乳腺癌细胞的增殖。前脂肪细胞的分化是以生长抑制为前提的，而生长抑制状态的维持需要将细胞停滞于 G1 期。因此推测：LRP16 可能参与前脂肪细胞的分化。胰岛素抵抗与恶性肿瘤关系密切，一方面多种肿瘤可同时伴有胰岛素抵抗，另一方面胰岛素抵抗又可促进某些肿瘤的发生发展。LRP16 作为一个癌基因，它是否会参与胰岛素抵抗的形成?因此，本研究探讨了 LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化、LRP16 对脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的影响及机制。研究共分为 3 部分： 一、LRP16 蛋白在 3T3-L1
16、 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化以及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达调控的研究 目的：LRP16 蛋白在 3T3-L1 细胞诱导分化过程中表达量的变化及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达的调控。 方法：(1)经典脂肪细胞诱导方案诱导前脂肪细胞为成熟脂肪细胞，每天(0-8 天)均留取蛋白标本。(2)不同浓度(0，1，10，100 nmol/L)胰岛素刺激脂肪细胞 24 小时，分别留取蛋白标本。(3)Western-Blot 方法检测样本中 LRP16 蛋白的表达量。 结果：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞无表达或极低表达，从诱导的第3、4 天开始，随着脂滴的出现表达量迅速上升到
17、峰值，此后维持在高表达水平。LRP16 蛋白在第 68 天之间表达水平无统计学差异(P0.05)，在余各时段间表达水平均有显著差异(P0.01)。(2)细胞内 LRP16 蛋白表达量与胰岛素作用浓度负相关。LRP16 蛋白在胰岛素各浓度段间的表达水平均有显著差异(P0.01)。 结论：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞诱导分化过程中存在表达量的变化。(2)胰岛素负调控脂肪细胞 LRP16 蛋白的表达。 二、LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化影响的研究 目的：探讨 LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响及机制。 方法：(1)LRP16 稳定过表达前脂肪细胞株建立：将 LRP
18、16真核表达质粒(pcDNA3.1-LRP16)及对照空载体(pcDNA3.1)分别转染 3T3-L1 前脂肪细胞，抗性筛选(G418)出 LRP16 过表达组细胞株(3T3-16)及对照组细胞株(3T3-3.1)。(2)Western-Blot 方法鉴定 LRP16 过表达前脂肪细胞株成功建立。(3)倒置显微镜观察 LRP16 对前脂肪细胞诱导分化过程形态变化的影响。(4)油红 O 染色后，倒置显微镜观察 LRP16 对脂肪细胞成脂分化的影响。(5)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 组与 3T3-3.1 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBP mRNA表达量。 结果：(1)3
19、T3-16 组细胞株，其 LRP16 蛋白量明显高于 3T3-3.1 组(P0.01)。(2)3T3-16 组细胞的分化滞后于 3T3-3.1 组，着色脂滴明显少于3T3-3.1 组，油红 O 染色定量法比较：两组间 OD 值具有显著差异(P0.01)。(3)3T3-16 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBPmRNA 表达量明显低于 3T3-3.1 组(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR 及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 三、LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗影响的研究 目的：探讨 LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及机制。 方法：(1)检测
20、3T3-16 与 3T3-3.1 组的脂肪细胞，在基础及胰岛素刺激状态下，对 2-脱氧-3H-D-葡萄糖的摄取率。(2)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量。 结果：(1)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率均减低(P0.01)。(2)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量明显减低(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 全文结论： 1LRP16
21、可能通过下调脂肪细胞中 PPAR及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 2LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 3胰岛素下调脂肪细胞中 LRP16 蛋白的表达。 以上研究结果表明，LRP16 可能在脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的机制中发挥着十分重要的作用。LRP16 是从健康成人外周血淋巴细胞中克隆的人类基因，它在多种雌激素依赖的肿瘤中高表达。既往研究证明，LRP16 通过上调乳腺癌细胞周期蛋白的表达，促进细胞从 G1 期进入 S 期，最终促进乳腺癌细胞的增殖。前脂肪细胞的分化是以生长抑制为前提的，而生长抑制状态的维
22、持需要将细胞停滞于 G1 期。因此推测：LRP16 可能参与前脂肪细胞的分化。胰岛素抵抗与恶性肿瘤关系密切，一方面多种肿瘤可同时伴有胰岛素抵抗，另一方面胰岛素抵抗又可促进某些肿瘤的发生发展。LRP16 作为一个癌基因，它是否会参与胰岛素抵抗的形成?因此，本研究探讨了 LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化、LRP16 对脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的影响及机制。研究共分为 3 部分： 一、LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化以及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达调控的研究 目的：LRP16 蛋白在 3T3-L1 细胞诱导分化过程
23、中表达量的变化及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达的调控。 方法：(1)经典脂肪细胞诱导方案诱导前脂肪细胞为成熟脂肪细胞，每天(0-8 天)均留取蛋白标本。(2)不同浓度(0，1，10，100 nmol/L)胰岛素刺激脂肪细胞 24 小时，分别留取蛋白标本。(3)Western-Blot 方法检测样本中 LRP16 蛋白的表达量。 结果：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞无表达或极低表达，从诱导的第3、4 天开始，随着脂滴的出现表达量迅速上升到峰值，此后维持在高表达水平。LRP16 蛋白在第 68 天之间表达水平无统计学差异(P0.05)，在余各时段间表达水平均有显著差异(P0.01)。(
24、2)细胞内 LRP16 蛋白表达量与胰岛素作用浓度负相关。LRP16 蛋白在胰岛素各浓度段间的表达水平均有显著差异(P0.01)。 结论：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞诱导分化过程中存在表达量的变化。(2)胰岛素负调控脂肪细胞 LRP16 蛋白的表达。 二、LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化影响的研究 目的：探讨 LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响及机制。 方法：(1)LRP16 稳定过表达前脂肪细胞株建立：将 LRP16真核表达质粒(pcDNA3.1-LRP16)及对照空载体(pcDNA3.1)分别转染 3T3-L1 前脂肪细胞，抗性筛选(G418)出 LRP1
25、6 过表达组细胞株(3T3-16)及对照组细胞株(3T3-3.1)。(2)Western-Blot 方法鉴定 LRP16 过表达前脂肪细胞株成功建立。(3)倒置显微镜观察 LRP16 对前脂肪细胞诱导分化过程形态变化的影响。(4)油红 O 染色后，倒置显微镜观察 LRP16 对脂肪细胞成脂分化的影响。(5)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 组与 3T3-3.1 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBP mRNA表达量。 结果：(1)3T3-16 组细胞株，其 LRP16 蛋白量明显高于 3T3-3.1 组(P0.01)。(2)3T3-16 组细胞的分化滞后于 3T3-3.1 组，
26、着色脂滴明显少于3T3-3.1 组，油红 O 染色定量法比较：两组间 OD 值具有显著差异(P0.01)。(3)3T3-16 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBPmRNA 表达量明显低于 3T3-3.1 组(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR 及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 三、LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗影响的研究 目的：探讨 LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及机制。 方法：(1)检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组的脂肪细胞，在基础及胰岛素刺激状态下，对 2-脱氧-3H-D-葡萄糖的摄取率。(2)Real-time PCR
27、技术检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量。 结果：(1)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率均减低(P0.01)。(2)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量明显减低(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 全文结论： 1LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 2LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制
28、脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 3胰岛素下调脂肪细胞中 LRP16 蛋白的表达。 以上研究结果表明，LRP16 可能在脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的机制中发挥着十分重要的作用。LRP16 是从健康成人外周血淋巴细胞中克隆的人类基因，它在多种雌激素依赖的肿瘤中高表达。既往研究证明，LRP16 通过上调乳腺癌细胞周期蛋白的表达，促进细胞从 G1 期进入 S 期，最终促进乳腺癌细胞的增殖。前脂肪细胞的分化是以生长抑制为前提的，而生长抑制状态的维持需要将细胞停滞于 G1 期。因此推测：LRP16 可能参与前脂肪细胞的分化。胰岛素抵抗与恶性肿瘤关系密切，一方面多种肿瘤可同时伴有胰岛素抵抗，另一
29、方面胰岛素抵抗又可促进某些肿瘤的发生发展。LRP16 作为一个癌基因，它是否会参与胰岛素抵抗的形成?因此，本研究探讨了 LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化、LRP16 对脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的影响及机制。研究共分为 3 部分： 一、LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化以及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达调控的研究 目的：LRP16 蛋白在 3T3-L1 细胞诱导分化过程中表达量的变化及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达的调控。 方法：(1)经典脂肪细胞诱导方案诱导前脂肪细胞为成熟脂肪细胞，每天(0-8 天)均留
30、取蛋白标本。(2)不同浓度(0，1，10，100 nmol/L)胰岛素刺激脂肪细胞 24 小时，分别留取蛋白标本。(3)Western-Blot 方法检测样本中 LRP16 蛋白的表达量。 结果：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞无表达或极低表达，从诱导的第3、4 天开始，随着脂滴的出现表达量迅速上升到峰值，此后维持在高表达水平。LRP16 蛋白在第 68 天之间表达水平无统计学差异(P0.05)，在余各时段间表达水平均有显著差异(P0.01)。(2)细胞内 LRP16 蛋白表达量与胰岛素作用浓度负相关。LRP16 蛋白在胰岛素各浓度段间的表达水平均有显著差异(P0.01)。 结论：(1)LR
31、P16 蛋白在前脂肪细胞诱导分化过程中存在表达量的变化。(2)胰岛素负调控脂肪细胞 LRP16 蛋白的表达。 二、LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化影响的研究 目的：探讨 LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响及机制。 方法：(1)LRP16 稳定过表达前脂肪细胞株建立：将 LRP16真核表达质粒(pcDNA3.1-LRP16)及对照空载体(pcDNA3.1)分别转染 3T3-L1 前脂肪细胞，抗性筛选(G418)出 LRP16 过表达组细胞株(3T3-16)及对照组细胞株(3T3-3.1)。(2)Western-Blot 方法鉴定 LRP16 过表达前脂肪细胞株成功建立
32、。(3)倒置显微镜观察 LRP16 对前脂肪细胞诱导分化过程形态变化的影响。(4)油红 O 染色后，倒置显微镜观察 LRP16 对脂肪细胞成脂分化的影响。(5)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 组与 3T3-3.1 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBP mRNA表达量。 结果：(1)3T3-16 组细胞株，其 LRP16 蛋白量明显高于 3T3-3.1 组(P0.01)。(2)3T3-16 组细胞的分化滞后于 3T3-3.1 组，着色脂滴明显少于3T3-3.1 组，油红 O 染色定量法比较：两组间 OD 值具有显著差异(P0.01)。(3)3T3-16 组脂肪细胞 PPAR
33、及 C/EBPmRNA 表达量明显低于 3T3-3.1 组(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR 及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 三、LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗影响的研究 目的：探讨 LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及机制。 方法：(1)检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组的脂肪细胞，在基础及胰岛素刺激状态下，对 2-脱氧-3H-D-葡萄糖的摄取率。(2)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量。 结果：(1)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞的
34、基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率均减低(P0.01)。(2)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量明显减低(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 全文结论： 1LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 2LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 3胰岛素下调脂肪细胞中 LRP16 蛋白的表达。 以上研究结果表明，LRP16 可能在脂肪细胞分化及胰
35、岛素抵抗的机制中发挥着十分重要的作用。LRP16 是从健康成人外周血淋巴细胞中克隆的人类基因，它在多种雌激素依赖的肿瘤中高表达。既往研究证明，LRP16 通过上调乳腺癌细胞周期蛋白的表达，促进细胞从 G1 期进入 S 期，最终促进乳腺癌细胞的增殖。前脂肪细胞的分化是以生长抑制为前提的，而生长抑制状态的维持需要将细胞停滞于 G1 期。因此推测：LRP16 可能参与前脂肪细胞的分化。胰岛素抵抗与恶性肿瘤关系密切，一方面多种肿瘤可同时伴有胰岛素抵抗，另一方面胰岛素抵抗又可促进某些肿瘤的发生发展。LRP16 作为一个癌基因，它是否会参与胰岛素抵抗的形成?因此，本研究探讨了 LRP16 蛋白在 3T3-
36、L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化、LRP16 对脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的影响及机制。研究共分为 3 部分： 一、LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化以及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达调控的研究 目的：LRP16 蛋白在 3T3-L1 细胞诱导分化过程中表达量的变化及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达的调控。 方法：(1)经典脂肪细胞诱导方案诱导前脂肪细胞为成熟脂肪细胞，每天(0-8 天)均留取蛋白标本。(2)不同浓度(0，1，10，100 nmol/L)胰岛素刺激脂肪细胞 24 小时，分别留取蛋白标本。(3)Western-Blot 方
37、法检测样本中 LRP16 蛋白的表达量。 结果：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞无表达或极低表达，从诱导的第3、4 天开始，随着脂滴的出现表达量迅速上升到峰值，此后维持在高表达水平。LRP16 蛋白在第 68 天之间表达水平无统计学差异(P0.05)，在余各时段间表达水平均有显著差异(P0.01)。(2)细胞内 LRP16 蛋白表达量与胰岛素作用浓度负相关。LRP16 蛋白在胰岛素各浓度段间的表达水平均有显著差异(P0.01)。 结论：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞诱导分化过程中存在表达量的变化。(2)胰岛素负调控脂肪细胞 LRP16 蛋白的表达。 二、LRP16 对 3T3-L1 前脂
38、肪细胞分化影响的研究 目的：探讨 LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响及机制。 方法：(1)LRP16 稳定过表达前脂肪细胞株建立：将 LRP16真核表达质粒(pcDNA3.1-LRP16)及对照空载体(pcDNA3.1)分别转染 3T3-L1 前脂肪细胞，抗性筛选(G418)出 LRP16 过表达组细胞株(3T3-16)及对照组细胞株(3T3-3.1)。(2)Western-Blot 方法鉴定 LRP16 过表达前脂肪细胞株成功建立。(3)倒置显微镜观察 LRP16 对前脂肪细胞诱导分化过程形态变化的影响。(4)油红 O 染色后，倒置显微镜观察 LRP16 对脂肪细胞成脂分化的
39、影响。(5)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 组与 3T3-3.1 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBP mRNA表达量。 结果：(1)3T3-16 组细胞株，其 LRP16 蛋白量明显高于 3T3-3.1 组(P0.01)。(2)3T3-16 组细胞的分化滞后于 3T3-3.1 组，着色脂滴明显少于3T3-3.1 组，油红 O 染色定量法比较：两组间 OD 值具有显著差异(P0.01)。(3)3T3-16 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBPmRNA 表达量明显低于 3T3-3.1 组(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR 及 C/EBP 的表
40、达，进而抑制脂肪细胞的分化。 三、LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗影响的研究 目的：探讨 LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及机制。 方法：(1)检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组的脂肪细胞，在基础及胰岛素刺激状态下，对 2-脱氧-3H-D-葡萄糖的摄取率。(2)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量。 结果：(1)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率均减低(P0.01)。(2)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量明显减低(P
41、0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 全文结论： 1LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 2LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 3胰岛素下调脂肪细胞中 LRP16 蛋白的表达。 以上研究结果表明，LRP16 可能在脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的机制中发挥着十分重要的作用。LRP16 是从健康成人外周血淋巴细胞中克隆的人类基因，它在多种雌激素依赖的肿瘤中高表达。既往研究证明，LRP
42、16 通过上调乳腺癌细胞周期蛋白的表达，促进细胞从 G1 期进入 S 期，最终促进乳腺癌细胞的增殖。前脂肪细胞的分化是以生长抑制为前提的，而生长抑制状态的维持需要将细胞停滞于 G1 期。因此推测：LRP16 可能参与前脂肪细胞的分化。胰岛素抵抗与恶性肿瘤关系密切，一方面多种肿瘤可同时伴有胰岛素抵抗，另一方面胰岛素抵抗又可促进某些肿瘤的发生发展。LRP16 作为一个癌基因，它是否会参与胰岛素抵抗的形成?因此，本研究探讨了 LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化、LRP16 对脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的影响及机制。研究共分为 3 部分： 一、LRP16 蛋白在 3T
43、3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化以及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达调控的研究 目的：LRP16 蛋白在 3T3-L1 细胞诱导分化过程中表达量的变化及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达的调控。 方法：(1)经典脂肪细胞诱导方案诱导前脂肪细胞为成熟脂肪细胞，每天(0-8 天)均留取蛋白标本。(2)不同浓度(0，1，10，100 nmol/L)胰岛素刺激脂肪细胞 24 小时，分别留取蛋白标本。(3)Western-Blot 方法检测样本中 LRP16 蛋白的表达量。 结果：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞无表达或极低表达，从诱导的第3、4 天开始，随着脂滴的出现表达量迅
44、速上升到峰值，此后维持在高表达水平。LRP16 蛋白在第 68 天之间表达水平无统计学差异(P0.05)，在余各时段间表达水平均有显著差异(P0.01)。(2)细胞内 LRP16 蛋白表达量与胰岛素作用浓度负相关。LRP16 蛋白在胰岛素各浓度段间的表达水平均有显著差异(P0.01)。 结论：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞诱导分化过程中存在表达量的变化。(2)胰岛素负调控脂肪细胞 LRP16 蛋白的表达。 二、LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化影响的研究 目的：探讨 LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响及机制。 方法：(1)LRP16 稳定过表达前脂肪细胞株建立：将
45、 LRP16真核表达质粒(pcDNA3.1-LRP16)及对照空载体(pcDNA3.1)分别转染 3T3-L1 前脂肪细胞，抗性筛选(G418)出 LRP16 过表达组细胞株(3T3-16)及对照组细胞株(3T3-3.1)。(2)Western-Blot 方法鉴定 LRP16 过表达前脂肪细胞株成功建立。(3)倒置显微镜观察 LRP16 对前脂肪细胞诱导分化过程形态变化的影响。(4)油红 O 染色后，倒置显微镜观察 LRP16 对脂肪细胞成脂分化的影响。(5)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 组与 3T3-3.1 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBP mRNA表达量。 结果：
46、(1)3T3-16 组细胞株，其 LRP16 蛋白量明显高于 3T3-3.1 组(P0.01)。(2)3T3-16 组细胞的分化滞后于 3T3-3.1 组，着色脂滴明显少于3T3-3.1 组，油红 O 染色定量法比较：两组间 OD 值具有显著差异(P0.01)。(3)3T3-16 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBPmRNA 表达量明显低于 3T3-3.1 组(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR 及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 三、LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗影响的研究 目的：探讨 LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及机制。 方法：(1
47、)检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组的脂肪细胞，在基础及胰岛素刺激状态下，对 2-脱氧-3H-D-葡萄糖的摄取率。(2)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量。 结果：(1)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率均减低(P0.01)。(2)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量明显减低(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 全文结论： 1LR
48、P16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 2LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率。 3胰岛素下调脂肪细胞中 LRP16 蛋白的表达。 以上研究结果表明，LRP16 可能在脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的机制中发挥着十分重要的作用。LRP16 是从健康成人外周血淋巴细胞中克隆的人类基因，它在多种雌激素依赖的肿瘤中高表达。既往研究证明，LRP16 通过上调乳腺癌细胞周期蛋白的表达，促进细胞从 G1 期进入 S 期，最终促进乳腺癌细胞的增殖。前脂肪细胞的分化是以生长抑制为前提的，而生长抑制
49、状态的维持需要将细胞停滞于 G1 期。因此推测：LRP16 可能参与前脂肪细胞的分化。胰岛素抵抗与恶性肿瘤关系密切，一方面多种肿瘤可同时伴有胰岛素抵抗，另一方面胰岛素抵抗又可促进某些肿瘤的发生发展。LRP16 作为一个癌基因，它是否会参与胰岛素抵抗的形成?因此，本研究探讨了 LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化、LRP16 对脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的影响及机制。研究共分为 3 部分： 一、LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化以及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达调控的研究 目的：LRP16 蛋白在 3T3-L1 细胞诱导分化过程
