1、内科学心血管专业优秀论文 新疆哈萨克族和维吾尔族人群原发性高血压与 ENaC 和 -AR 基因多态性的关联研究关键词：高血压病 哈萨克族 维吾尔族 连锁不平衡 单体型分析 ENaC 基因摘要：目的： 原发性高血压(Essential hypertension；EH)是最常见的危害人类健康的心血管疾病，能引起一系列严重后果。其发病是多种遗传因素和环境因素共同作用的结果，其中遗传因素在高血压的发病机制中起重要作用。随着人类基因组测序的完成，研究与疾病表型相关的基因序列变异已成为医学遗传学的一个主要课题。单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism；SNP)作为第三代
2、遗传标记，具有数量大、分布广的特点，系统地在群体水平上筛查、鉴定 SNP，特别是基因编码区和调控区的 SNP，通过病例组与对照组间的比较和统计学分析，就有可能获得与疾病相关联的 SNP 位点或单体型，这对于阐明某些复杂多基因疾病的遗传机制具有重要意义。本课题对新疆巴里坤地区哈萨克族牧民和吐鲁番地区维吾尔族农民进行了高血压流行病学调查，了解高血压病流行现状并分析其高发因素；同时基于 HapMap 计划中国人群的数据，采用病例一对照研究和标签 SNP(tSNP)方法在新疆地区哈萨克族和维吾尔族人群中分别对上皮细胞钠通道 亚单位基因(Epithelium Natrium Channelgene su
3、bunit；ENaC)和 lt;,2gt;-肾上腺素受体基因(lt;,2gt;-adrenergic receptor；lt;,2gt;-AR)多态进行分析。首先系统筛查两人群中 ENaC 和 lt;,2gt;-AR 基因 SNP 的存在和频率，阐明连锁不平衡模式和单体型分布，同时选择两候选基因的 tSNP，进而在病例一对照中探讨这些 tSNP 及其所构成单体型与高血压的关联：并比较各 SNP 基因型、等位基因和单体型频率在两民族群体中的分布情况，以期阐明这些候选基因与原发性高血压的关系及其在原发性高血压发病机制中的作用，从遗传学角度剖析两群体高血压患病的原因，进一步明确其对更广泛人群高血压疾
4、病发生所起的作用。 方法： (1)采用整群抽取随机抽样的方法对新疆巴里坤县 5 个乡哈萨克族牧民和吐鲁番地区 3 个乡维吾族农民进行了三次流行病学调查，共采集哈族血液标本 1141 例，其中高血压组 703 例，正常对照组 438 例；维族血液标本 894 例，其中高血压组 424 人，正常对照组470 例。 (2)随机选取 40 例无血缘关系的哈萨克族样本，利用 PCR 产物直接测序的方法筛查 aENaC 基因调控区、启动子区、外显子以及部分内含子区域的全部序列变异。计算常见 SNP(少见等位基因频率 MinorAllele Frequency；MAFgt;5)的连锁不平衡系数 D和rlt;
5、#39;2gt;；利用 Haploview 软件选择其中 3 个 SNPs 作为tSNPs，采用 TaqMan 技术和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restrictedfragment long polymorphism：PCR-RFLP)技术分别对入选样本进行 ENaC 基因扩增和基因分型。 (3)基于本实验室前期工作基础，选择目前公认研究较多的 lt;,2gt;-AR 基因编码区Arg16Gly 和 Gln27G1u 两个高频多态位点，应用 TaqMan 技术进行高通量基因分型。 (4)以新疆地区哈萨克族和维吾尔族人群作为研究对象进
6、行群体病例一对照分析研究，分别探讨单个 SNP 位点及其构成的单体型与原发性高血压的相关性，并了解 ENaC 和 lt;,2gt;-AR 基因多态在新疆两民族群体中的分布情况。 (5)借助 spss13.0 软件进行统计学处理。xlt;#39;2gt;检验用于计数资料的关联分析和 Hardy-Weinberg 平衡检验，t 检验用于临床指标的差异性判定，协方差分析用于均数的调整，Logistic 回归分析用于多因素资料中筛查独立患病危险因素及计算优势比(Odds ratio，OR)；同时运用 SHEsis 软件在线分析多个位点之间的连锁不平衡(linkage disequilibrium；LD
7、)关系，Haploview 软件用于单体型模块判定和 tSNP 的选取，应用 phase 软件进行多态位点单体型的构建和分析。 结果： (1)流行病学调查结果显示：巴里坤地区哈萨克族高血压的检出率为61.6：吐鲁番地区维吾尔族高血压的检出率为 47.4，哈萨克族人群的平均收缩压和舒张压均显著高于维吾尔族；两民族人群高血压的患病率随着年龄的增高而明显增加，且超重者和肥胖者血压增高明显多于体重正常者；血浆总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的水平在高血压组和正常对照组间的差异有统计学意义(Plt;0.05)：高血压组男性吸烟率亦明显多于正常对照组。 (2)小样本测序在 ENaC 基因 7kb 范围内
8、共检出 9 个高频 SNPs 位点，分别命名为 G(-947)A、G(-321)A、A(+6)G、G(+49)C、C(+866)T、A334T、C(+20844)T、Af+26622)G 和 T663A，全部与 NCBI dbSNP 公共数据库中报道一致。 (3)从测序检出的 9 个多态位点中选择 3 个 SNPs 作为 tSNPs，可以很好的预测常见单体型和剩余常见 SNP，它们分别是位于启动子区的 G(-947)A、外显子 6 的A334T 和外显子 13 的 T663A；并对这 3 个 tSNPs 进行高通量的扩增与基因分型。(4)ENaC 基因 3 个 SNPs 的基因型频率在两群体中
9、分布均符合 Hardy-Weinberg 平衡；单个位点 SNP 关联分析显示：ENaC 基因 3 个 tSNPs 基因型及等位基因频率分布在哈萨克族及维吾尔族群体高血压组和正常对照组中差异无统计学意义(Pgt;0.05)。 (5)分别对 9 个多态位点做配对连锁不平衡分析，其中只有 G(-947)A 和 G(+49)C、A(+26622)G 和 T663A 位点在哈萨克族群体中均存在着强连锁不平衡，多数位点存在较弱或无连锁不平衡；单体型关联分析结果显示：3 个 tSNPs 共构成 8 种单体型(H18)，单体型总体分布频率在哈萨克族病例组和对照组中的差异有统计学意义(Plt;0.05)，进一
10、步的关联分析表明哈萨克族群体中，H2、H3、H6 和 H7 单体型频率在高血压组和正常对照组的差异有统计学意义(Plt;0.05)：在维吾尔族群体中，除了 H1 和 H3单体型频率在高血压组和正常对照组的差异未达到统计学意义，其余单体型频率在两组中的差异均有统计学意义(Plt;0.05)。 (6)比较 ENaC 基因单体型频率在新疆两个不同民族中的分布，结果发现其分布在哈萨克族与维吾尔族群体中的差异有统计学意义(Plt;0.05)。 (7)应用 TaqMan 技术对lt;,2gt;-AR 基因进行大样本分型后发现：Arg16Gly 多态和Gln27Glu 多态的基因型频率在两群体中分布均符合
11、Hardy-Weinberg 平衡；单个位点关联分析显示：基因型频率及等位基因频率分布在两民族高血压组和正常对照组中差异均无统计学意义(Pgt;0.05)。 (8)对lt;,2gt;-AR 基因两个多态位点做配对连锁不平衡分析，强度 D值在哈萨克族和维吾尔族人群中分别为 0.8 和 0.7，存在着连锁不平衡；进一步做单体型分析后，两位点所构成的 4 种单体型频率分布在两民族高血压组和正常对照组的差异均无统计学意义(Pgt;0.05)。 结论： (1)新疆哈萨克族高血压患病率明显高于维吾尔族，平均收缩压和舒张压在两群体中差异有统计学意义；哈、维两民族高血压的患病率随着年龄的增加而升高，并且高血压
12、的发生均与吸烟、高体重指数、血脂紊乱等心血管病的危险因素密切相关。(2)研究未发现 ENaC 基因单个位点与新疆地区哈萨克族和维吾尔族人群的高血压相关联；而多位点单体型分析结果提示 ENaC 基因单体型结构分布在两民族病例组和对照组中差异均有统计学意义。由于多个位点分析的检验效能更强，因此我们推断在两民族群体中可能有民族特异性疾病易感的单体型或保护性单体型存在，本研究结果支持 ctENaC 基因的基因剂量效应可能存在于单体型中，而不与单个位点直接关联。 (3)ENaC 基因单体型频率在新疆两民族人群中的分布差异有统计学意义，推断该基因多态的分布具有民族特异性，可能与两民族不同发病特点有关。 (
13、4)lt;,2gt;-AR 基因 Arg16Gly和 Gln27Glu 多态及其它们所构成的单体型与新疆地区哈萨克族和维吾尔族人群的高血压患病无直接关联。正文内容目的： 原发性高血压(Essential hypertension；EH)是最常见的危害人类健康的心血管疾病，能引起一系列严重后果。其发病是多种遗传因素和环境因素共同作用的结果，其中遗传因素在高血压的发病机制中起重要作用。随着人类基因组测序的完成，研究与疾病表型相关的基因序列变异已成为医学遗传学的一个主要课题。单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism；SNP)作为第三代遗传标记，具有数量大、分布广的
14、特点，系统地在群体水平上筛查、鉴定 SNP，特别是基因编码区和调控区的 SNP，通过病例组与对照组间的比较和统计学分析，就有可能获得与疾病相关联的 SNP 位点或单体型，这对于阐明某些复杂多基因疾病的遗传机制具有重要意义。本课题对新疆巴里坤地区哈萨克族牧民和吐鲁番地区维吾尔族农民进行了高血压流行病学调查，了解高血压病流行现状并分析其高发因素；同时基于 HapMap 计划中国人群的数据，采用病例一对照研究和标签 SNP(tSNP)方法在新疆地区哈萨克族和维吾尔族人群中分别对上皮细胞钠通道 亚单位基因(Epithelium Natrium Channelgene subunit；ENaC)和 lt
15、;,2gt;-肾上腺素受体基因(lt;,2gt;-adrenergic receptor；lt;,2gt;-AR)多态进行分析。首先系统筛查两人群中 ENaC 和 lt;,2gt;-AR 基因SNP 的存在和频率，阐明连锁不平衡模式和单体型分布，同时选择两候选基因的 tSNP，进而在病例一对照中探讨这些 tSNP 及其所构成单体型与高血压的关联：并比较各 SNP 基因型、等位基因和单体型频率在两民族群体中的分布情况，以期阐明这些候选基因与原发性高血压的关系及其在原发性高血压发病机制中的作用，从遗传学角度剖析两群体高血压患病的原因，进一步明确其对更广泛人群高血压疾病发生所起的作用。 方法： (1
16、)采用整群抽取随机抽样的方法对新疆巴里坤县 5 个乡哈萨克族牧民和吐鲁番地区 3 个乡维吾族农民进行了三次流行病学调查，共采集哈族血液标本 1141 例，其中高血压组 703 例，正常对照组 438 例；维族血液标本 894 例，其中高血压组 424 人，正常对照组 470例。 (2)随机选取 40 例无血缘关系的哈萨克族样本，利用 PCR 产物直接测序的方法筛查 aENaC 基因调控区、启动子区、外显子以及部分内含子区域的全部序列变异。计算常见 SNP(少见等位基因频率 MinorAllele Frequency；MAFgt;5)的连锁不平衡系数 D和rlt;#39;2gt;；利用 Hapl
17、oview 软件选择其中 3 个 SNPs 作为tSNPs，采用 TaqMan 技术和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restrictedfragment long polymorphism：PCR-RFLP)技术分别对入选样本进行 ENaC 基因扩增和基因分型。 (3)基于本实验室前期工作基础，选择目前公认研究较多的 lt;,2gt;-AR 基因编码区Arg16Gly 和 Gln27G1u 两个高频多态位点，应用 TaqMan 技术进行高通量基因分型。 (4)以新疆地区哈萨克族和维吾尔族人群作为研究对象进行群体病例一对照分析研究，分别探
18、讨单个 SNP 位点及其构成的单体型与原发性高血压的相关性，并了解 ENaC 和 lt;,2gt;-AR 基因多态在新疆两民族群体中的分布情况。 (5)借助 spss13.0 软件进行统计学处理。xlt;#39;2gt;检验用于计数资料的关联分析和 Hardy-Weinberg 平衡检验，t 检验用于临床指标的差异性判定，协方差分析用于均数的调整，Logistic 回归分析用于多因素资料中筛查独立患病危险因素及计算优势比(Odds ratio，OR)；同时运用 SHEsis 软件在线分析多个位点之间的连锁不平衡(linkage disequilibrium；LD)关系，Haploview 软件
19、用于单体型模块判定和 tSNP 的选取，应用 phase 软件进行多态位点单体型的构建和分析。 结果： (1)流行病学调查结果显示：巴里坤地区哈萨克族高血压的检出率为61.6：吐鲁番地区维吾尔族高血压的检出率为 47.4，哈萨克族人群的平均收缩压和舒张压均显著高于维吾尔族；两民族人群高血压的患病率随着年龄的增高而明显增加，且超重者和肥胖者血压增高明显多于体重正常者；血浆总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的水平在高血压组和正常对照组间的差异有统计学意义(Plt;0.05)：高血压组男性吸烟率亦明显多于正常对照组。 (2)小样本测序在 ENaC 基因 7kb 范围内共检出 9 个高频 SNPs 位
20、点，分别命名为 G(-947)A、G(-321)A、A(+6)G、G(+49)C、C(+866)T、A334T、C(+20844)T、Af+26622)G 和 T663A，全部与 NCBI dbSNP 公共数据库中报道一致。 (3)从测序检出的 9 个多态位点中选择 3 个 SNPs 作为 tSNPs，可以很好的预测常见单体型和剩余常见 SNP，它们分别是位于启动子区的 G(-947)A、外显子 6 的A334T 和外显子 13 的 T663A；并对这 3 个 tSNPs 进行高通量的扩增与基因分型。(4)ENaC 基因 3 个 SNPs 的基因型频率在两群体中分布均符合 Hardy-Wein
21、berg 平衡；单个位点 SNP 关联分析显示：ENaC 基因 3 个 tSNPs 基因型及等位基因频率分布在哈萨克族及维吾尔族群体高血压组和正常对照组中差异无统计学意义(Pgt;0.05)。 (5)分别对 9 个多态位点做配对连锁不平衡分析，其中只有 G(-947)A 和 G(+49)C、A(+26622)G 和 T663A 位点在哈萨克族群体中均存在着强连锁不平衡，多数位点存在较弱或无连锁不平衡；单体型关联分析结果显示：3 个 tSNPs 共构成 8 种单体型(H18)，单体型总体分布频率在哈萨克族病例组和对照组中的差异有统计学意义(Plt;0.05)，进一步的关联分析表明哈萨克族群体中，
22、H2、H3、H6 和 H7 单体型频率在高血压组和正常对照组的差异有统计学意义(Plt;0.05)：在维吾尔族群体中，除了 H1 和 H3单体型频率在高血压组和正常对照组的差异未达到统计学意义，其余单体型频率在两组中的差异均有统计学意义(Plt;0.05)。 (6)比较 ENaC 基因单体型频率在新疆两个不同民族中的分布，结果发现其分布在哈萨克族与维吾尔族群体中的差异有统计学意义(Plt;0.05)。 (7)应用 TaqMan 技术对lt;,2gt;-AR 基因进行大样本分型后发现：Arg16Gly 多态和Gln27Glu 多态的基因型频率在两群体中分布均符合 Hardy-Weinberg 平
23、衡；单个位点关联分析显示：基因型频率及等位基因频率分布在两民族高血压组和正常对照组中差异均无统计学意义(Pgt;0.05)。 (8)对lt;,2gt;-AR 基因两个多态位点做配对连锁不平衡分析，强度 D值在哈萨克族和维吾尔族人群中分别为 0.8 和 0.7，存在着连锁不平衡；进一步做单体型分析后，两位点所构成的 4 种单体型频率分布在两民族高血压组和正常对照组的差异均无统计学意义(Pgt;0.05)。 结论： (1)新疆哈萨克族高血压患病率明显高于维吾尔族，平均收缩压和舒张压在两群体中差异有统计学意义；哈、维两民族高血压的患病率随着年龄的增加而升高，并且高血压的发生均与吸烟、高体重指数、血脂
24、紊乱等心血管病的危险因素密切相关。(2)研究未发现 ENaC 基因单个位点与新疆地区哈萨克族和维吾尔族人群的高血压相关联；而多位点单体型分析结果提示 ENaC 基因单体型结构分布在两民族病例组和对照组中差异均有统计学意义。由于多个位点分析的检验效能更强，因此我们推断在两民族群体中可能有民族特异性疾病易感的单体型或保护性单体型存在，本研究结果支持 ctENaC 基因的基因剂量效应可能存在于单体型中，而不与单个位点直接关联。 (3)ENaC 基因单体型频率在新疆两民族人群中的分布差异有统计学意义，推断该基因多态的分布具有民族特异性，可能与两民族不同发病特点有关。 (4)lt;,2gt;-AR 基因
25、 Arg16Gly和 Gln27Glu 多态及其它们所构成的单体型与新疆地区哈萨克族和维吾尔族人群的高血压患病无直接关联。目的： 原发性高血压(Essential hypertension；EH)是最常见的危害人类健康的心血管疾病，能引起一系列严重后果。其发病是多种遗传因素和环境因特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstreamendobj2x
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