1、内科学(血液)专业毕业论文 精品论文 Dickkopf1 在多发性骨髓瘤中的作用关键词：多发性骨髓瘤 溶骨性病变 病理分期 基质细胞 真核细胞 流式细胞术摘要：第一部分 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床研究 目的：研究 MM 患者骨髓上清液及血清 Dickkopf1(DKK1)水平，及其与骨髓瘤分期、溶骨性病变的关系，以及不同化疗方案对 DKK1 的影响及与疗效的关系，探讨 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床作用。 方法：采用双抗体夹心酶标免疫分析法(ELISA)检测 80 例初诊 MM 患者、10 例 MGUS 患者及 20 例对照骨髓上清液及血清 DKK1 水平，以及检测 136 例接受硼替
2、佐米+地塞米松或沙利度胺+地塞米松治疗的 MM 患者化疗前后血清 DKK1 水平。 结论：MM 患者 DKK1 水平明显高于 MGUS 患者及对照组，而且 DKK1 水平与骨髓瘤分期及溶骨性病变密切相关，能反映溶骨性病变的程度和范围。DKK1 水平在化疗有效时明显下降，但与化疗方案有关，硼替佐米能使DKK1 水平明显下降，而沙利度胺及地塞米松却无此作用。 第二部分骨髓瘤细胞与基质细胞 DKK1 相关受体 LRP5/6 及 Kremen1/2 基因转录水平的研究 目的：比较骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞LRP5/6、Kremen1/2 及 -cateninm
3、RNA 水平，研究骨髓瘤细胞或重组 DKK1 蛋白对正常人基质细胞上述基因 mRNA 水平的影响，以探讨 DKK1 在多发性骨髓瘤中的作用。 方法：采用 Westernblot 及 ELISA 方法，检测骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、骨髓基质细胞及细胞培养液 DKK1 蛋白表达情况，以及Realtime-PCR 方法，检测骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人骨髓基质细胞 LRP5/6、Kremen1/2 及 -cateninmRNA 水平以及骨髓瘤细胞或重组 DKK1 蛋白与正常人骨髓基质细胞共培养时上述基因 mRNA 水平。 结论：骨髓瘤细胞、MM 患者及
4、正常人基质细胞之间 LRP5/6、Kremen1/2 及 -catenin基因转录水平存在差异，而骨髓瘤细胞分泌的 DKK1 可能是造成 MM 患者基质细胞上述基因变化的重要因素。 第三部分 DKK1 的真核表达、纯化及功能测定 目的：表达和纯化 DKK1 蛋白，研究骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体表达情况，并探讨 DKK1 对骨髓瘤细胞及基质细胞效应不同的可能机制。 方法：利用脂质体介导 pcDNA3.1(-)-DKK1 质粒瞬时转染 293T 细胞，使用westernblot 方法鉴定上清中的表达蛋白，使用 Ni-AgroseHis 标签蛋白纯化试剂盒，纯化融合 His 标签的 D
5、KK1 蛋白。利用流式细胞术(FCM)，对 CD138+骨髓瘤细胞、MM 患者基质细胞及健康志愿者基质细胞表面 DKK1 相关受体表达情况进行同步分析比较。胞 LRP5/6 和 Kremen1/2mRNA 水平显著高于正常人基质细胞和 CD138+原代骨髓瘤细胞。CD138+原代骨髓瘤细胞 -cateninmRNA 水平高于MM 患者及正常人基质细胞。无论使用 transwell 小室或者直接接触法进行骨髓瘤细胞系 RPMI-8226、NCI-H929 与正常人基质细胞共培养 48h 及72h，LRP5/6、Kremen1/2mRNA 水平明显增加，-cateninmRNA 水平下降，但24h
6、 变化不明显。72h 与 48h 相比，上述基因 mRNA 水平变化更加明显。重组DKK1 蛋白浓度为 100ng/ml 及 300ng/ml 时，与基质细胞共培养 48h 及 72h 后LRP5/6、Kremenl/2 及 -cateninmRNA 水平无明显变化。重组 DKK1 蛋白浓度为 500ng/ml 时，培养 48hLRP5/6mRNA 水平有轻微上升(P0.05)，Kremenl/2mRNA 水平有所上升(P0.05)，及 -cateninmRNA 水平略有下降(P0.05)；培养 72hLRP5mRNA 水平有所上升(P0.05)，LRP6mRNA 水平无明显变化(P0.05)
7、；Kremen1/2mRNA 水平有所上升(P0.05)，及 -cateninmRNA水平明显下降(P0.05)。重组 DKK1 蛋白浓度为 700ng/ml 时，培养 48h 及72hLRP5/6、Kremen1/2mRNA 水平明显上升(P0.05)，及 -cateninmRNA 水平明显下降(P0.05)。 结论：骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞之间LRP5/6、Kremen1/2 及 -catenin 基因转录水平存在差异，而骨髓瘤细胞分泌的 DKK1 可能是造成 MM 患者基质细胞上述基因变化的重要因素。 第三部分DKK1 的真核表达、纯化及功能测定 目的：表达和纯化 DKK1
8、 蛋白，研究骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体表达情况，并探讨 DKK1 对骨髓瘤细胞及基质细胞效应不同的可能机制。 方法：利用脂质体介导 pcDNA3.1(-)-DKK1 质粒瞬时转染 293T 细胞，使用 westernblot 方法鉴定上清中的表达蛋白，使用 Ni-AgroseHis 标签蛋白纯化试剂盒，纯化融合 His 标签的 DKK1 蛋白。利用流式细胞术(FCM)，对 CD138+骨髓瘤细胞、删患者基质细胞及健康志愿者基质细胞表面 DKK1 相关受体表达情况进行同步分析比较。 结论：脂质体介导的质粒pcDNA3.1(-)-DKK1 体外转染效率较高，能表达有活性的 DKK1
9、蛋白，可以与骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体特异性结合。骨髓瘤细胞、基质细胞之间DKK1 相关受体蛋白表达量不同。正文内容第一部分 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床研究 目的：研究 MM 患者骨髓上清液及血清 Dickkopf1(DKK1)水平，及其与骨髓瘤分期、溶骨性病变的关系，以及不同化疗方案对 DKK1 的影响及与疗效的关系，探讨 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床作用。 方法：采用双抗体夹心酶标免疫分析法(ELISA)检测 80 例初诊 MM 患者、10 例 MGUS 患者及 20 例对照骨髓上清液及血清 DKK1 水平，以及检测 136 例接受硼替佐米+地塞米松或沙利度胺+地塞
10、米松治疗的 MM 患者化疗前后血清 DKK1 水平。 结论：MM 患者 DKK1 水平明显高于 MGUS 患者及对照组，而且 DKK1 水平与骨髓瘤分期及溶骨性病变密切相关，能反映溶骨性病变的程度和范围。DKK1 水平在化疗有效时明显下降，但与化疗方案有关，硼替佐米能使DKK1 水平明显下降，而沙利度胺及地塞米松却无此作用。 第二部分骨髓瘤细胞与基质细胞 DKK1 相关受体 LRP5/6 及 Kremen1/2 基因转录水平的研究 目的：比较骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞LRP5/6、Kremen1/2 及 -cateninmRNA 水平，研究骨髓瘤细胞或
11、重组 DKK1 蛋白对正常人基质细胞上述基因 mRNA 水平的影响，以探讨 DKK1 在多发性骨髓瘤中的作用。 方法：采用 Westernblot 及 ELISA 方法，检测骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、骨髓基质细胞及细胞培养液 DKK1 蛋白表达情况，以及Realtime-PCR 方法，检测骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人骨髓基质细胞 LRP5/6、Kremen1/2 及 -cateninmRNA 水平以及骨髓瘤细胞或重组 DKK1 蛋白与正常人骨髓基质细胞共培养时上述基因 mRNA 水平。 结论：骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞之间 LRP5/
12、6、Kremen1/2 及 -catenin基因转录水平存在差异，而骨髓瘤细胞分泌的 DKK1 可能是造成 MM 患者基质细胞上述基因变化的重要因素。 第三部分 DKK1 的真核表达、纯化及功能测定 目的：表达和纯化 DKK1 蛋白，研究骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体表达情况，并探讨 DKK1 对骨髓瘤细胞及基质细胞效应不同的可能机制。 方法：利用脂质体介导 pcDNA3.1(-)-DKK1 质粒瞬时转染 293T 细胞，使用westernblot 方法鉴定上清中的表达蛋白，使用 Ni-AgroseHis 标签蛋白纯化试剂盒，纯化融合 His 标签的 DKK1 蛋白。利用流式细胞术(
13、FCM)，对 CD138+骨髓瘤细胞、MM 患者基质细胞及健康志愿者基质细胞表面 DKK1 相关受体表达情况进行同步分析比较。胞 LRP5/6 和 Kremen1/2mRNA 水平显著高于正常人基质细胞和 CD138+原代骨髓瘤细胞。CD138+原代骨髓瘤细胞 -cateninmRNA 水平高于MM 患者及正常人基质细胞。无论使用 transwell 小室或者直接接触法进行骨髓瘤细胞系 RPMI-8226、NCI-H929 与正常人基质细胞共培养 48h 及72h，LRP5/6、Kremen1/2mRNA 水平明显增加，-cateninmRNA 水平下降，但24h 变化不明显。72h 与 48
14、h 相比，上述基因 mRNA 水平变化更加明显。重组DKK1 蛋白浓度为 100ng/ml 及 300ng/ml 时，与基质细胞共培养 48h 及 72h 后LRP5/6、Kremenl/2 及 -cateninmRNA 水平无明显变化。重组 DKK1 蛋白浓度为 500ng/ml 时，培养 48hLRP5/6mRNA 水平有轻微上升(P0.05)，Kremenl/2mRNA 水平有所上升(P0.05)，及 -cateninmRNA 水平略有下降(P0.05)；培养 72hLRP5mRNA 水平有所上升(P0.05)，LRP6mRNA 水平无明显变化(P0.05)；Kremen1/2mRNA
15、水平有所上升(P0.05)，及 -cateninmRNA水平明显下降(P0.05)。重组 DKK1 蛋白浓度为 700ng/ml 时，培养 48h 及72hLRP5/6、Kremen1/2mRNA 水平明显上升(P0.05)，及 -cateninmRNA 水平明显下降(P0.05)。 结论：骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞之间LRP5/6、Kremen1/2 及 -catenin 基因转录水平存在差异，而骨髓瘤细胞分泌的 DKK1 可能是造成 MM 患者基质细胞上述基因变化的重要因素。 第三部分DKK1 的真核表达、纯化及功能测定 目的：表达和纯化 DKK1 蛋白，研究骨髓瘤细胞及基质细
16、胞 DKK1 相关受体表达情况，并探讨 DKK1 对骨髓瘤细胞及基质细胞效应不同的可能机制。 方法：利用脂质体介导 pcDNA3.1(-)-DKK1 质粒瞬时转染 293T 细胞，使用 westernblot 方法鉴定上清中的表达蛋白，使用 Ni-AgroseHis 标签蛋白纯化试剂盒，纯化融合 His 标签的 DKK1 蛋白。利用流式细胞术(FCM)，对 CD138+骨髓瘤细胞、删患者基质细胞及健康志愿者基质细胞表面 DKK1 相关受体表达情况进行同步分析比较。 结论：脂质体介导的质粒pcDNA3.1(-)-DKK1 体外转染效率较高，能表达有活性的 DKK1 蛋白，可以与骨髓瘤细胞及基质细
17、胞 DKK1 相关受体特异性结合。骨髓瘤细胞、基质细胞之间DKK1 相关受体蛋白表达量不同。第一部分 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床研究 目的：研究 MM 患者骨髓上清液及血清 Dickkopf1(DKK1)水平，及其与骨髓瘤分期、溶骨性病变的关系，以及不同化疗方案对 DKK1 的影响及与疗效的关系，探讨 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床作用。 方法：采用双抗体夹心酶标免疫分析法(ELISA)检测 80 例初诊MM 患者、10 例 MGUS 患者及 20 例对照骨髓上清液及血清 DKK1 水平，以及检测136 例接受硼替佐米+地塞米松或沙利度胺+地塞米松治疗的 MM 患者化疗前后血清 DKK
18、1 水平。 结论：MM 患者 DKK1 水平明显高于 MGUS 患者及对照组，而且DKK1 水平与骨髓瘤分期及溶骨性病变密切相关，能反映溶骨性病变的程度和范围。DKK1 水平在化疗有效时明显下降，但与化疗方案有关，硼替佐米能使 DKK1水平明显下降，而沙利度胺及地塞米松却无此作用。 第二部分骨髓瘤细胞与基质细胞 DKK1 相关受体 LRP5/6 及 Kremen1/2 基因转录水平的研究 目的：比较骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞LRP5/6、Kremen1/2 及 -cateninmRNA 水平，研究骨髓瘤细胞或重组 DKK1 蛋白对正常人基质细胞上述基因
19、 mRNA 水平的影响，以探讨 DKK1 在多发性骨髓瘤中的作用。 方法：采用 Westernblot 及 ELISA 方法，检测骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、骨髓基质细胞及细胞培养液 DKK1 蛋白表达情况，以及Realtime-PCR 方法，检测骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人骨髓基质细胞 LRP5/6、Kremen1/2 及 -cateninmRNA 水平以及骨髓瘤细胞或重组 DKK1 蛋白与正常人骨髓基质细胞共培养时上述基因 mRNA 水平。 结论：骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞之间 LRP5/6、Kremen1/2 及 -catenin
20、基因转录水平存在差异，而骨髓瘤细胞分泌的 DKK1 可能是造成 MM 患者基质细胞上述基因变化的重要因素。 第三部分 DKK1 的真核表达、纯化及功能测定 目的：表达和纯化 DKK1 蛋白，研究骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体表达情况，并探讨 DKK1 对骨髓瘤细胞及基质细胞效应不同的可能机制。 方法：利用脂质体介导 pcDNA3.1(-)-DKK1 质粒瞬时转染 293T 细胞，使用westernblot 方法鉴定上清中的表达蛋白，使用 Ni-AgroseHis 标签蛋白纯化试剂盒，纯化融合 His 标签的 DKK1 蛋白。利用流式细胞术(FCM)，对 CD138+骨髓瘤细胞、MM
21、患者基质细胞及健康志愿者基质细胞表面 DKK1 相关受体表达情况进行同步分析比较。胞 LRP5/6 和 Kremen1/2mRNA 水平显著高于正常人基质细胞和 CD138+原代骨髓瘤细胞。CD138+原代骨髓瘤细胞 -cateninmRNA 水平高于MM 患者及正常人基质细胞。无论使用 transwell 小室或者直接接触法进行骨髓瘤细胞系 RPMI-8226、NCI-H929 与正常人基质细胞共培养 48h 及72h，LRP5/6、Kremen1/2mRNA 水平明显增加，-cateninmRNA 水平下降，但24h 变化不明显。72h 与 48h 相比，上述基因 mRNA 水平变化更加明
22、显。重组DKK1 蛋白浓度为 100ng/ml 及 300ng/ml 时，与基质细胞共培养 48h 及 72h 后LRP5/6、Kremenl/2 及 -cateninmRNA 水平无明显变化。重组 DKK1 蛋白浓度为 500ng/ml 时，培养 48hLRP5/6mRNA 水平有轻微上升(P0.05)，Kremenl/2mRNA 水平有所上升(P0.05)，及 -cateninmRNA 水平略有下降(P0.05)；培养 72hLRP5mRNA 水平有所上升(P0.05)，LRP6mRNA 水平无明显变化(P0.05)；Kremen1/2mRNA 水平有所上升(P0.05)，及 -caten
23、inmRNA水平明显下降(P0.05)。重组 DKK1 蛋白浓度为 700ng/ml 时，培养 48h 及72hLRP5/6、Kremen1/2mRNA 水平明显上升(P0.05)，及 -cateninmRNA 水平明显下降(P0.05)。 结论：骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞之间LRP5/6、Kremen1/2 及 -catenin 基因转录水平存在差异，而骨髓瘤细胞分泌的 DKK1 可能是造成 MM 患者基质细胞上述基因变化的重要因素。 第三部分DKK1 的真核表达、纯化及功能测定 目的：表达和纯化 DKK1 蛋白，研究骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体表达情况，并探讨 DK
24、K1 对骨髓瘤细胞及基质细胞效应不同的可能机制。 方法：利用脂质体介导 pcDNA3.1(-)-DKK1 质粒瞬时转染 293T 细胞，使用 westernblot 方法鉴定上清中的表达蛋白，使用 Ni-AgroseHis 标签蛋白纯化试剂盒，纯化融合 His 标签的 DKK1 蛋白。利用流式细胞术(FCM)，对 CD138+骨髓瘤细胞、删患者基质细胞及健康志愿者基质细胞表面 DKK1 相关受体表达情况进行同步分析比较。 结论：脂质体介导的质粒pcDNA3.1(-)-DKK1 体外转染效率较高，能表达有活性的 DKK1 蛋白，可以与骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体特异性结合。骨髓瘤细胞
25、、基质细胞之间DKK1 相关受体蛋白表达量不同。第一部分 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床研究 目的：研究 MM 患者骨髓上清液及血清 Dickkopf1(DKK1)水平，及其与骨髓瘤分期、溶骨性病变的关系，以及不同化疗方案对 DKK1 的影响及与疗效的关系，探讨 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床作用。 方法：采用双抗体夹心酶标免疫分析法(ELISA)检测 80 例初诊MM 患者、10 例 MGUS 患者及 20 例对照骨髓上清液及血清 DKK1 水平，以及检测136 例接受硼替佐米+地塞米松或沙利度胺+地塞米松治疗的 MM 患者化疗前后血清 DKK1 水平。 结论：MM 患者 DKK1 水平
26、明显高于 MGUS 患者及对照组，而且DKK1 水平与骨髓瘤分期及溶骨性病变密切相关，能反映溶骨性病变的程度和范围。DKK1 水平在化疗有效时明显下降，但与化疗方案有关，硼替佐米能使 DKK1水平明显下降，而沙利度胺及地塞米松却无此作用。 第二部分骨髓瘤细胞与基质细胞 DKK1 相关受体 LRP5/6 及 Kremen1/2 基因转录水平的研究 目的：比较骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞LRP5/6、Kremen1/2 及 -cateninmRNA 水平，研究骨髓瘤细胞或重组 DKK1 蛋白对正常人基质细胞上述基因 mRNA 水平的影响，以探讨 DKK1 在
27、多发性骨髓瘤中的作用。 方法：采用 Westernblot 及 ELISA 方法，检测骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、骨髓基质细胞及细胞培养液 DKK1 蛋白表达情况，以及Realtime-PCR 方法，检测骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人骨髓基质细胞 LRP5/6、Kremen1/2 及 -cateninmRNA 水平以及骨髓瘤细胞或重组 DKK1 蛋白与正常人骨髓基质细胞共培养时上述基因 mRNA 水平。 结论：骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞之间 LRP5/6、Kremen1/2 及 -catenin基因转录水平存在差异，而骨髓瘤细胞分泌的 D
28、KK1 可能是造成 MM 患者基质细胞上述基因变化的重要因素。 第三部分 DKK1 的真核表达、纯化及功能测定 目的：表达和纯化 DKK1 蛋白，研究骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体表达情况，并探讨 DKK1 对骨髓瘤细胞及基质细胞效应不同的可能机制。 方法：利用脂质体介导 pcDNA3.1(-)-DKK1 质粒瞬时转染 293T 细胞，使用westernblot 方法鉴定上清中的表达蛋白，使用 Ni-AgroseHis 标签蛋白纯化试剂盒，纯化融合 His 标签的 DKK1 蛋白。利用流式细胞术(FCM)，对 CD138+骨髓瘤细胞、MM 患者基质细胞及健康志愿者基质细胞表面 DKK
29、1 相关受体表达情况进行同步分析比较。胞 LRP5/6 和 Kremen1/2mRNA 水平显著高于正常人基质细胞和 CD138+原代骨髓瘤细胞。CD138+原代骨髓瘤细胞 -cateninmRNA 水平高于MM 患者及正常人基质细胞。无论使用 transwell 小室或者直接接触法进行骨髓瘤细胞系 RPMI-8226、NCI-H929 与正常人基质细胞共培养 48h 及72h，LRP5/6、Kremen1/2mRNA 水平明显增加，-cateninmRNA 水平下降，但24h 变化不明显。72h 与 48h 相比，上述基因 mRNA 水平变化更加明显。重组DKK1 蛋白浓度为 100ng/m
30、l 及 300ng/ml 时，与基质细胞共培养 48h 及 72h 后LRP5/6、Kremenl/2 及 -cateninmRNA 水平无明显变化。重组 DKK1 蛋白浓度为 500ng/ml 时，培养 48hLRP5/6mRNA 水平有轻微上升(P0.05)，Kremenl/2mRNA 水平有所上升(P0.05)，及 -cateninmRNA 水平略有下降(P0.05)；培养 72hLRP5mRNA 水平有所上升(P0.05)，LRP6mRNA 水平无明显变化(P0.05)；Kremen1/2mRNA 水平有所上升(P0.05)，及 -cateninmRNA水平明显下降(P0.05)。重组
31、 DKK1 蛋白浓度为 700ng/ml 时，培养 48h 及72hLRP5/6、Kremen1/2mRNA 水平明显上升(P0.05)，及 -cateninmRNA 水平明显下降(P0.05)。 结论：骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞之间LRP5/6、Kremen1/2 及 -catenin 基因转录水平存在差异，而骨髓瘤细胞分泌的 DKK1 可能是造成 MM 患者基质细胞上述基因变化的重要因素。 第三部分DKK1 的真核表达、纯化及功能测定 目的：表达和纯化 DKK1 蛋白，研究骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体表达情况，并探讨 DKK1 对骨髓瘤细胞及基质细胞效应不同的可能机
32、制。 方法：利用脂质体介导 pcDNA3.1(-)-DKK1 质粒瞬时转染 293T 细胞，使用 westernblot 方法鉴定上清中的表达蛋白，使用 Ni-AgroseHis 标签蛋白纯化试剂盒，纯化融合 His 标签的 DKK1 蛋白。利用流式细胞术(FCM)，对 CD138+骨髓瘤细胞、删患者基质细胞及健康志愿者基质细胞表面 DKK1 相关受体表达情况进行同步分析比较。 结论：脂质体介导的质粒pcDNA3.1(-)-DKK1 体外转染效率较高，能表达有活性的 DKK1 蛋白，可以与骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体特异性结合。骨髓瘤细胞、基质细胞之间DKK1 相关受体蛋白表达量不
33、同。第一部分 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床研究 目的：研究 MM 患者骨髓上清液及血清 Dickkopf1(DKK1)水平，及其与骨髓瘤分期、溶骨性病变的关系，以及不同化疗方案对 DKK1 的影响及与疗效的关系，探讨 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床作用。 方法：采用双抗体夹心酶标免疫分析法(ELISA)检测 80 例初诊MM 患者、10 例 MGUS 患者及 20 例对照骨髓上清液及血清 DKK1 水平，以及检测136 例接受硼替佐米+地塞米松或沙利度胺+地塞米松治疗的 MM 患者化疗前后血清 DKK1 水平。 结论：MM 患者 DKK1 水平明显高于 MGUS 患者及对照组，而且DKK
34、1 水平与骨髓瘤分期及溶骨性病变密切相关，能反映溶骨性病变的程度和范围。DKK1 水平在化疗有效时明显下降，但与化疗方案有关，硼替佐米能使 DKK1水平明显下降，而沙利度胺及地塞米松却无此作用。 第二部分骨髓瘤细胞与基质细胞 DKK1 相关受体 LRP5/6 及 Kremen1/2 基因转录水平的研究 目的：比较骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞LRP5/6、Kremen1/2 及 -cateninmRNA 水平，研究骨髓瘤细胞或重组 DKK1 蛋白对正常人基质细胞上述基因 mRNA 水平的影响，以探讨 DKK1 在多发性骨髓瘤中的作用。 方法：采用 West
35、ernblot 及 ELISA 方法，检测骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、骨髓基质细胞及细胞培养液 DKK1 蛋白表达情况，以及Realtime-PCR 方法，检测骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人骨髓基质细胞 LRP5/6、Kremen1/2 及 -cateninmRNA 水平以及骨髓瘤细胞或重组 DKK1 蛋白与正常人骨髓基质细胞共培养时上述基因 mRNA 水平。 结论：骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞之间 LRP5/6、Kremen1/2 及 -catenin基因转录水平存在差异，而骨髓瘤细胞分泌的 DKK1 可能是造成 MM 患者基质细胞上述基
36、因变化的重要因素。 第三部分 DKK1 的真核表达、纯化及功能测定 目的：表达和纯化 DKK1 蛋白，研究骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体表达情况，并探讨 DKK1 对骨髓瘤细胞及基质细胞效应不同的可能机制。 方法：利用脂质体介导 pcDNA3.1(-)-DKK1 质粒瞬时转染 293T 细胞，使用westernblot 方法鉴定上清中的表达蛋白，使用 Ni-AgroseHis 标签蛋白纯化试剂盒，纯化融合 His 标签的 DKK1 蛋白。利用流式细胞术(FCM)，对 CD138+骨髓瘤细胞、MM 患者基质细胞及健康志愿者基质细胞表面 DKK1 相关受体表达情况进行同步分析比较。胞 L
37、RP5/6 和 Kremen1/2mRNA 水平显著高于正常人基质细胞和 CD138+原代骨髓瘤细胞。CD138+原代骨髓瘤细胞 -cateninmRNA 水平高于MM 患者及正常人基质细胞。无论使用 transwell 小室或者直接接触法进行骨髓瘤细胞系 RPMI-8226、NCI-H929 与正常人基质细胞共培养 48h 及72h，LRP5/6、Kremen1/2mRNA 水平明显增加，-cateninmRNA 水平下降，但24h 变化不明显。72h 与 48h 相比，上述基因 mRNA 水平变化更加明显。重组DKK1 蛋白浓度为 100ng/ml 及 300ng/ml 时，与基质细胞共培
38、养 48h 及 72h 后LRP5/6、Kremenl/2 及 -cateninmRNA 水平无明显变化。重组 DKK1 蛋白浓度为 500ng/ml 时，培养 48hLRP5/6mRNA 水平有轻微上升(P0.05)，Kremenl/2mRNA 水平有所上升(P0.05)，及 -cateninmRNA 水平略有下降(P0.05)；培养 72hLRP5mRNA 水平有所上升(P0.05)，LRP6mRNA 水平无明显变化(P0.05)；Kremen1/2mRNA 水平有所上升(P0.05)，及 -cateninmRNA水平明显下降(P0.05)。重组 DKK1 蛋白浓度为 700ng/ml 时
39、，培养 48h 及72hLRP5/6、Kremen1/2mRNA 水平明显上升(P0.05)，及 -cateninmRNA 水平明显下降(P0.05)。 结论：骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞之间LRP5/6、Kremen1/2 及 -catenin 基因转录水平存在差异，而骨髓瘤细胞分泌的 DKK1 可能是造成 MM 患者基质细胞上述基因变化的重要因素。 第三部分DKK1 的真核表达、纯化及功能测定 目的：表达和纯化 DKK1 蛋白，研究骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体表达情况，并探讨 DKK1 对骨髓瘤细胞及基质细胞效应不同的可能机制。 方法：利用脂质体介导 pcDNA3.1
40、(-)-DKK1 质粒瞬时转染 293T 细胞，使用 westernblot 方法鉴定上清中的表达蛋白，使用 Ni-AgroseHis 标签蛋白纯化试剂盒，纯化融合 His 标签的 DKK1 蛋白。利用流式细胞术(FCM)，对 CD138+骨髓瘤细胞、删患者基质细胞及健康志愿者基质细胞表面 DKK1 相关受体表达情况进行同步分析比较。 结论：脂质体介导的质粒pcDNA3.1(-)-DKK1 体外转染效率较高，能表达有活性的 DKK1 蛋白，可以与骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体特异性结合。骨髓瘤细胞、基质细胞之间DKK1 相关受体蛋白表达量不同。第一部分 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临
41、床研究 目的：研究 MM 患者骨髓上清液及血清 Dickkopf1(DKK1)水平，及其与骨髓瘤分期、溶骨性病变的关系，以及不同化疗方案对 DKK1 的影响及与疗效的关系，探讨 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床作用。 方法：采用双抗体夹心酶标免疫分析法(ELISA)检测 80 例初诊MM 患者、10 例 MGUS 患者及 20 例对照骨髓上清液及血清 DKK1 水平，以及检测136 例接受硼替佐米+地塞米松或沙利度胺+地塞米松治疗的 MM 患者化疗前后血清 DKK1 水平。 结论：MM 患者 DKK1 水平明显高于 MGUS 患者及对照组，而且DKK1 水平与骨髓瘤分期及溶骨性病变密切相关，能
42、反映溶骨性病变的程度和范围。DKK1 水平在化疗有效时明显下降，但与化疗方案有关，硼替佐米能使 DKK1水平明显下降，而沙利度胺及地塞米松却无此作用。 第二部分骨髓瘤细胞与基质细胞 DKK1 相关受体 LRP5/6 及 Kremen1/2 基因转录水平的研究 目的：比较骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞LRP5/6、Kremen1/2 及 -cateninmRNA 水平，研究骨髓瘤细胞或重组 DKK1 蛋白对正常人基质细胞上述基因 mRNA 水平的影响，以探讨 DKK1 在多发性骨髓瘤中的作用。 方法：采用 Westernblot 及 ELISA 方法，检测骨
43、髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、骨髓基质细胞及细胞培养液 DKK1 蛋白表达情况，以及Realtime-PCR 方法，检测骨髓瘤细胞系、CD138+原代骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人骨髓基质细胞 LRP5/6、Kremen1/2 及 -cateninmRNA 水平以及骨髓瘤细胞或重组 DKK1 蛋白与正常人骨髓基质细胞共培养时上述基因 mRNA 水平。 结论：骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞之间 LRP5/6、Kremen1/2 及 -catenin基因转录水平存在差异，而骨髓瘤细胞分泌的 DKK1 可能是造成 MM 患者基质细胞上述基因变化的重要因素。 第三部分 DKK1 的真
44、核表达、纯化及功能测定 目的：表达和纯化 DKK1 蛋白，研究骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体表达情况，并探讨 DKK1 对骨髓瘤细胞及基质细胞效应不同的可能机制。 方法：利用脂质体介导 pcDNA3.1(-)-DKK1 质粒瞬时转染 293T 细胞，使用westernblot 方法鉴定上清中的表达蛋白，使用 Ni-AgroseHis 标签蛋白纯化试剂盒，纯化融合 His 标签的 DKK1 蛋白。利用流式细胞术(FCM)，对 CD138+骨髓瘤细胞、MM 患者基质细胞及健康志愿者基质细胞表面 DKK1 相关受体表达情况进行同步分析比较。胞 LRP5/6 和 Kremen1/2mRNA
45、水平显著高于正常人基质细胞和 CD138+原代骨髓瘤细胞。CD138+原代骨髓瘤细胞 -cateninmRNA 水平高于MM 患者及正常人基质细胞。无论使用 transwell 小室或者直接接触法进行骨髓瘤细胞系 RPMI-8226、NCI-H929 与正常人基质细胞共培养 48h 及72h，LRP5/6、Kremen1/2mRNA 水平明显增加，-cateninmRNA 水平下降，但24h 变化不明显。72h 与 48h 相比，上述基因 mRNA 水平变化更加明显。重组DKK1 蛋白浓度为 100ng/ml 及 300ng/ml 时，与基质细胞共培养 48h 及 72h 后LRP5/6、Kr
46、emenl/2 及 -cateninmRNA 水平无明显变化。重组 DKK1 蛋白浓度为 500ng/ml 时，培养 48hLRP5/6mRNA 水平有轻微上升(P0.05)，Kremenl/2mRNA 水平有所上升(P0.05)，及 -cateninmRNA 水平略有下降(P0.05)；培养 72hLRP5mRNA 水平有所上升(P0.05)，LRP6mRNA 水平无明显变化(P0.05)；Kremen1/2mRNA 水平有所上升(P0.05)，及 -cateninmRNA水平明显下降(P0.05)。重组 DKK1 蛋白浓度为 700ng/ml 时，培养 48h 及72hLRP5/6、Kre
47、men1/2mRNA 水平明显上升(P0.05)，及 -cateninmRNA 水平明显下降(P0.05)。 结论：骨髓瘤细胞、MM 患者及正常人基质细胞之间LRP5/6、Kremen1/2 及 -catenin 基因转录水平存在差异，而骨髓瘤细胞分泌的 DKK1 可能是造成 MM 患者基质细胞上述基因变化的重要因素。 第三部分DKK1 的真核表达、纯化及功能测定 目的：表达和纯化 DKK1 蛋白，研究骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体表达情况，并探讨 DKK1 对骨髓瘤细胞及基质细胞效应不同的可能机制。 方法：利用脂质体介导 pcDNA3.1(-)-DKK1 质粒瞬时转染 293T 细
48、胞，使用 westernblot 方法鉴定上清中的表达蛋白，使用 Ni-AgroseHis 标签蛋白纯化试剂盒，纯化融合 His 标签的 DKK1 蛋白。利用流式细胞术(FCM)，对 CD138+骨髓瘤细胞、删患者基质细胞及健康志愿者基质细胞表面 DKK1 相关受体表达情况进行同步分析比较。 结论：脂质体介导的质粒pcDNA3.1(-)-DKK1 体外转染效率较高，能表达有活性的 DKK1 蛋白，可以与骨髓瘤细胞及基质细胞 DKK1 相关受体特异性结合。骨髓瘤细胞、基质细胞之间DKK1 相关受体蛋白表达量不同。第一部分 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床研究 目的：研究 MM 患者骨髓上清液及血
49、清 Dickkopf1(DKK1)水平，及其与骨髓瘤分期、溶骨性病变的关系，以及不同化疗方案对 DKK1 的影响及与疗效的关系，探讨 DKK1 在多发性骨髓瘤中的临床作用。 方法：采用双抗体夹心酶标免疫分析法(ELISA)检测 80 例初诊MM 患者、10 例 MGUS 患者及 20 例对照骨髓上清液及血清 DKK1 水平，以及检测136 例接受硼替佐米+地塞米松或沙利度胺+地塞米松治疗的 MM 患者化疗前后血清 DKK1 水平。 结论：MM 患者 DKK1 水平明显高于 MGUS 患者及对照组，而且DKK1 水平与骨髓瘤分期及溶骨性病变密切相关，能反映溶骨性病变的程度和范围。DKK1 水平在化疗有效时明显下降，但与化疗方案有关，硼替佐米能使 DKK1水平明显下降，而沙利度胺及地塞米松却无此作用。 第二部分骨髓瘤细胞与基质细胞 DKK1 相关受体 LRP5/6 及 Kr
