1、免疫学专业优秀论文 免疫治疗对原因不明习惯性流产 Tim-1 与Tim-3 表达的影响关键词：习惯性流产 免疫治疗 Tim-1 表达 Tim-3 表达 抗夫淋巴细胞抗体 荧光定量 RT-PCR 疗效评价摘要：目的： 对原因不明习惯性流产（Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion，URSA）患者进行皮内注射丈夫淋巴细胞（Paternal Lymphocyte Immunization）主动免疫治疗。通过荧光定量 RT-PCR 方法检测治疗前后外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs）中Tim-1
2、 与 Tim-3mRNA 的表达水平；通过补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（complement-dependent micro mixed lymphocyte cytotoxicity，CDC）实验，检测患者血清中的抗夫淋巴细胞抗体（Anti-paternal lymphocyte antibody， APLA） 。评价免疫治疗效果，探讨 Tim-1，Tim-3 及 APLA 在 URSA 及主动免疫治疗中的作用。 方法： 1研究对象 35 例临床诊断为 URSA 的患者，年龄 23-34 岁，流产次数 2-5 次。25 例无不良妊娠史健康中期妊娠妇女，年龄23-31 岁。 2主动免疫治疗 无
3、菌抽取患者丈夫静脉血 20ml，采用Ficoll 密度梯度离心法无菌分离 PBMCs，于患者前臂皮内注射，每 21 天进行一次同样的免疫注射，共 4 次。第三次注射结束后患者方可计划受孕，随访再次妊娠结局。 3PBMCs 中 Tim-1 与 Tim-3 mRNA 表达 从 NCBI 数据库获得人-actin（ACTB） ，Tim-1（T/M-1）及 Tim-3（TIM-3）的 cDNA 序列，根据引物设计原则，应用 Premier Primer50 引物设计软件设计特异性引物，采用荧光定量 RT-PCR 方法，根据 SYBR Premix EX Taq（Perfect Real Time）试剂
4、盒说明，分别检测对照组 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和 Tim-3 mRNA 的相对表达水平；在治疗前及第 4 次治疗结束后第 15 天时检测患者 PBMCs 中 -actin，Tim-1和 Tim-3mRNA 的相对表达水平。 4APLA 采用补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（CDC）实验，分别检测对照组妻子血清对其丈夫淋巴细胞、患者治疗前和第 4 次治疗结束后第 15 天时妻子血清对其丈夫淋巴细胞的反应。 结果： 1妊娠结局随访 35 例患者中，4 例在免疫治疗后随访期间未按计划受孕，31 例按期受孕，其中 28 例安全度过孕早期，成功维持妊娠，3 例再次发生早期自然流产。25
5、例中期妊娠对照均正常分娩。 2Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达 利用最低循环数值（Ct）比较法检测目的基因的相对表达，结果表明 URSA 患者在治疗前 Tim-1 和 Tim-3 表达均明显高于正常对照（Tim-3，122013 vs128006，Plt;005；Tim-1，125007 vs134009 Plt;005） ；免疫治疗后成功维持妊娠的 28 例 URSA 患者、未受孕的 4 例患者治疗后 Tim-1 和 Tim-3 的表达水平与治疗前相比，明显下调（Plt;005） ；再次发生早期流产的 3 例患者治疗前后相比，Tim-1 和Tim-3 的表达水平无明显变化（Pgt;
6、005） 。 3APLA 检测结果 主动免疫治疗前必须常规对患者进行 APLA 检测，阴性者方可接受治疗。纳入治疗对象的 35 例患者，治疗前 APLA 均为阴性，第 4 次免疫注射后第 15 天，有 13例产生了 APLA，其中 12 例成功维持妊娠，1 例此疗程未按计划受孕。3 例再次发生早期自然流产的患者，均未产生 APLA 抗体。25 例对照组中，3 例 APLA 阳性。 结论： 1皮内注射丈夫淋巴细胞主动免疫治疗对一部分 URSA 患者产生了较满意的治疗效果（28/35，有效率 80） 。 2Tim-1 和 Tim-3 可能参与免疫治疗。 3URSA 患者体内 Th 细胞免疫应答水平
7、较高，机体处于免疫应答活跃状态，免疫治疗后大部分患者 Th 细胞免疫应答水平降低，有利于建立和维持对胚胎的免疫耐受。 4PBMCs 中 Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达是一种可行的辅助检测指标，对于免疫治疗效果，指导免疫治疗方案及患者治疗后的受孕时机有一定的意义。 5主动免疫治疗后一部分患者产生了 APLA，这种抗体对胚胎可能具有保护作用，但未产生 APLA 抗体尚不能认为免疫治疗预期效果不佳。正文内容目的： 对原因不明习惯性流产（Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion，URSA）患者进行皮内注射丈夫淋巴细胞（Paternal Lymph
8、ocyte Immunization）主动免疫治疗。通过荧光定量 RT-PCR 方法检测治疗前后外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs）中 Tim-1 与Tim-3mRNA 的表达水平；通过补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（complement-dependent micro mixed lymphocyte cytotoxicity，CDC）实验，检测患者血清中的抗夫淋巴细胞抗体（Anti-paternal lymphocyte antibody， APLA） 。评价免疫治疗效果，探讨 Tim-1，Tim-3 及 APLA 在 URSA
9、 及主动免疫治疗中的作用。方法： 1研究对象 35 例临床诊断为 URSA 的患者，年龄 23-34 岁，流产次数 2-5 次。25 例无不良妊娠史健康中期妊娠妇女，年龄 23-31 岁。 2主动免疫治疗 无菌抽取患者丈夫静脉血 20ml，采用 Ficoll 密度梯度离心法无菌分离 PBMCs，于患者前臂皮内注射，每 21 天进行一次同样的免疫注射，共 4 次。第三次注射结束后患者方可计划受孕，随访再次妊娠结局。 3PBMCs 中 Tim-1 与 Tim-3 mRNA 表达 从 NCBI 数据库获得人 -actin（ACTB） ，Tim-1（T/M-1）及 Tim-3（TIM-3）的 cDNA
10、 序列，根据引物设计原则，应用 Premier Primer50 引物设计软件设计特异性引物，采用荧光定量 RT-PCR 方法，根据 SYBR Premix EX Taq（Perfect Real Time）试剂盒说明，分别检测对照组 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和 Tim-3 mRNA 的相对表达水平；在治疗前及第 4 次治疗结束后第 15 天时检测患者 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和Tim-3mRNA 的相对表达水平。 4APLA 采用补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（CDC）实验，分别检测对照组妻子血清对其丈夫淋巴细胞、患者治疗前和第4 次治疗结束后第 15 天时
11、妻子血清对其丈夫淋巴细胞的反应。 结果： 1妊娠结局随访 35 例患者中，4 例在免疫治疗后随访期间未按计划受孕，31 例按期受孕，其中 28 例安全度过孕早期，成功维持妊娠，3 例再次发生早期自然流产。25 例中期妊娠对照均正常分娩。 2Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达 利用最低循环数值（Ct）比较法检测目的基因的相对表达，结果表明 URSA 患者在治疗前 Tim-1 和 Tim-3 表达均明显高于正常对照（Tim-3，122013 vs128006，Plt;005；Tim-1，125007 vs134009 Plt;005） ；免疫治疗后成功维持妊娠的 28 例 URSA 患者、
12、未受孕的 4 例患者治疗后 Tim-1 和 Tim-3 的表达水平与治疗前相比，明显下调（Plt;005） ；再次发生早期流产的 3 例患者治疗前后相比，Tim-1 和Tim-3 的表达水平无明显变化（Pgt;005） 。 3APLA 检测结果 主动免疫治疗前必须常规对患者进行 APLA 检测，阴性者方可接受治疗。纳入治疗对象的 35 例患者，治疗前 APLA 均为阴性，第 4 次免疫注射后第 15 天，有 13例产生了 APLA，其中 12 例成功维持妊娠，1 例此疗程未按计划受孕。3 例再次发生早期自然流产的患者，均未产生 APLA 抗体。25 例对照组中，3 例 APLA 阳性。 结论：
13、 1皮内注射丈夫淋巴细胞主动免疫治疗对一部分 URSA 患者产生了较满意的治疗效果（28/35，有效率 80） 。 2Tim-1 和 Tim-3 可能参与免疫治疗。 3URSA 患者体内 Th 细胞免疫应答水平较高，机体处于免疫应答活跃状态，免疫治疗后大部分患者 Th 细胞免疫应答水平降低，有利于建立和维持对胚胎的免疫耐受。 4PBMCs 中 Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达是一种可行的辅助检测指标，对于免疫治疗效果，指导免疫治疗方案及患者治疗后的受孕时机有一定的意义。 5主动免疫治疗后一部分患者产生了 APLA，这种抗体对胚胎可能具有保护作用，但未产生 APLA 抗体尚不能认为免疫
14、治疗预期效果不佳。目的： 对原因不明习惯性流产（Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion，URSA）患者进行皮内注射丈夫淋巴细胞（Paternal Lymphocyte Immunization）主动免疫治疗。通过荧光定量 RT-PCR 方法检测治疗前后外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs）中 Tim-1 与Tim-3mRNA 的表达水平；通过补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（complement-dependent micro mixed lymphocyte cytotoxicity，CD
15、C）实验，检测患者血清中的抗夫淋巴细胞抗体（Anti-paternal lymphocyte antibody， APLA） 。评价免疫治疗效果，探讨 Tim-1，Tim-3 及 APLA 在 URSA 及主动免疫治疗中的作用。方法： 1研究对象 35 例临床诊断为 URSA 的患者，年龄 23-34 岁，流产次数 2-5 次。25 例无不良妊娠史健康中期妊娠妇女，年龄 23-31 岁。 2主动免疫治疗 无菌抽取患者丈夫静脉血 20ml，采用 Ficoll 密度梯度离心法无菌分离 PBMCs，于患者前臂皮内注射，每 21 天进行一次同样的免疫注射，共 4 次。第三次注射结束后患者方可计划受孕，
16、随访再次妊娠结局。 3PBMCs 中 Tim-1 与 Tim-3 mRNA 表达 从 NCBI 数据库获得人 -actin（ACTB） ，Tim-1（T/M-1）及 Tim-3（TIM-3）的 cDNA 序列，根据引物设计原则，应用 Premier Primer50 引物设计软件设计特异性引物，采用荧光定量 RT-PCR 方法，根据 SYBR Premix EX Taq（Perfect Real Time）试剂盒说明，分别检测对照组 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和 Tim-3 mRNA 的相对表达水平；在治疗前及第 4 次治疗结束后第 15 天时检测患者 PBMCs 中 -act
17、in，Tim-1 和Tim-3mRNA 的相对表达水平。 4APLA 采用补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（CDC）实验，分别检测对照组妻子血清对其丈夫淋巴细胞、患者治疗前和第4 次治疗结束后第 15 天时妻子血清对其丈夫淋巴细胞的反应。 结果： 1妊娠结局随访 35 例患者中，4 例在免疫治疗后随访期间未按计划受孕，31 例按期受孕，其中 28 例安全度过孕早期，成功维持妊娠，3 例再次发生早期自然流产。25 例中期妊娠对照均正常分娩。 2Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达 利用最低循环数值（Ct）比较法检测目的基因的相对表达，结果表明 URSA 患者在治疗前 Tim-1 和 Tim-3
18、 表达均明显高于正常对照（Tim-3，122013 vs128006，Plt;005；Tim-1，125007 vs134009 Plt;005） ；免疫治疗后成功维持妊娠的 28 例 URSA 患者、未受孕的 4 例患者治疗后 Tim-1 和 Tim-3 的表达水平与治疗前相比，明显下调（Plt;005） ；再次发生早期流产的 3 例患者治疗前后相比，Tim-1 和Tim-3 的表达水平无明显变化（Pgt;005） 。 3APLA 检测结果 主动免疫治疗前必须常规对患者进行 APLA 检测，阴性者方可接受治疗。纳入治疗对象的 35 例患者，治疗前 APLA 均为阴性，第 4 次免疫注射后第
19、15 天，有 13例产生了 APLA，其中 12 例成功维持妊娠，1 例此疗程未按计划受孕。3 例再次发生早期自然流产的患者，均未产生 APLA 抗体。25 例对照组中，3 例 APLA 阳性。 结论： 1皮内注射丈夫淋巴细胞主动免疫治疗对一部分 URSA 患者产生了较满意的治疗效果（28/35，有效率 80） 。 2Tim-1 和 Tim-3 可能参与免疫治疗。 3URSA 患者体内 Th 细胞免疫应答水平较高，机体处于免疫应答活跃状态，免疫治疗后大部分患者 Th 细胞免疫应答水平降低，有利于建立和维持对胚胎的免疫耐受。 4PBMCs 中 Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达是一种可行
20、的辅助检测指标，对于免疫治疗效果，指导免疫治疗方案及患者治疗后的受孕时机有一定的意义。 5主动免疫治疗后一部分患者产生了 APLA，这种抗体对胚胎可能具有保护作用，但未产生 APLA 抗体尚不能认为免疫治疗预期效果不佳。目的： 对原因不明习惯性流产（Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion，URSA）患者进行皮内注射丈夫淋巴细胞（Paternal Lymphocyte Immunization）主动免疫治疗。通过荧光定量 RT-PCR 方法检测治疗前后外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs）
21、中 Tim-1 与Tim-3mRNA 的表达水平；通过补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（complement-dependent micro mixed lymphocyte cytotoxicity，CDC）实验，检测患者血清中的抗夫淋巴细胞抗体（Anti-paternal lymphocyte antibody， APLA） 。评价免疫治疗效果，探讨 Tim-1，Tim-3 及 APLA 在 URSA 及主动免疫治疗中的作用。方法： 1研究对象 35 例临床诊断为 URSA 的患者，年龄 23-34 岁，流产次数 2-5 次。25 例无不良妊娠史健康中期妊娠妇女，年龄 23-31 岁。 2主动
22、免疫治疗 无菌抽取患者丈夫静脉血 20ml，采用 Ficoll 密度梯度离心法无菌分离 PBMCs，于患者前臂皮内注射，每 21 天进行一次同样的免疫注射，共 4 次。第三次注射结束后患者方可计划受孕，随访再次妊娠结局。 3PBMCs 中 Tim-1 与 Tim-3 mRNA 表达 从 NCBI 数据库获得人 -actin（ACTB） ，Tim-1（T/M-1）及 Tim-3（TIM-3）的 cDNA 序列，根据引物设计原则，应用 Premier Primer50 引物设计软件设计特异性引物，采用荧光定量 RT-PCR 方法，根据 SYBR Premix EX Taq（Perfect Real
23、 Time）试剂盒说明，分别检测对照组 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和 Tim-3 mRNA 的相对表达水平；在治疗前及第 4 次治疗结束后第 15 天时检测患者 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和Tim-3mRNA 的相对表达水平。 4APLA 采用补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（CDC）实验，分别检测对照组妻子血清对其丈夫淋巴细胞、患者治疗前和第4 次治疗结束后第 15 天时妻子血清对其丈夫淋巴细胞的反应。 结果： 1妊娠结局随访 35 例患者中，4 例在免疫治疗后随访期间未按计划受孕，31 例按期受孕，其中 28 例安全度过孕早期，成功维持妊娠，3 例再次发生早期自
24、然流产。25 例中期妊娠对照均正常分娩。 2Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达 利用最低循环数值（Ct）比较法检测目的基因的相对表达，结果表明 URSA 患者在治疗前 Tim-1 和 Tim-3 表达均明显高于正常对照（Tim-3，122013 vs128006，Plt;005；Tim-1，125007 vs134009 Plt;005） ；免疫治疗后成功维持妊娠的 28 例 URSA 患者、未受孕的 4 例患者治疗后 Tim-1 和 Tim-3 的表达水平与治疗前相比，明显下调（Plt;005） ；再次发生早期流产的 3 例患者治疗前后相比，Tim-1 和Tim-3 的表达水平无明显
25、变化（Pgt;005） 。 3APLA 检测结果 主动免疫治疗前必须常规对患者进行 APLA 检测，阴性者方可接受治疗。纳入治疗对象的 35 例患者，治疗前 APLA 均为阴性，第 4 次免疫注射后第 15 天，有 13例产生了 APLA，其中 12 例成功维持妊娠，1 例此疗程未按计划受孕。3 例再次发生早期自然流产的患者，均未产生 APLA 抗体。25 例对照组中，3 例 APLA 阳性。 结论： 1皮内注射丈夫淋巴细胞主动免疫治疗对一部分 URSA 患者产生了较满意的治疗效果（28/35，有效率 80） 。 2Tim-1 和 Tim-3 可能参与免疫治疗。 3URSA 患者体内 Th 细
26、胞免疫应答水平较高，机体处于免疫应答活跃状态，免疫治疗后大部分患者 Th 细胞免疫应答水平降低，有利于建立和维持对胚胎的免疫耐受。 4PBMCs 中 Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达是一种可行的辅助检测指标，对于免疫治疗效果，指导免疫治疗方案及患者治疗后的受孕时机有一定的意义。 5主动免疫治疗后一部分患者产生了 APLA，这种抗体对胚胎可能具有保护作用，但未产生 APLA 抗体尚不能认为免疫治疗预期效果不佳。目的： 对原因不明习惯性流产（Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion，URSA）患者进行皮内注射丈夫淋巴细胞（Paternal Ly
27、mphocyte Immunization）主动免疫治疗。通过荧光定量 RT-PCR 方法检测治疗前后外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs）中 Tim-1 与Tim-3mRNA 的表达水平；通过补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（complement-dependent micro mixed lymphocyte cytotoxicity，CDC）实验，检测患者血清中的抗夫淋巴细胞抗体（Anti-paternal lymphocyte antibody， APLA） 。评价免疫治疗效果，探讨 Tim-1，Tim-3 及 APLA 在 U
28、RSA 及主动免疫治疗中的作用。方法： 1研究对象 35 例临床诊断为 URSA 的患者，年龄 23-34 岁，流产次数 2-5 次。25 例无不良妊娠史健康中期妊娠妇女，年龄 23-31 岁。 2主动免疫治疗 无菌抽取患者丈夫静脉血 20ml，采用 Ficoll 密度梯度离心法无菌分离 PBMCs，于患者前臂皮内注射，每 21 天进行一次同样的免疫注射，共 4 次。第三次注射结束后患者方可计划受孕，随访再次妊娠结局。 3PBMCs 中 Tim-1 与 Tim-3 mRNA 表达 从 NCBI 数据库获得人 -actin（ACTB） ，Tim-1（T/M-1）及 Tim-3（TIM-3）的 c
29、DNA 序列，根据引物设计原则，应用 Premier Primer50 引物设计软件设计特异性引物，采用荧光定量 RT-PCR 方法，根据 SYBR Premix EX Taq（Perfect Real Time）试剂盒说明，分别检测对照组 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和 Tim-3 mRNA 的相对表达水平；在治疗前及第 4 次治疗结束后第 15 天时检测患者 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和Tim-3mRNA 的相对表达水平。 4APLA 采用补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（CDC）实验，分别检测对照组妻子血清对其丈夫淋巴细胞、患者治疗前和第4 次治疗结束后第 15
30、 天时妻子血清对其丈夫淋巴细胞的反应。 结果： 1妊娠结局随访 35 例患者中，4 例在免疫治疗后随访期间未按计划受孕，31 例按期受孕，其中 28 例安全度过孕早期，成功维持妊娠，3 例再次发生早期自然流产。25 例中期妊娠对照均正常分娩。 2Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达 利用最低循环数值（Ct）比较法检测目的基因的相对表达，结果表明 URSA 患者在治疗前 Tim-1 和 Tim-3 表达均明显高于正常对照（Tim-3，122013 vs128006，Plt;005；Tim-1，125007 vs134009 Plt;005） ；免疫治疗后成功维持妊娠的 28 例 URSA
31、患者、未受孕的 4 例患者治疗后 Tim-1 和 Tim-3 的表达水平与治疗前相比，明显下调（Plt;005） ；再次发生早期流产的 3 例患者治疗前后相比，Tim-1 和Tim-3 的表达水平无明显变化（Pgt;005） 。 3APLA 检测结果 主动免疫治疗前必须常规对患者进行 APLA 检测，阴性者方可接受治疗。纳入治疗对象的 35 例患者，治疗前 APLA 均为阴性，第 4 次免疫注射后第 15 天，有 13例产生了 APLA，其中 12 例成功维持妊娠，1 例此疗程未按计划受孕。3 例再次发生早期自然流产的患者，均未产生 APLA 抗体。25 例对照组中，3 例 APLA 阳性。
32、结论： 1皮内注射丈夫淋巴细胞主动免疫治疗对一部分 URSA 患者产生了较满意的治疗效果（28/35，有效率 80） 。 2Tim-1 和 Tim-3 可能参与免疫治疗。 3URSA 患者体内 Th 细胞免疫应答水平较高，机体处于免疫应答活跃状态，免疫治疗后大部分患者 Th 细胞免疫应答水平降低，有利于建立和维持对胚胎的免疫耐受。 4PBMCs 中 Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达是一种可行的辅助检测指标，对于免疫治疗效果，指导免疫治疗方案及患者治疗后的受孕时机有一定的意义。 5主动免疫治疗后一部分患者产生了 APLA，这种抗体对胚胎可能具有保护作用，但未产生 APLA 抗体尚不能认
33、为免疫治疗预期效果不佳。目的： 对原因不明习惯性流产（Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion，URSA）患者进行皮内注射丈夫淋巴细胞（Paternal Lymphocyte Immunization）主动免疫治疗。通过荧光定量 RT-PCR 方法检测治疗前后外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs）中 Tim-1 与Tim-3mRNA 的表达水平；通过补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（complement-dependent micro mixed lymphocyte cytotoxicity
34、，CDC）实验，检测患者血清中的抗夫淋巴细胞抗体（Anti-paternal lymphocyte antibody， APLA） 。评价免疫治疗效果，探讨 Tim-1，Tim-3 及 APLA 在 URSA 及主动免疫治疗中的作用。方法： 1研究对象 35 例临床诊断为 URSA 的患者，年龄 23-34 岁，流产次数 2-5 次。25 例无不良妊娠史健康中期妊娠妇女，年龄 23-31 岁。 2主动免疫治疗 无菌抽取患者丈夫静脉血 20ml，采用 Ficoll 密度梯度离心法无菌分离 PBMCs，于患者前臂皮内注射，每 21 天进行一次同样的免疫注射，共 4 次。第三次注射结束后患者方可计划
35、受孕，随访再次妊娠结局。 3PBMCs 中 Tim-1 与 Tim-3 mRNA 表达 从 NCBI 数据库获得人 -actin（ACTB） ，Tim-1（T/M-1）及 Tim-3（TIM-3）的 cDNA 序列，根据引物设计原则，应用 Premier Primer50 引物设计软件设计特异性引物，采用荧光定量 RT-PCR 方法，根据 SYBR Premix EX Taq（Perfect Real Time）试剂盒说明，分别检测对照组 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和 Tim-3 mRNA 的相对表达水平；在治疗前及第 4 次治疗结束后第 15 天时检测患者 PBMCs 中 -
36、actin，Tim-1 和Tim-3mRNA 的相对表达水平。 4APLA 采用补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（CDC）实验，分别检测对照组妻子血清对其丈夫淋巴细胞、患者治疗前和第4 次治疗结束后第 15 天时妻子血清对其丈夫淋巴细胞的反应。 结果： 1妊娠结局随访 35 例患者中，4 例在免疫治疗后随访期间未按计划受孕，31 例按期受孕，其中 28 例安全度过孕早期，成功维持妊娠，3 例再次发生早期自然流产。25 例中期妊娠对照均正常分娩。 2Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达 利用最低循环数值（Ct）比较法检测目的基因的相对表达，结果表明 URSA 患者在治疗前 Tim-1 和 Ti
37、m-3 表达均明显高于正常对照（Tim-3，122013 vs128006，Plt;005；Tim-1，125007 vs134009 Plt;005） ；免疫治疗后成功维持妊娠的 28 例 URSA 患者、未受孕的 4 例患者治疗后 Tim-1 和 Tim-3 的表达水平与治疗前相比，明显下调（Plt;005） ；再次发生早期流产的 3 例患者治疗前后相比，Tim-1 和Tim-3 的表达水平无明显变化（Pgt;005） 。 3APLA 检测结果 主动免疫治疗前必须常规对患者进行 APLA 检测，阴性者方可接受治疗。纳入治疗对象的 35 例患者，治疗前 APLA 均为阴性，第 4 次免疫注射
38、后第 15 天，有 13例产生了 APLA，其中 12 例成功维持妊娠，1 例此疗程未按计划受孕。3 例再次发生早期自然流产的患者，均未产生 APLA 抗体。25 例对照组中，3 例 APLA 阳性。 结论： 1皮内注射丈夫淋巴细胞主动免疫治疗对一部分 URSA 患者产生了较满意的治疗效果（28/35，有效率 80） 。 2Tim-1 和 Tim-3 可能参与免疫治疗。 3URSA 患者体内 Th 细胞免疫应答水平较高，机体处于免疫应答活跃状态，免疫治疗后大部分患者 Th 细胞免疫应答水平降低，有利于建立和维持对胚胎的免疫耐受。 4PBMCs 中 Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达是一
39、种可行的辅助检测指标，对于免疫治疗效果，指导免疫治疗方案及患者治疗后的受孕时机有一定的意义。 5主动免疫治疗后一部分患者产生了 APLA，这种抗体对胚胎可能具有保护作用，但未产生 APLA 抗体尚不能认为免疫治疗预期效果不佳。目的： 对原因不明习惯性流产（Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion，URSA）患者进行皮内注射丈夫淋巴细胞（Paternal Lymphocyte Immunization）主动免疫治疗。通过荧光定量 RT-PCR 方法检测治疗前后外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBM
40、Cs）中 Tim-1 与Tim-3mRNA 的表达水平；通过补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（complement-dependent micro mixed lymphocyte cytotoxicity，CDC）实验，检测患者血清中的抗夫淋巴细胞抗体（Anti-paternal lymphocyte antibody， APLA） 。评价免疫治疗效果，探讨 Tim-1，Tim-3 及 APLA 在 URSA 及主动免疫治疗中的作用。方法： 1研究对象 35 例临床诊断为 URSA 的患者，年龄 23-34 岁，流产次数 2-5 次。25 例无不良妊娠史健康中期妊娠妇女，年龄 23-31 岁。
41、2主动免疫治疗 无菌抽取患者丈夫静脉血 20ml，采用 Ficoll 密度梯度离心法无菌分离 PBMCs，于患者前臂皮内注射，每 21 天进行一次同样的免疫注射，共 4 次。第三次注射结束后患者方可计划受孕，随访再次妊娠结局。 3PBMCs 中 Tim-1 与 Tim-3 mRNA 表达 从 NCBI 数据库获得人 -actin（ACTB） ，Tim-1（T/M-1）及 Tim-3（TIM-3）的 cDNA 序列，根据引物设计原则，应用 Premier Primer50 引物设计软件设计特异性引物，采用荧光定量 RT-PCR 方法，根据 SYBR Premix EX Taq（Perfect R
42、eal Time）试剂盒说明，分别检测对照组 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和 Tim-3 mRNA 的相对表达水平；在治疗前及第 4 次治疗结束后第 15 天时检测患者 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和Tim-3mRNA 的相对表达水平。 4APLA 采用补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（CDC）实验，分别检测对照组妻子血清对其丈夫淋巴细胞、患者治疗前和第4 次治疗结束后第 15 天时妻子血清对其丈夫淋巴细胞的反应。 结果： 1妊娠结局随访 35 例患者中，4 例在免疫治疗后随访期间未按计划受孕，31 例按期受孕，其中 28 例安全度过孕早期，成功维持妊娠，3 例再次发生
43、早期自然流产。25 例中期妊娠对照均正常分娩。 2Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达 利用最低循环数值（Ct）比较法检测目的基因的相对表达，结果表明 URSA 患者在治疗前 Tim-1 和 Tim-3 表达均明显高于正常对照（Tim-3，122013 vs128006，Plt;005；Tim-1，125007 vs134009 Plt;005） ；免疫治疗后成功维持妊娠的 28 例 URSA 患者、未受孕的 4 例患者治疗后 Tim-1 和 Tim-3 的表达水平与治疗前相比，明显下调（Plt;005） ；再次发生早期流产的 3 例患者治疗前后相比，Tim-1 和Tim-3 的表达水平
44、无明显变化（Pgt;005） 。 3APLA 检测结果 主动免疫治疗前必须常规对患者进行 APLA 检测，阴性者方可接受治疗。纳入治疗对象的 35 例患者，治疗前 APLA 均为阴性，第 4 次免疫注射后第 15 天，有 13例产生了 APLA，其中 12 例成功维持妊娠，1 例此疗程未按计划受孕。3 例再次发生早期自然流产的患者，均未产生 APLA 抗体。25 例对照组中，3 例 APLA 阳性。 结论： 1皮内注射丈夫淋巴细胞主动免疫治疗对一部分 URSA 患者产生了较满意的治疗效果（28/35，有效率 80） 。 2Tim-1 和 Tim-3 可能参与免疫治疗。 3URSA 患者体内 T
45、h 细胞免疫应答水平较高，机体处于免疫应答活跃状态，免疫治疗后大部分患者 Th 细胞免疫应答水平降低，有利于建立和维持对胚胎的免疫耐受。 4PBMCs 中 Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达是一种可行的辅助检测指标，对于免疫治疗效果，指导免疫治疗方案及患者治疗后的受孕时机有一定的意义。 5主动免疫治疗后一部分患者产生了 APLA，这种抗体对胚胎可能具有保护作用，但未产生 APLA 抗体尚不能认为免疫治疗预期效果不佳。目的： 对原因不明习惯性流产（Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion，URSA）患者进行皮内注射丈夫淋巴细胞（Paternal
46、 Lymphocyte Immunization）主动免疫治疗。通过荧光定量 RT-PCR 方法检测治疗前后外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs）中 Tim-1 与Tim-3mRNA 的表达水平；通过补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（complement-dependent micro mixed lymphocyte cytotoxicity，CDC）实验，检测患者血清中的抗夫淋巴细胞抗体（Anti-paternal lymphocyte antibody， APLA） 。评价免疫治疗效果，探讨 Tim-1，Tim-3 及 APLA
47、在 URSA 及主动免疫治疗中的作用。方法： 1研究对象 35 例临床诊断为 URSA 的患者，年龄 23-34 岁，流产次数 2-5 次。25 例无不良妊娠史健康中期妊娠妇女，年龄 23-31 岁。 2主动免疫治疗 无菌抽取患者丈夫静脉血 20ml，采用 Ficoll 密度梯度离心法无菌分离 PBMCs，于患者前臂皮内注射，每 21 天进行一次同样的免疫注射，共 4 次。第三次注射结束后患者方可计划受孕，随访再次妊娠结局。 3PBMCs 中 Tim-1 与 Tim-3 mRNA 表达 从 NCBI 数据库获得人 -actin（ACTB） ，Tim-1（T/M-1）及 Tim-3（TIM-3）
48、的 cDNA 序列，根据引物设计原则，应用 Premier Primer50 引物设计软件设计特异性引物，采用荧光定量 RT-PCR 方法，根据 SYBR Premix EX Taq（Perfect Real Time）试剂盒说明，分别检测对照组 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和 Tim-3 mRNA 的相对表达水平；在治疗前及第 4 次治疗结束后第 15 天时检测患者 PBMCs 中 -actin，Tim-1 和Tim-3mRNA 的相对表达水平。 4APLA 采用补体依赖的微量混合淋巴细胞毒（CDC）实验，分别检测对照组妻子血清对其丈夫淋巴细胞、患者治疗前和第4 次治疗结束后第 15 天时妻子血清对其丈夫淋巴细胞的反应。 结果： 1妊娠结局随访 35 例患者中，4 例在免疫治疗后随访期间未按计划受孕，31 例按期受孕，其中 28 例安全度过孕早期，成功维持妊娠，3 例再次发生早期自然流产。25 例中期妊娠对照均正常分娩。 2Tim-1 和 Tim-3 mRNA 表达 利用最低循环数值（Ct）比较法检测目的基因的相对表达，结果表明 URSA 患者在治疗
