1、内科学(心血管病)专业毕业论文 精品论文 交感/副交感神经递质在动脉粥样硬化病变发生中的研究关键词：动脉粥样硬化 血管外膜 去甲肾上腺素 乙酰胆碱 前脂肪细胞 炎症因子摘要：自主神经系统(交感/副交感)功能紊乱是 AS 发生的重要机制之一，目前的研究已经证实长期的神经刺激一方面可以直接破坏血管内皮结构，促进外膜成纤维细胞及中膜平滑肌细胞增殖迁移，另一方面还可通过激活核因子 NF-B促进多种细胞分泌炎症因子，促进氧化应激，加速病变的进程。 血管内皮损伤是动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)发病的始动因素，外膜一直被认为在AS 的发生中只是一个旁观者，近期的研究则发现动脉外膜参与了
2、 AS 的发生发展，但其具体的作用机制尚不清楚，Barker 等剥离兔颈动脉外膜致内膜病变的研究为我们提供了良好的研究思路，即通过外膜损伤血管与正常血管的对照研究，了解血管外膜在内膜病变形成中的作用。此外，解剖学研究发现大中动脉的神经支配主要为去甲肾上腺素能与胆碱能纤维，且主要分布于血管的外膜以及中外膜交界处，因此外膜损伤对于去甲肾上腺素能/胆碱能神经纤维必然会造成一定的刺激，但目前关于这方面的研究尚无明确报道。 前脂肪细胞是自主神经系统作用的另一重要靶标。研究发现，去除小鼠脂肪组织的交感神经支配后，前脂肪细胞的数量明显增加，体外给予培养的前脂肪细胞去甲肾上腺素刺激也能够明显抑制其增殖。前脂肪
3、细胞是炎症因子的重要来源，在 AS 的发生发展中具有重要的作用，但自主神经系统对其炎症分泌功能的影响目前尚无研究。基于以上研究基础，本实验针对以下几点进行了探讨：建立颈动脉外膜损伤的兔模型，确定外膜损伤致内膜病变形成的作用；对自主神经系统神经递质在外膜损伤致内膜病变过程中的水平变化及作用进行探讨；观察交感/副交感神经递质对前脂肪细胞炎症分泌作用的影响并进行机制探讨。 第一部分血管外膜损伤致内膜增生性病变模型的建立 目的： 建立外膜损伤致内膜病变的动物模型，明确外膜损伤在内膜增生性病变形成中的作用，观察通心络对病变的影响。 方法： 采用胶原酶消化+机械分离的方法建立单侧颈动脉外膜损伤的新西兰兔模
4、型。分别于损伤后 1d、3d、1w、2w、4w、8w 取材行石蜡切片和冰冻切片检查，采用 HE、免疫组化、扫描电镜等方法，观察血管内膜增生情况及其构成成分。 结果： 血管外膜损伤后 1 周即出现内膜增生，2 周时达到顶峰，此时模型组及通心络外膜损伤组两组内膜病变面积/中膜面积(neointima area/mediaarea100，IMR)比值分别为24.981.91vs18.571.4，P0.05，与对照组相比也均有明显的统计学差异，P0.05。免疫组化检测证实平滑肌细胞是病变的主要成分。扫描电镜显示在外膜损伤后内皮先后出现萎缩、脱落、基底膜暴露、血栓形成。 结论： 胶原酶消化+机械分离损伤
5、动脉外膜这一方法可有效损伤动脉外膜；血管外膜损伤可导致内膜病变的形成；通心络具有抗 AS 病变作用。 第二部分血管外膜损伤诱导局部交感/副交感神经递质含量的变化 目的：明确外膜损伤对于局部动脉壁组织中交感/副交感神经递质浓度去甲肾上腺素(Norepinephrine，NE)、乙酰胆碱(Acetylcholin，Ach)及核因子 NF-B p65 水平的影响，观察通心络干预的效果。 方法：将实验动物分为外膜损伤组(单纯外膜损伤)、对照组(单纯假手术)、TXL+外膜损伤组(外膜损伤+通心络灌胃)以及 TXL 组(假手术+通心络灌胃)，于手术后 1w、2w、4w、8w 取材，采用高效液相方法监测神经
6、递质NE 与 Ach 的变化，免疫组化检测血管壁局部组织中磷酸化 p65 的表达，western 检测组织核蛋白中 p65 的水平。 结果：1、外膜损伤组外膜损伤后局部 NE 含量在术后 1W 达到顶峰，Ach 在 2w 达到顶峰，分别为1256.484.97nmol/g 与 106.613.35nmol/g，同时期对照组 NE 与 Ach 含量分别为 857.7352.86 nmol/g 与 122.977.79nmol/g，NE 含量两组差异明显，P0.05； 2、TXL+外膜损伤组外膜损伤后局部 NE 与 Ach 含量在术后 2W 达到高峰，分别为 1065.8770.93nmol/g
7、与 114.8711.99nmol/g；同时期通心络组两种物质含量分别为 573.0744.91nmol/g 与 90.48.80nmol/g，NE 含量两组差异明显，P0.05； 3、外膜损伤后血管壁中磷酸化 p65 表达在术后 2W达到顶峰，通心络能够减少该蛋白的水平；组织核蛋白中 p65 的水平变化与磷酸化 p65 一致，在术后 1W、2W 与 4W 时 TXL+外膜损伤组的水平明显低于模型组，P0.05。 结论：外膜损伤可导致局部神经递质释放的不平衡，激活 NF-B，使得细胞核内 p65 的水平增加；通心络可以通过抑制延缓 NE 的释放、上调 Ach 释放的幅度，减少局部 NE-Bp6
8、5 的活化，最终抑制病变内膜的增生。 第三部分交感/副交感神经递质对前脂肪细胞的作用及其拮抗剂干预效果 目的： 前脂肪细胞是炎症因子的重要来源，观察交感/副交感神经递质去甲肾上腺素、乙酰胆碱及其受体拮抗剂对培养的小鼠前脂肪细胞炎症分泌功能的影响，并对其机制进行探讨。 方法： 药物刺激细胞 2h、6h、12h、24h 后，采用 MTT 观察细胞的增殖能力，Annexin V 检测凋亡比率，ELISA 监测上清中IL-6、IL-10 及 NGF 的动态变化，western 检测核蛋白中 p65 的水平。 结果：1、NE 刺激培养的前脂肪细胞 12h 后可以明显抑制其增殖，Ach 则可以在刺激 12
9、h 后促进其增殖，分别为对照的 74.93.64与 11211.4，P0.05，两种递质的受体拮抗剂都能够阻断它们对细胞增殖的作用； 2、刺激 12h 后NE 促进了细胞凋亡，明显多于对照组，凋亡比率分别为17.820.78vs3.240.19，P0.05。Ach 不同的浓度对于细胞的凋亡存在双向作用，0.1uM 刺激细胞 12h 后细胞的凋亡比率为 12.051.05vs control，P0.05；Met 和 MLA 阻断后都可以明显减少细胞的凋亡，两组凋亡比率分别为 10.680.79与 8.130.95； 3、NE 刺激前脂肪细胞分泌IL-6，在 12h 时达到高峰，水平明显高于对照组
10、，分别为 86.086.31pg/ml vs46.713.02 pg/ml，P0.05，其作用可以完全被 Met 拮抗，拮抗后 12h 水平为 36.916.22 pg/ml vs control，P0.05；Ach 刺激 6h 后达到高峰，也明显高于对照组，为 78.994.7 pg/ml vs control，P0.05，其效应可以部分被 MLA 阻断，6h 为 67.124.72pg/ml vs control，P0.05；NE 抑制细胞分泌 IL-10，在刺激 6h 后明显低于对照组，分别为 61.631.56 pg/ml vs90.974.04 pg/ml，并持续至 24h，为 50
11、.816.19 pg/ml；Ach 刺激 12h后明显降低，也持续至 24h，分别为 58.517.17 pg/ml 与 51.351.83 pg/ml，美托洛尔可以拮抗 NE 对 IL-10 分泌的大部分作用，而 MLA 对 Ach 则无明显阻断作用；NE 刺激前脂肪细胞分泌 NGF 作用不明显，仅在 6h 时轻度高于对照组，分别为 96.4121.53 pg/ml vs83.962.81 pg/ml，P0.05。美托洛尔阻断 6h 后细胞分泌明显升高，为 126.6510.36 pg/ml vs control，P0.05； 4、NE 上调前脂肪细胞核蛋白 p65 的水平，并呈时间依赖性；
12、Ach 刺激 p65 蛋白表达在 6h 达到顶峰，此后逐渐下降，但 24h 时仍明显高于对照水平，两种递质的受体拮抗剂仅能够部分阻断它们对 p65 表达的影响。结论： 去甲肾上腺素能够通过促进前脂肪细胞 p65 蛋白核转位激活细胞分泌炎症因子，B 阻滞剂美托洛尔能够部分阻断 NE 的促炎症分泌作用。Ach 在对前脂肪细胞的作用中并未表现出明显的抗炎作用，这可能与细胞表面抗炎受体 a7nAChR 的表达较少有关。正文内容自主神经系统(交感/副交感)功能紊乱是 AS 发生的重要机制之一，目前的研究已经证实长期的神经刺激一方面可以直接破坏血管内皮结构，促进外膜成纤维细胞及中膜平滑肌细胞增殖迁移，另一
13、方面还可通过激活核因子 NF-B 促进多种细胞分泌炎症因子，促进氧化应激，加速病变的进程。 血管内皮损伤是动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)发病的始动因素，外膜一直被认为在AS 的发生中只是一个旁观者，近期的研究则发现动脉外膜参与了 AS 的发生发展，但其具体的作用机制尚不清楚，Barker 等剥离兔颈动脉外膜致内膜病变的研究为我们提供了良好的研究思路，即通过外膜损伤血管与正常血管的对照研究，了解血管外膜在内膜病变形成中的作用。此外，解剖学研究发现大中动脉的神经支配主要为去甲肾上腺素能与胆碱能纤维，且主要分布于血管的外膜以及中外膜交界处，因此外膜损伤对于去甲肾上腺素能/胆碱能
14、神经纤维必然会造成一定的刺激，但目前关于这方面的研究尚无明确报道。 前脂肪细胞是自主神经系统作用的另一重要靶标。研究发现，去除小鼠脂肪组织的交感神经支配后，前脂肪细胞的数量明显增加，体外给予培养的前脂肪细胞去甲肾上腺素刺激也能够明显抑制其增殖。前脂肪细胞是炎症因子的重要来源，在 AS 的发生发展中具有重要的作用，但自主神经系统对其炎症分泌功能的影响目前尚无研究。基于以上研究基础，本实验针对以下几点进行了探讨：建立颈动脉外膜损伤的兔模型，确定外膜损伤致内膜病变形成的作用；对自主神经系统神经递质在外膜损伤致内膜病变过程中的水平变化及作用进行探讨；观察交感/副交感神经递质对前脂肪细胞炎症分泌作用的影
15、响并进行机制探讨。 第一部分血管外膜损伤致内膜增生性病变模型的建立 目的： 建立外膜损伤致内膜病变的动物模型，明确外膜损伤在内膜增生性病变形成中的作用，观察通心络对病变的影响。 方法： 采用胶原酶消化+机械分离的方法建立单侧颈动脉外膜损伤的新西兰兔模型。分别于损伤后 1d、3d、1w、2w、4w、8w 取材行石蜡切片和冰冻切片检查，采用 HE、免疫组化、特别提醒 ：正文内容由 PDF 文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 http:/ 。如还不能显示，可以联系我 q q 1627550258 ，提供原格式文档。“垐垯櫃 换烫梯葺铑?endstr
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