1、内科学(心血管病)专业毕业论文 精品论文 Ghrelin 和Obestatin在肥胖症中的作用及对糖脂代谢和细胞增殖的影响关键词：ghrelin obestatin 肥胖症 能量代谢 HepG2 细胞摘要：研究背景： 肥胖症是新世纪全球性的重要健康问题之一，其患病率呈逐渐上升趋势。肥胖者常有胰岛素抵抗，易与糖尿病、血脂异常、冠心病、高血压病等集结出现，是糖尿病、心血管疾病发病的独立危险因素。研究肥胖症及其相关疾病的发生机制与防治，已成为当今医学研究的重点课题。 Ghrelin是 1999年由 Koiima等在寻找生长激素促分泌剂受体(GHSR)的内源性配体时发现的一种由 28个氨基酸构成的多肽
2、。ghrelin 主要通过 NPY/AGRP系统促进摄食，反过来也受进食、食物的影响；ghrelin 水平在肥胖时降低，体重减轻后升高，通过促进摄食、增加体重、促进脂肪合成等参与肥胖的发生发展，在机体减肥过程的代谢调节中起了重要作用，因此认为 ghrelin可能参与了肥胖的病理生理机制。2005 年 11月斯坦福大学 Zhang等推测并证实了ghrelin的前体 preproghrelin除可产生 ghrelin，还可产生另外一种多肽，命名为 obestatin。Obestatin 最初的研究发现在机体食欲和体重调节中与ghrelin的功能完全相反；而且其受体 GPR39与 GHSR亦属于同一
3、家族，提示二者功能的协调发挥是机体调节一些生理功能的一个重要机制。然而，也有研究表明上述结论还有待商榷，认为 obestatin不是 GPR39的配体，外源性obestatin并不能影响大鼠或小鼠的体重、进食量和生长激素的分泌。我们以前的研究发现肥胖症患者外周血 ghrelin和 obestatin水平均明显低于正常人，进食后进一步降低。本研究主要探讨 ghrelin、obestatin 与肥胖症的关系及对HepG2细胞的作用。 目的： 探讨饮食诱导肥胖(DIO)大鼠空腹外周血ghrelin和 obestatin的水平，DIO 大鼠在不同摄状态下及通过迷你胃旁路手术和改变饮食后 ghrelin
4、和 obestatin的变化；外源性的 ghrelin和 obestatin腹腔注射对 DIO小鼠摄食、饮水、体重、血糖、血脂、胰岛素及瘦素等的影响；观察 ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞糖脂代谢和增殖的影响。 方法： (1)建立 Wistar大鼠肥胖和肥胖抵抗的模型，将 DIO大鼠随机分为 6组，分别为空腹组、饱食组、自由进食组、改饮食组、迷你胃旁路手术组和假手术组，采用 RLA方法测 Wistar大鼠各组外周血中的 obestatin和 ghrelin的水平。采用免疫组化方法测 obestatin和 ghrelin在组织中的表达。 (2)建立C57BL/6J小鼠的肥胖
5、模型，将肥胖小鼠分 3组：obestatin 组给予obestatin(10nmol/kg)腹腔注射 7日，每日两次；ghrelin 组给予ghrelin(20nmol/kg)连续腹腔注射 7日，每日两次；生理盐水组给予生理盐水(0.2ml/只)腹腔注射 7天，每日两次。检测给予 obestatin和 ghrelin后进食量，饮水量，体重，血糖及自主活动的变化及对血浆中 leptin、血糖、胰岛素、血脂等指标的影响。 (3)应用不同浓度的 ghrelin(10-710-9mol/l)和obestatin(10-7-10-9mol/l)干预体外培养的人肝癌 HepG2细胞，葡萄糖氧化酶法测葡萄糖
6、的消耗；采用 Real time PCR技术检测 ghrelin和 obestatin对HepG2细胞中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)，脂肪酸合成酶(FAS)，乙酰辅酶 A羧化酶(ACC)和葡萄糖激酶(GK)mRNA 的表达，Western blotting 方法检测糖原合成酶(GS)的蛋白表达及对糖原的影响；观察细胞增殖的变化，并检测信号通路抑制剂 ERK特异性的抑制剂 PD98059，Rho 激酶抑制剂 Y-27632和 P13K的抑制剂 Wortmannin对 ghrelin或 obestatin引起的细胞增殖的影响。 结论： 1)DIO大鼠外周血 ghrelin水平明显降低，且
7、受短期进食状态和长期能量状态的影响；obestatin 水平的变化与 ghrelin相似。 2)Ghrelin 可以明显增加DIO小鼠的进食量和体重，并升高血糖、胰岛素和胆固醇水平；obestatin 对上述方面无作用。 3)Ghrelin 可以促进 HepG2细胞内糖脂代谢的关键酶的 mRNA表达，并通过抑制糖原合成酶从而抑制糖原的合成。obestatin 在上述方面无明显作用。Ghrelin 对 HepG2细胞有促增殖作用，该作用可能与 ERK和 PI3K信号通路有关。Obestatin 也有促进 HepG2细胞增殖作用并可能与 PI3K信号通路有关。 总之，本研究发现 obestatin
8、对 DIO小鼠进食量和体重及糖脂代谢无明显作用，对肝细胞糖脂代谢亦无明显影响，提示 obestatin与肥胖的发生无明显关系。因 obestatin与 ghrelin来源于同一前体原，肥胖症中 obestatin水平的异常可能仅仅是 ghrelin异常的一个伴随现象。正文内容研究背景： 肥胖症是新世纪全球性的重要健康问题之一，其患病率呈逐渐上升趋势。肥胖者常有胰岛素抵抗，易与糖尿病、血脂异常、冠心病、高血压病等集结出现，是糖尿病、心血管疾病发病的独立危险因素。研究肥胖症及其相关疾病的发生机制与防治，已成为当今医学研究的重点课题。 Ghrelin是 1999年由 Koiima等在寻找生长激素促分
9、泌剂受体(GHSR)的内源性配体时发现的一种由 28个氨基酸构成的多肽。ghrelin 主要通过 NPY/AGRP系统促进摄食，反过来也受进食、食物的影响；ghrelin 水平在肥胖时降低，体重减轻后升高，通过促进摄食、增加体重、促进脂肪合成等参与肥胖的发生发展，在机体减肥过程的代谢调节中起了重要作用，因此认为 ghrelin可能参与了肥胖的病理生理机制。2005 年 11月斯坦福大学 Zhang等推测并证实了 ghrelin的前体 preproghrelin除可产生 ghrelin，还可产生另外一种多肽，命名为obestatin。Obestatin 最初的研究发现在机体食欲和体重调节中与 g
10、hrelin的功能完全相反；而且其受体 GPR39与 GHSR亦属于同一家族，提示二者功能的协调发挥是机体调节一些生理功能的一个重要机制。然而，也有研究表明上述结论还有待商榷，认为 obestatin不是 GPR39的配体，外源性 obestatin并不能影响大鼠或小鼠的体重、进食量和生长激素的分泌。我们以前的研究发现肥胖症患者外周血 ghrelin和 obestatin水平均明显低于正常人，进食后进一步降低。本研究主要探讨 ghrelin、obestatin 与肥胖症的关系及对 HepG2细胞的作用。 目的： 探讨饮食诱导肥胖(DIO)大鼠空腹外周血 ghrelin和obestatin的水平
11、，DIO 大鼠在不同摄状态下及通过迷你胃旁路手术和改变饮食后 ghrelin和 obestatin的变化；外源性的 ghrelin和 obestatin腹腔注射对DIO小鼠摄食、饮水、体重、血糖、血脂、胰岛素及瘦素等的影响；观察ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞糖脂代谢和增殖的影响。 方法： (1)建立 Wistar大鼠肥胖和肥胖抵抗的模型，将 DIO大鼠随机分为 6组，分别为空腹组、饱食组、自由进食组、改饮食组、迷你胃旁路手术组和假手术组，采用RLA方法测 Wistar大鼠各组外周血中的 obestatin和 ghrelin的水平。采用免疫组化方法测 obestatin和
12、 ghrelin在组织中的表达。 (2)建立 C57BL/6J小鼠的肥胖模型，将肥胖小鼠分 3组：obestatin 组给予 obestatin(10nmol/kg)腹腔注射 7日，每日两次；ghrelin 组给予 ghrelin(20nmol/kg)连续腹腔注射7日，每日两次；生理盐水组给予生理盐水(0.2ml/只)腹腔注射 7天，每日两次。检测给予 obestatin和 ghrelin后进食量，饮水量，体重，血糖及自主活动的变化及对血浆中 leptin、血糖、胰岛素、血脂等指标的影响。 (3)应用不同浓度的 ghrelin(10-710-9mol/l)和 obestatin(10-7-10
13、-9mol/l)干预体外培养的人肝癌 HepG2细胞，葡萄糖氧化酶法测葡萄糖的消耗；采用 Real time PCR技术检测 ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)，脂肪酸合成酶(FAS)，乙酰辅酶 A羧化酶(ACC)和葡萄糖激酶(GK)mRNA的表达，Western blotting 方法检测糖原合成酶(GS)的蛋白表达及对糖原的影响；观察细胞增殖的变化，并检测信号通路抑制剂 ERK特异性的抑制剂PD98059，Rho 激酶抑制剂 Y-27632和 P13K的抑制剂 Wortmannin对 ghrelin或obestatin引起的细胞增
14、殖的影响。 结论： 1)DIO 大鼠外周血 ghrelin水平明显降低，且受短期进食状态和长期能量状态的影响；obestatin 水平的变化与 ghrelin相似。 2)Ghrelin 可以明显增加 DIO小鼠的进食量和体重，并升高血糖、胰岛素和胆固醇水平；obestatin 对上述方面无作用。 3)Ghrelin可以促进 HepG2细胞内糖脂代谢的关键酶的 mRNA表达，并通过抑制糖原合成酶从而抑制糖原的合成。obestatin 在上述方面无明显作用。Ghrelin对 HepG2细胞有促增殖作用，该作用可能与 ERK和 PI3K信号通路有关。Obestatin也有促进 HepG2细胞增殖作用
15、并可能与 PI3K信号通路有关。 总之，本研究发现 obestatin对 DIO小鼠进食量和体重及糖脂代谢无明显作用，对肝细胞糖脂代谢亦无明显影响，提示 obestatin与肥胖的发生无明显关系。因 obestatin与 ghrelin来源于同一前体原，肥胖症中 obestatin水平的异常可能仅仅是 ghrelin异常的一个伴随现象。研究背景： 肥胖症是新世纪全球性的重要健康问题之一，其患病率呈逐渐上升趋势。肥胖者常有胰岛素抵抗，易与糖尿病、血脂异常、冠心病、高血压病等集结出现，是糖尿病、心血管疾病发病的独立危险因素。研究肥胖症及其相关疾病的发生机制与防治，已成为当今医学研究的重点课题。 G
16、hrelin 是1999年由 Koiima等在寻找生长激素促分泌剂受体(GHSR)的内源性配体时发现的一种由 28个氨基酸构成的多肽。ghrelin 主要通过 NPY/AGRP系统促进摄食，反过来也受进食、食物的影响；ghrelin 水平在肥胖时降低，体重减轻后升高，通过促进摄食、增加体重、促进脂肪合成等参与肥胖的发生发展，在机体减肥过程的代谢调节中起了重要作用，因此认为 ghrelin可能参与了肥胖的病理生理机制。2005 年 11月斯坦福大学 Zhang等推测并证实了 ghrelin的前体preproghrelin除可产生 ghrelin，还可产生另外一种多肽，命名为obestatin。O
17、bestatin 最初的研究发现在机体食欲和体重调节中与 ghrelin的功能完全相反；而且其受体 GPR39与 GHSR亦属于同一家族，提示二者功能的协调发挥是机体调节一些生理功能的一个重要机制。然而，也有研究表明上述结论还有待商榷，认为 obestatin不是 GPR39的配体，外源性 obestatin并不能影响大鼠或小鼠的体重、进食量和生长激素的分泌。我们以前的研究发现肥胖症患者外周血 ghrelin和 obestatin水平均明显低于正常人，进食后进一步降低。本研究主要探讨 ghrelin、obestatin 与肥胖症的关系及对 HepG2细胞的作用。 目的： 探讨饮食诱导肥胖(DI
18、O)大鼠空腹外周血 ghrelin和obestatin的水平，DIO 大鼠在不同摄状态下及通过迷你胃旁路手术和改变饮食后 ghrelin和 obestatin的变化；外源性的 ghrelin和 obestatin腹腔注射对DIO小鼠摄食、饮水、体重、血糖、血脂、胰岛素及瘦素等的影响；观察ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞糖脂代谢和增殖的影响。 方法： (1)建立 Wistar大鼠肥胖和肥胖抵抗的模型，将 DIO大鼠随机分为 6组，分别为空腹组、饱食组、自由进食组、改饮食组、迷你胃旁路手术组和假手术组，采用RLA方法测 Wistar大鼠各组外周血中的 obestatin和 g
19、hrelin的水平。采用免疫组化方法测 obestatin和 ghrelin在组织中的表达。 (2)建立 C57BL/6J小鼠的肥胖模型，将肥胖小鼠分 3组：obestatin 组给予 obestatin(10nmol/kg)腹腔注射 7日，每日两次；ghrelin 组给予 ghrelin(20nmol/kg)连续腹腔注射7日，每日两次；生理盐水组给予生理盐水(0.2ml/只)腹腔注射 7天，每日两次。检测给予 obestatin和 ghrelin后进食量，饮水量，体重，血糖及自主活动的变化及对血浆中 leptin、血糖、胰岛素、血脂等指标的影响。 (3)应用不同浓度的 ghrelin(10-
20、710-9mol/l)和 obestatin(10-7-10-9mol/l)干预体外培养的人肝癌 HepG2细胞，葡萄糖氧化酶法测葡萄糖的消耗；采用 Real time PCR技术检测 ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)，脂肪酸合成酶(FAS)，乙酰辅酶 A羧化酶(ACC)和葡萄糖激酶(GK)mRNA的表达，Western blotting 方法检测糖原合成酶(GS)的蛋白表达及对糖原的影响；观察细胞增殖的变化，并检测信号通路抑制剂 ERK特异性的抑制剂PD98059，Rho 激酶抑制剂 Y-27632和 P13K的抑制剂 Wortm
21、annin对 ghrelin或obestatin引起的细胞增殖的影响。 结论： 1)DIO 大鼠外周血 ghrelin水平明显降低，且受短期进食状态和长期能量状态的影响；obestatin 水平的变化与 ghrelin相似。 2)Ghrelin 可以明显增加 DIO小鼠的进食量和体重，并升高血糖、胰岛素和胆固醇水平；obestatin 对上述方面无作用。 3)Ghrelin可以促进 HepG2细胞内糖脂代谢的关键酶的 mRNA表达，并通过抑制糖原合成酶从而抑制糖原的合成。obestatin 在上述方面无明显作用。Ghrelin对 HepG2细胞有促增殖作用，该作用可能与 ERK和 PI3K信号
22、通路有关。Obestatin也有促进 HepG2细胞增殖作用并可能与 PI3K信号通路有关。 总之，本研究发现 obestatin对 DIO小鼠进食量和体重及糖脂代谢无明显作用，对肝细胞糖脂代谢亦无明显影响，提示 obestatin与肥胖的发生无明显关系。因 obestatin与 ghrelin来源于同一前体原，肥胖症中 obestatin水平的异常可能仅仅是 ghrelin异常的一个伴随现象。研究背景： 肥胖症是新世纪全球性的重要健康问题之一，其患病率呈逐渐上升趋势。肥胖者常有胰岛素抵抗，易与糖尿病、血脂异常、冠心病、高血压病等集结出现，是糖尿病、心血管疾病发病的独立危险因素。研究肥胖症及其
23、相关疾病的发生机制与防治，已成为当今医学研究的重点课题。 Ghrelin 是1999年由 Koiima等在寻找生长激素促分泌剂受体(GHSR)的内源性配体时发现的一种由 28个氨基酸构成的多肽。ghrelin 主要通过 NPY/AGRP系统促进摄食，反过来也受进食、食物的影响；ghrelin 水平在肥胖时降低，体重减轻后升高，通过促进摄食、增加体重、促进脂肪合成等参与肥胖的发生发展，在机体减肥过程的代谢调节中起了重要作用，因此认为 ghrelin可能参与了肥胖的病理生理机制。2005 年 11月斯坦福大学 Zhang等推测并证实了 ghrelin的前体preproghrelin除可产生 ghr
24、elin，还可产生另外一种多肽，命名为obestatin。Obestatin 最初的研究发现在机体食欲和体重调节中与 ghrelin的功能完全相反；而且其受体 GPR39与 GHSR亦属于同一家族，提示二者功能的协调发挥是机体调节一些生理功能的一个重要机制。然而，也有研究表明上述结论还有待商榷，认为 obestatin不是 GPR39的配体，外源性 obestatin并不能影响大鼠或小鼠的体重、进食量和生长激素的分泌。我们以前的研究发现肥胖症患者外周血 ghrelin和 obestatin水平均明显低于正常人，进食后进一步降低。本研究主要探讨 ghrelin、obestatin 与肥胖症的关系
25、及对 HepG2细胞的作用。 目的： 探讨饮食诱导肥胖(DIO)大鼠空腹外周血 ghrelin和obestatin的水平，DIO 大鼠在不同摄状态下及通过迷你胃旁路手术和改变饮食后 ghrelin和 obestatin的变化；外源性的 ghrelin和 obestatin腹腔注射对DIO小鼠摄食、饮水、体重、血糖、血脂、胰岛素及瘦素等的影响；观察ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞糖脂代谢和增殖的影响。 方法： (1)建立 Wistar大鼠肥胖和肥胖抵抗的模型，将 DIO大鼠随机分为 6组，分别为空腹组、饱食组、自由进食组、改饮食组、迷你胃旁路手术组和假手术组，采用RLA方法
26、测 Wistar大鼠各组外周血中的 obestatin和 ghrelin的水平。采用免疫组化方法测 obestatin和 ghrelin在组织中的表达。 (2)建立 C57BL/6J小鼠的肥胖模型，将肥胖小鼠分 3组：obestatin 组给予 obestatin(10nmol/kg)腹腔注射 7日，每日两次；ghrelin 组给予 ghrelin(20nmol/kg)连续腹腔注射7日，每日两次；生理盐水组给予生理盐水(0.2ml/只)腹腔注射 7天，每日两次。检测给予 obestatin和 ghrelin后进食量，饮水量，体重，血糖及自主活动的变化及对血浆中 leptin、血糖、胰岛素、血脂
27、等指标的影响。 (3)应用不同浓度的 ghrelin(10-710-9mol/l)和 obestatin(10-7-10-9mol/l)干预体外培养的人肝癌 HepG2细胞，葡萄糖氧化酶法测葡萄糖的消耗；采用 Real time PCR技术检测 ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)，脂肪酸合成酶(FAS)，乙酰辅酶 A羧化酶(ACC)和葡萄糖激酶(GK)mRNA的表达，Western blotting 方法检测糖原合成酶(GS)的蛋白表达及对糖原的影响；观察细胞增殖的变化，并检测信号通路抑制剂 ERK特异性的抑制剂PD98059，Rho
28、 激酶抑制剂 Y-27632和 P13K的抑制剂 Wortmannin对 ghrelin或obestatin引起的细胞增殖的影响。 结论： 1)DIO 大鼠外周血 ghrelin水平明显降低，且受短期进食状态和长期能量状态的影响；obestatin 水平的变化与 ghrelin相似。 2)Ghrelin 可以明显增加 DIO小鼠的进食量和体重，并升高血糖、胰岛素和胆固醇水平；obestatin 对上述方面无作用。 3)Ghrelin可以促进 HepG2细胞内糖脂代谢的关键酶的 mRNA表达，并通过抑制糖原合成酶从而抑制糖原的合成。obestatin 在上述方面无明显作用。Ghrelin对 He
29、pG2细胞有促增殖作用，该作用可能与 ERK和 PI3K信号通路有关。Obestatin也有促进 HepG2细胞增殖作用并可能与 PI3K信号通路有关。 总之，本研究发现 obestatin对 DIO小鼠进食量和体重及糖脂代谢无明显作用，对肝细胞糖脂代谢亦无明显影响，提示 obestatin与肥胖的发生无明显关系。因 obestatin与 ghrelin来源于同一前体原，肥胖症中 obestatin水平的异常可能仅仅是 ghrelin异常的一个伴随现象。研究背景： 肥胖症是新世纪全球性的重要健康问题之一，其患病率呈逐渐上升趋势。肥胖者常有胰岛素抵抗，易与糖尿病、血脂异常、冠心病、高血压病等集结
30、出现，是糖尿病、心血管疾病发病的独立危险因素。研究肥胖症及其相关疾病的发生机制与防治，已成为当今医学研究的重点课题。 Ghrelin 是1999年由 Koiima等在寻找生长激素促分泌剂受体(GHSR)的内源性配体时发现的一种由 28个氨基酸构成的多肽。ghrelin 主要通过 NPY/AGRP系统促进摄食，反过来也受进食、食物的影响；ghrelin 水平在肥胖时降低，体重减轻后升高，通过促进摄食、增加体重、促进脂肪合成等参与肥胖的发生发展，在机体减肥过程的代谢调节中起了重要作用，因此认为 ghrelin可能参与了肥胖的病理生理机制。2005 年 11月斯坦福大学 Zhang等推测并证实了 g
31、hrelin的前体preproghrelin除可产生 ghrelin，还可产生另外一种多肽，命名为obestatin。Obestatin 最初的研究发现在机体食欲和体重调节中与 ghrelin的功能完全相反；而且其受体 GPR39与 GHSR亦属于同一家族，提示二者功能的协调发挥是机体调节一些生理功能的一个重要机制。然而，也有研究表明上述结论还有待商榷，认为 obestatin不是 GPR39的配体，外源性 obestatin并不能影响大鼠或小鼠的体重、进食量和生长激素的分泌。我们以前的研究发现肥胖症患者外周血 ghrelin和 obestatin水平均明显低于正常人，进食后进一步降低。本研究
32、主要探讨 ghrelin、obestatin 与肥胖症的关系及对 HepG2细胞的作用。 目的： 探讨饮食诱导肥胖(DIO)大鼠空腹外周血 ghrelin和obestatin的水平，DIO 大鼠在不同摄状态下及通过迷你胃旁路手术和改变饮食后 ghrelin和 obestatin的变化；外源性的 ghrelin和 obestatin腹腔注射对DIO小鼠摄食、饮水、体重、血糖、血脂、胰岛素及瘦素等的影响；观察ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞糖脂代谢和增殖的影响。 方法： (1)建立 Wistar大鼠肥胖和肥胖抵抗的模型，将 DIO大鼠随机分为 6组，分别为空腹组、饱食组、自由
33、进食组、改饮食组、迷你胃旁路手术组和假手术组，采用RLA方法测 Wistar大鼠各组外周血中的 obestatin和 ghrelin的水平。采用免疫组化方法测 obestatin和 ghrelin在组织中的表达。 (2)建立 C57BL/6J小鼠的肥胖模型，将肥胖小鼠分 3组：obestatin 组给予 obestatin(10nmol/kg)腹腔注射 7日，每日两次；ghrelin 组给予 ghrelin(20nmol/kg)连续腹腔注射7日，每日两次；生理盐水组给予生理盐水(0.2ml/只)腹腔注射 7天，每日两次。检测给予 obestatin和 ghrelin后进食量，饮水量，体重，血糖
34、及自主活动的变化及对血浆中 leptin、血糖、胰岛素、血脂等指标的影响。 (3)应用不同浓度的 ghrelin(10-710-9mol/l)和 obestatin(10-7-10-9mol/l)干预体外培养的人肝癌 HepG2细胞，葡萄糖氧化酶法测葡萄糖的消耗；采用 Real time PCR技术检测 ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)，脂肪酸合成酶(FAS)，乙酰辅酶 A羧化酶(ACC)和葡萄糖激酶(GK)mRNA的表达，Western blotting 方法检测糖原合成酶(GS)的蛋白表达及对糖原的影响；观察细胞增殖的变化，并检
35、测信号通路抑制剂 ERK特异性的抑制剂PD98059，Rho 激酶抑制剂 Y-27632和 P13K的抑制剂 Wortmannin对 ghrelin或obestatin引起的细胞增殖的影响。 结论： 1)DIO 大鼠外周血 ghrelin水平明显降低，且受短期进食状态和长期能量状态的影响；obestatin 水平的变化与 ghrelin相似。 2)Ghrelin 可以明显增加 DIO小鼠的进食量和体重，并升高血糖、胰岛素和胆固醇水平；obestatin 对上述方面无作用。 3)Ghrelin可以促进 HepG2细胞内糖脂代谢的关键酶的 mRNA表达，并通过抑制糖原合成酶从而抑制糖原的合成。ob
36、estatin 在上述方面无明显作用。Ghrelin对 HepG2细胞有促增殖作用，该作用可能与 ERK和 PI3K信号通路有关。Obestatin也有促进 HepG2细胞增殖作用并可能与 PI3K信号通路有关。 总之，本研究发现 obestatin对 DIO小鼠进食量和体重及糖脂代谢无明显作用，对肝细胞糖脂代谢亦无明显影响，提示 obestatin与肥胖的发生无明显关系。因 obestatin与 ghrelin来源于同一前体原，肥胖症中 obestatin水平的异常可能仅仅是 ghrelin异常的一个伴随现象。研究背景： 肥胖症是新世纪全球性的重要健康问题之一，其患病率呈逐渐上升趋势。肥胖者
37、常有胰岛素抵抗，易与糖尿病、血脂异常、冠心病、高血压病等集结出现，是糖尿病、心血管疾病发病的独立危险因素。研究肥胖症及其相关疾病的发生机制与防治，已成为当今医学研究的重点课题。 Ghrelin 是1999年由 Koiima等在寻找生长激素促分泌剂受体(GHSR)的内源性配体时发现的一种由 28个氨基酸构成的多肽。ghrelin 主要通过 NPY/AGRP系统促进摄食，反过来也受进食、食物的影响；ghrelin 水平在肥胖时降低，体重减轻后升高，通过促进摄食、增加体重、促进脂肪合成等参与肥胖的发生发展，在机体减肥过程的代谢调节中起了重要作用，因此认为 ghrelin可能参与了肥胖的病理生理机制。
38、2005 年 11月斯坦福大学 Zhang等推测并证实了 ghrelin的前体preproghrelin除可产生 ghrelin，还可产生另外一种多肽，命名为obestatin。Obestatin 最初的研究发现在机体食欲和体重调节中与 ghrelin的功能完全相反；而且其受体 GPR39与 GHSR亦属于同一家族，提示二者功能的协调发挥是机体调节一些生理功能的一个重要机制。然而，也有研究表明上述结论还有待商榷，认为 obestatin不是 GPR39的配体，外源性 obestatin并不能影响大鼠或小鼠的体重、进食量和生长激素的分泌。我们以前的研究发现肥胖症患者外周血 ghrelin和 ob
39、estatin水平均明显低于正常人，进食后进一步降低。本研究主要探讨 ghrelin、obestatin 与肥胖症的关系及对 HepG2细胞的作用。 目的： 探讨饮食诱导肥胖(DIO)大鼠空腹外周血 ghrelin和obestatin的水平，DIO 大鼠在不同摄状态下及通过迷你胃旁路手术和改变饮食后 ghrelin和 obestatin的变化；外源性的 ghrelin和 obestatin腹腔注射对DIO小鼠摄食、饮水、体重、血糖、血脂、胰岛素及瘦素等的影响；观察ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞糖脂代谢和增殖的影响。 方法： (1)建立 Wistar大鼠肥胖和肥胖抵抗的模
40、型，将 DIO大鼠随机分为 6组，分别为空腹组、饱食组、自由进食组、改饮食组、迷你胃旁路手术组和假手术组，采用RLA方法测 Wistar大鼠各组外周血中的 obestatin和 ghrelin的水平。采用免疫组化方法测 obestatin和 ghrelin在组织中的表达。 (2)建立 C57BL/6J小鼠的肥胖模型，将肥胖小鼠分 3组：obestatin 组给予 obestatin(10nmol/kg)腹腔注射 7日，每日两次；ghrelin 组给予 ghrelin(20nmol/kg)连续腹腔注射7日，每日两次；生理盐水组给予生理盐水(0.2ml/只)腹腔注射 7天，每日两次。检测给予 ob
41、estatin和 ghrelin后进食量，饮水量，体重，血糖及自主活动的变化及对血浆中 leptin、血糖、胰岛素、血脂等指标的影响。 (3)应用不同浓度的 ghrelin(10-710-9mol/l)和 obestatin(10-7-10-9mol/l)干预体外培养的人肝癌 HepG2细胞，葡萄糖氧化酶法测葡萄糖的消耗；采用 Real time PCR技术检测 ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)，脂肪酸合成酶(FAS)，乙酰辅酶 A羧化酶(ACC)和葡萄糖激酶(GK)mRNA的表达，Western blotting 方法检测糖原合成
42、酶(GS)的蛋白表达及对糖原的影响；观察细胞增殖的变化，并检测信号通路抑制剂 ERK特异性的抑制剂PD98059，Rho 激酶抑制剂 Y-27632和 P13K的抑制剂 Wortmannin对 ghrelin或obestatin引起的细胞增殖的影响。 结论： 1)DIO 大鼠外周血 ghrelin水平明显降低，且受短期进食状态和长期能量状态的影响；obestatin 水平的变化与 ghrelin相似。 2)Ghrelin 可以明显增加 DIO小鼠的进食量和体重，并升高血糖、胰岛素和胆固醇水平；obestatin 对上述方面无作用。 3)Ghrelin可以促进 HepG2细胞内糖脂代谢的关键酶的
43、 mRNA表达，并通过抑制糖原合成酶从而抑制糖原的合成。obestatin 在上述方面无明显作用。Ghrelin对 HepG2细胞有促增殖作用，该作用可能与 ERK和 PI3K信号通路有关。Obestatin也有促进 HepG2细胞增殖作用并可能与 PI3K信号通路有关。 总之，本研究发现 obestatin对 DIO小鼠进食量和体重及糖脂代谢无明显作用，对肝细胞糖脂代谢亦无明显影响，提示 obestatin与肥胖的发生无明显关系。因 obestatin与 ghrelin来源于同一前体原，肥胖症中 obestatin水平的异常可能仅仅是 ghrelin异常的一个伴随现象。研究背景： 肥胖症是新
44、世纪全球性的重要健康问题之一，其患病率呈逐渐上升趋势。肥胖者常有胰岛素抵抗，易与糖尿病、血脂异常、冠心病、高血压病等集结出现，是糖尿病、心血管疾病发病的独立危险因素。研究肥胖症及其相关疾病的发生机制与防治，已成为当今医学研究的重点课题。 Ghrelin 是1999年由 Koiima等在寻找生长激素促分泌剂受体(GHSR)的内源性配体时发现的一种由 28个氨基酸构成的多肽。ghrelin 主要通过 NPY/AGRP系统促进摄食，反过来也受进食、食物的影响；ghrelin 水平在肥胖时降低，体重减轻后升高，通过促进摄食、增加体重、促进脂肪合成等参与肥胖的发生发展，在机体减肥过程的代谢调节中起了重要
45、作用，因此认为 ghrelin可能参与了肥胖的病理生理机制。2005 年 11月斯坦福大学 Zhang等推测并证实了 ghrelin的前体preproghrelin除可产生 ghrelin，还可产生另外一种多肽，命名为obestatin。Obestatin 最初的研究发现在机体食欲和体重调节中与 ghrelin的功能完全相反；而且其受体 GPR39与 GHSR亦属于同一家族，提示二者功能的协调发挥是机体调节一些生理功能的一个重要机制。然而，也有研究表明上述结论还有待商榷，认为 obestatin不是 GPR39的配体，外源性 obestatin并不能影响大鼠或小鼠的体重、进食量和生长激素的分泌
46、。我们以前的研究发现肥胖症患者外周血 ghrelin和 obestatin水平均明显低于正常人，进食后进一步降低。本研究主要探讨 ghrelin、obestatin 与肥胖症的关系及对 HepG2细胞的作用。 目的： 探讨饮食诱导肥胖(DIO)大鼠空腹外周血 ghrelin和obestatin的水平，DIO 大鼠在不同摄状态下及通过迷你胃旁路手术和改变饮食后 ghrelin和 obestatin的变化；外源性的 ghrelin和 obestatin腹腔注射对DIO小鼠摄食、饮水、体重、血糖、血脂、胰岛素及瘦素等的影响；观察ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞糖脂代谢和增殖的影
47、响。 方法： (1)建立 Wistar大鼠肥胖和肥胖抵抗的模型，将 DIO大鼠随机分为 6组，分别为空腹组、饱食组、自由进食组、改饮食组、迷你胃旁路手术组和假手术组，采用RLA方法测 Wistar大鼠各组外周血中的 obestatin和 ghrelin的水平。采用免疫组化方法测 obestatin和 ghrelin在组织中的表达。 (2)建立 C57BL/6J小鼠的肥胖模型，将肥胖小鼠分 3组：obestatin 组给予 obestatin(10nmol/kg)腹腔注射 7日，每日两次；ghrelin 组给予 ghrelin(20nmol/kg)连续腹腔注射7日，每日两次；生理盐水组给予生理盐
48、水(0.2ml/只)腹腔注射 7天，每日两次。检测给予 obestatin和 ghrelin后进食量，饮水量，体重，血糖及自主活动的变化及对血浆中 leptin、血糖、胰岛素、血脂等指标的影响。 (3)应用不同浓度的 ghrelin(10-710-9mol/l)和 obestatin(10-7-10-9mol/l)干预体外培养的人肝癌 HepG2细胞，葡萄糖氧化酶法测葡萄糖的消耗；采用 Real time PCR技术检测 ghrelin和 obestatin对 HepG2细胞中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)，脂肪酸合成酶(FAS)，乙酰辅酶 A羧化酶(ACC)和葡萄糖激酶(GK)mRN
49、A的表达，Western blotting 方法检测糖原合成酶(GS)的蛋白表达及对糖原的影响；观察细胞增殖的变化，并检测信号通路抑制剂 ERK特异性的抑制剂PD98059，Rho 激酶抑制剂 Y-27632和 P13K的抑制剂 Wortmannin对 ghrelin或obestatin引起的细胞增殖的影响。 结论： 1)DIO 大鼠外周血 ghrelin水平明显降低，且受短期进食状态和长期能量状态的影响；obestatin 水平的变化与 ghrelin相似。 2)Ghrelin 可以明显增加 DIO小鼠的进食量和体重，并升高血糖、胰岛素和胆固醇水平；obestatin 对上述方面无作用。 3)Ghrelin可以促进 HepG2细胞内糖脂代谢的关键酶的 mRNA表达，并通过抑制糖原合成酶从而抑制糖原的合成。obestatin 在上述方面无明显作用。Ghrelin对 HepG2细胞有促增殖作用，该作用可能与 ERK和 PI3K信号通路有关。Obestatin也有促进 HepG2细胞增殖作用并可能与 PI3K信号通路有关。 总之，本研究发现 obestatin对 DIO小鼠进食量和体重及糖
