1、生物化学与分子生物学专业优秀论文 1.人类上游结合因子 hUBF的 DNA 结合结构域（HMG box 5）的晶体结构及其与细胞周期调节因子 TAF1（TBP 相关因子）的相互作用；2.枯草杆菌中 5-氨基酮戊酸脱水酶的初步晶体学与功能的研究关键词：蛋白表达 转录因子 基因调控摘要：1人类上游结合因子 hUBF 的 DNA 结合结构域的晶体结构及其与细胞周期调节因子 TAF1 的相互作用 hUBF HMG box 5 蛋白结构的核心特点：一个 L 型的三段阿尔法螺旋花样和简单的上下拓扑结构。hUBF HMG box 5 蛋白的晶体结构和核磁结构有着相似的折叠方式，但是两者又有着非常明显的不同。
2、两者的表面残基在构象上有着较大的差异，有的高达 9.0 A。这种两个结构的不同反应了 hUBF HMG box5 蛋白的两种潜在的状态。当与 TAF1 蛋白发生相互作用时，hUBF HMG box 5 蛋白的结构就发生了变化，这一点在核磁滴定实验中已经表明。此外，我们证实了 hUBF HMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的直接的相互作用，并提出了 hUBFHMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的可能的相互作用的位点。我们的结果，对于进一步了解 RNA 聚合酶在细胞周期调节中的分子机制提供了信息。2来源于皖南山区的一种新型心脏毒类似蛋白的纯化，鉴定与初步晶体学研究通过两
3、步柱层析方法，从来源于皖南山区的中华眼镜蛇毒腺中纯化获得了一种新型的心脏毒碱性蛋白的类似蛋白，基本的溶血试验表明，此蛋白在没有卵磷脂参与下，不具有直接的溶血活性。在低浓度卵磷脂条件下(0.005-0.1)，能检测到溶血活性，并且随卵磷脂浓度上升而溶血活性下降。此蛋白的致死活性试验表明，CLBPah 毒性强于 CLBP，但是又低于心脏毒蛋白和神经毒蛋白。通过传统的悬滴法，获得了此蛋白的晶体，衍射分辨率达 2.35A，结构正在解析中，如果能获得更全面的序列信息，将能够更深入地了解心脏毒类似碱性蛋白的结构学特性，以及为了解心脏毒蛋白和心脏毒类似碱性蛋白的进化关系提供帮助。 3枯草杆菌中 5-氨基酮戊
4、酸脱水酶的初步晶体学与功能的研究通过传统的悬滴法，在室温条件下，我们获得了枯草杆菌 ALAD 酶的晶体，但衍射能力较差，无论是在本实验室还是在北京高能所，衍射最高分辨率都只能在2.8 A 左右，且镶嵌度很高，在初步获得的晶体结构中，温度因子平均达到 80Alt;#39;2gt;以上，并且在一些重要的环区域的氨基酸电子云密度极差，整体结构显示，晶体有明显缺陷，还需要进一步优化晶体生长，以期获得堆积效果更好的蛋白质晶体。同时，有文献报道，原卟啉九是 ALAD 酶的重要抑制物，考虑到人类一系列与血卟啉相关的疾病都与 ALAD 的酶失活相关，而原卟啉九正是这一代谢途径下游的中间产物，推测原卟啉九可能在
5、此系列疾病中有相关的致病机制，为此，我们还需要获得 ALAD 的酶与原卟啉九的复合物晶体结构。这个酶的最适 pH 范围比较宽，热稳定性较好。测序结果显示的酶活中心含有保守的 Cys 和 His 残基，推测此酶为 Zn 依赖性酶，在酶液中加入 EDTA 后完全丧失酶活，加入 Cult;#39;2gt;和Hglt;#39;2+gt;显著地抑制了酶活，这些都进一步证明枯草杆菌 ALAD 是 Zn 依赖性酶，而Klt;#39;+gt;、Lilt;#39;+gt;、Mglt;#39;2+gt;、Mnlt;#39;2+gt;和Felt;#39;3+gt;都显著地增加了酶活力，表明无论是单价还是三价的金属离
6、子都可以增加该酶活力。由于枯草杆菌 ALAD 是含有 Cys 残基的酶，所以加入 -巯基乙醇后酶活有所增加，但是随着加入的二硫苏糖醇浓度的增大酶活却逐渐减弱，推测它影响酶活中心半胱氨酸和金属离子的结合，这一点与所报道的其它物种的 ALAD 的性质有很大的差别。正文内容1人类上游结合因子 hUBF 的 DNA 结合结构域的晶体结构及其与细胞周期调节因子 TAF1 的相互作用 hUBF HMG box 5 蛋白结构的核心特点：一个 L 型的三段阿尔法螺旋花样和简单的上下拓扑结构。hUBF HMG box 5 蛋白的晶体结构和核磁结构有着相似的折叠方式，但是两者又有着非常明显的不同。两者的表面残基在
7、构象上有着较大的差异，有的高达 9.0 A。这种两个结构的不同反应了 hUBF HMG box5 蛋白的两种潜在的状态。当与 TAF1 蛋白发生相互作用时，hUBF HMG box 5 蛋白的结构就发生了变化，这一点在核磁滴定实验中已经表明。此外，我们证实了 hUBF HMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的直接的相互作用，并提出了 hUBFHMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的可能的相互作用的位点。我们的结果，对于进一步了解 RNA 聚合酶在细胞周期调节中的分子机制提供了信息。2来源于皖南山区的一种新型心脏毒类似蛋白的纯化，鉴定与初步晶体学研究通过两步柱层析方法，从
8、来源于皖南山区的中华眼镜蛇毒腺中纯化获得了一种新型的心脏毒碱性蛋白的类似蛋白，基本的溶血试验表明，此蛋白在没有卵磷脂参与下，不具有直接的溶血活性。在低浓度卵磷脂条件下(0.005-0.1)，能检测到溶血活性，并且随卵磷脂浓度上升而溶血活性下降。此蛋白的致死活性试验表明，CLBPah 毒性强于 CLBP，但是又低于心脏毒蛋白和神经毒蛋白。通过传统的悬滴法，获得了此蛋白的晶体，衍射分辨率达 2.35A，结构正在解析中，如果能获得更全面的序列信息，将能够更深入地了解心脏毒类似碱性蛋白的结构学特性，以及为了解心脏毒蛋白和心脏毒类似碱性蛋白的进化关系提供帮助。 3枯草杆菌中 5-氨基酮戊酸脱水酶的初步晶
9、体学与功能的研究通过传统的悬滴法，在室温条件下，我们获得了枯草杆菌 ALAD 酶的晶体，但衍射能力较差，无论是在本实验室还是在北京高能所，衍射最高分辨率都只能在2.8 A 左右，且镶嵌度很高，在初步获得的晶体结构中，温度因子平均达到 80Alt;#39;2gt;以上，并且在一些重要的环区域的氨基酸电子云密度极差，整体结构显示，晶体有明显缺陷，还需要进一步优化晶体生长，以期获得堆积效果更好的蛋白质晶体。同时，有文献报道，原卟啉九是 ALAD 酶的重要抑制物，考虑到人类一系列与血卟啉相关的疾病都与 ALAD 的酶失活相关，而原卟啉九正是这一代谢途径下游的中间产物，推测原卟啉九可能在此系列疾病中有相
10、关的致病机制，为此，我们还需要获得 ALAD 的酶与原卟啉九的复合物晶体结构。这个酶的最适 pH 范围比较宽，热稳定性较好。测序结果显示的酶活中心含有保守的 Cys 和 His 残基，推测此酶为 Zn 依赖性酶，在酶液中加入 EDTA 后完全丧失酶活，加入 Cult;#39;2gt;和Hglt;#39;2+gt;显著地抑制了酶活，这些都进一步证明枯草杆菌 ALAD 是 Zn 依赖性酶，而Klt;#39;+gt;、Lilt;#39;+gt;、Mglt;#39;2+gt;、Mnlt;#39;2+gt;和Felt;#39;3+gt;都显著地增加了酶活力，表明无论是单价还是三价的金属离子都可以增加该酶
11、活力。由于枯草杆菌 ALAD 是含有 Cys 残基的酶，所以加入 -巯基乙醇后酶活有所增加，但是随着加入的二硫苏糖醇浓度的增大酶活却逐渐减弱，推测它影响酶活中心半胱氨酸和金属离子的结合，这一点与所报道的其它物种的 ALAD 的性质有很大的差别。1人类上游结合因子 hUBF 的 DNA 结合结构域的晶体结构及其与细胞周期调节因子 TAF1 的相互作用 hUBF HMG box 5 蛋白结构的核心特点：一个 L 型的三段阿尔法螺旋花样和简单的上下拓扑结构。hUBF HMG box 5 蛋白的晶体结构和核磁结构有着相似的折叠方式，但是两者又有着非常明显的不同。两者的表面残基在构象上有着较大的差异，有
12、的高达 9.0 A。这种两个结构的不同反应了hUBF HMG box5 蛋白的两种潜在的状态。当与 TAF1 蛋白发生相互作用时，hUBF HMG box 5 蛋白的结构就发生了变化，这一点在核磁滴定实验中已经表明。此外，我们证实了 hUBF HMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的直接的相互作用，并提出了 hUBFHMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的可能的相互作用的位点。我们的结果，对于进一步了解 RNA 聚合酶在细胞周期调节中的分子机制提供了信息。 2来源于皖南山区的一种新型心脏毒类似蛋白的纯化，鉴定与初步晶体学研究通过两步柱层析方法，从来源于皖南山区的中华眼镜
13、蛇毒腺中纯化获得了一种新型的心脏毒碱性蛋白的类似蛋白，基本的溶血试验表明，此蛋白在没有卵磷脂参与下，不具有直接的溶血活性。在低浓度卵磷脂条件下(0.005-0.1)，能检测到溶血活性，并且随卵磷脂浓度上升而溶血活性下降。此蛋白的致死活性试验表明，CLBPah 毒性强于 CLBP，但是又低于心脏毒蛋白和神经毒蛋白。通过传统的悬滴法，获得了此蛋白的晶体，衍射分辨率达 2.35A，结构正在解析中，如果能获得更全面的序列信息，将能够更深入地了解心脏毒类似碱性蛋白的结构学特性，以及为了解心脏毒蛋白和心脏毒类似碱性蛋白的进化关系提供帮助。 3枯草杆菌中 5-氨基酮戊酸脱水酶的初步晶体学与功能的研究通过传统
14、的悬滴法，在室温条件下，我们获得了枯草杆菌 ALAD 酶的晶体，但衍射能力较差，无论是在本实验室还是在北京高能所，衍射最高分辨率都只能在2.8 A 左右，且镶嵌度很高，在初步获得的晶体结构中，温度因子平均达到 80Alt;#39;2gt;以上，并且在一些重要的环区域的氨基酸电子云密度极差，整体结构显示，晶体有明显缺陷，还需要进一步优化晶体生长，以期获得堆积效果更好的蛋白质晶体。同时，有文献报道，原卟啉九是 ALAD 酶的重要抑制物，考虑到人类一系列与血卟啉相关的疾病都与 ALAD 的酶失活相关，而原卟啉九正是这一代谢途径下游的中间产物，推测原卟啉九可能在此系列疾病中有相关的致病机制，为此，我们
15、还需要获得 ALAD 的酶与原卟啉九的复合物晶体结构。这个酶的最适 pH 范围比较宽，热稳定性较好。测序结果显示的酶活中心含有保守的 Cys 和 His 残基，推测此酶为 Zn 依赖性酶，在酶液中加入 EDTA 后完全丧失酶活，加入 Cult;#39;2gt;和Hglt;#39;2+gt;显著地抑制了酶活，这些都进一步证明枯草杆菌 ALAD 是 Zn 依赖性酶，而Klt;#39;+gt;、Lilt;#39;+gt;、Mglt;#39;2+gt;、Mnlt;#39;2+gt;和Felt;#39;3+gt;都显著地增加了酶活力，表明无论是单价还是三价的金属离子都可以增加该酶活力。由于枯草杆菌 AL
16、AD 是含有 Cys 残基的酶，所以加入 -巯基乙醇后酶活有所增加，但是随着加入的二硫苏糖醇浓度的增大酶活却逐渐减弱，推测它影响酶活中心半胱氨酸和金属离子的结合，这一点与所报道的其它物种的 ALAD 的性质有很大的差别。1人类上游结合因子 hUBF 的 DNA 结合结构域的晶体结构及其与细胞周期调节因子 TAF1 的相互作用 hUBF HMG box 5 蛋白结构的核心特点：一个 L 型的三段阿尔法螺旋花样和简单的上下拓扑结构。hUBF HMG box 5 蛋白的晶体结构和核磁结构有着相似的折叠方式，但是两者又有着非常明显的不同。两者的表面残基在构象上有着较大的差异，有的高达 9.0 A。这种
17、两个结构的不同反应了hUBF HMG box5 蛋白的两种潜在的状态。当与 TAF1 蛋白发生相互作用时，hUBF HMG box 5 蛋白的结构就发生了变化，这一点在核磁滴定实验中已经表明。此外，我们证实了 hUBF HMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的直接的相互作用，并提出了 hUBFHMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的可能的相互作用的位点。我们的结果，对于进一步了解 RNA 聚合酶在细胞周期调节中的分子机制提供了信息。 2来源于皖南山区的一种新型心脏毒类似蛋白的纯化，鉴定与初步晶体学研究通过两步柱层析方法，从来源于皖南山区的中华眼镜蛇毒腺中纯化获得了一种新
18、型的心脏毒碱性蛋白的类似蛋白，基本的溶血试验表明，此蛋白在没有卵磷脂参与下，不具有直接的溶血活性。在低浓度卵磷脂条件下(0.005-0.1)，能检测到溶血活性，并且随卵磷脂浓度上升而溶血活性下降。此蛋白的致死活性试验表明，CLBPah 毒性强于 CLBP，但是又低于心脏毒蛋白和神经毒蛋白。通过传统的悬滴法，获得了此蛋白的晶体，衍射分辨率达 2.35A，结构正在解析中，如果能获得更全面的序列信息，将能够更深入地了解心脏毒类似碱性蛋白的结构学特性，以及为了解心脏毒蛋白和心脏毒类似碱性蛋白的进化关系提供帮助。 3枯草杆菌中 5-氨基酮戊酸脱水酶的初步晶体学与功能的研究通过传统的悬滴法，在室温条件下，
19、我们获得了枯草杆菌 ALAD 酶的晶体，但衍射能力较差，无论是在本实验室还是在北京高能所，衍射最高分辨率都只能在2.8 A 左右，且镶嵌度很高，在初步获得的晶体结构中，温度因子平均达到 80Alt;#39;2gt;以上，并且在一些重要的环区域的氨基酸电子云密度极差，整体结构显示，晶体有明显缺陷，还需要进一步优化晶体生长，以期获得堆积效果更好的蛋白质晶体。同时，有文献报道，原卟啉九是 ALAD 酶的重要抑制物，考虑到人类一系列与血卟啉相关的疾病都与 ALAD 的酶失活相关，而原卟啉九正是这一代谢途径下游的中间产物，推测原卟啉九可能在此系列疾病中有相关的致病机制，为此，我们还需要获得 ALAD 的
20、酶与原卟啉九的复合物晶体结构。这个酶的最适 pH 范围比较宽，热稳定性较好。测序结果显示的酶活中心含有保守的 Cys 和 His 残基，推测此酶为 Zn 依赖性酶，在酶液中加入 EDTA 后完全丧失酶活，加入 Cult;#39;2gt;和Hglt;#39;2+gt;显著地抑制了酶活，这些都进一步证明枯草杆菌 ALAD 是 Zn 依赖性酶，而Klt;#39;+gt;、Lilt;#39;+gt;、Mglt;#39;2+gt;、Mnlt;#39;2+gt;和Felt;#39;3+gt;都显著地增加了酶活力，表明无论是单价还是三价的金属离子都可以增加该酶活力。由于枯草杆菌 ALAD 是含有 Cys 残
21、基的酶，所以加入 -巯基乙醇后酶活有所增加，但是随着加入的二硫苏糖醇浓度的增大酶活却逐渐减弱，推测它影响酶活中心半胱氨酸和金属离子的结合，这一点与所报道的其它物种的 ALAD 的性质有很大的差别。1人类上游结合因子 hUBF 的 DNA 结合结构域的晶体结构及其与细胞周期调节因子 TAF1 的相互作用 hUBF HMG box 5 蛋白结构的核心特点：一个 L 型的三段阿尔法螺旋花样和简单的上下拓扑结构。hUBF HMG box 5 蛋白的晶体结构和核磁结构有着相似的折叠方式，但是两者又有着非常明显的不同。两者的表面残基在构象上有着较大的差异，有的高达 9.0 A。这种两个结构的不同反应了hU
22、BF HMG box5 蛋白的两种潜在的状态。当与 TAF1 蛋白发生相互作用时，hUBF HMG box 5 蛋白的结构就发生了变化，这一点在核磁滴定实验中已经表明。此外，我们证实了 hUBF HMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的直接的相互作用，并提出了 hUBFHMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的可能的相互作用的位点。我们的结果，对于进一步了解 RNA 聚合酶在细胞周期调节中的分子机制提供了信息。 2来源于皖南山区的一种新型心脏毒类似蛋白的纯化，鉴定与初步晶体学研究通过两步柱层析方法，从来源于皖南山区的中华眼镜蛇毒腺中纯化获得了一种新型的心脏毒碱性蛋白的类似
23、蛋白，基本的溶血试验表明，此蛋白在没有卵磷脂参与下，不具有直接的溶血活性。在低浓度卵磷脂条件下(0.005-0.1)，能检测到溶血活性，并且随卵磷脂浓度上升而溶血活性下降。此蛋白的致死活性试验表明，CLBPah 毒性强于 CLBP，但是又低于心脏毒蛋白和神经毒蛋白。通过传统的悬滴法，获得了此蛋白的晶体，衍射分辨率达 2.35A，结构正在解析中，如果能获得更全面的序列信息，将能够更深入地了解心脏毒类似碱性蛋白的结构学特性，以及为了解心脏毒蛋白和心脏毒类似碱性蛋白的进化关系提供帮助。 3枯草杆菌中 5-氨基酮戊酸脱水酶的初步晶体学与功能的研究通过传统的悬滴法，在室温条件下，我们获得了枯草杆菌 AL
24、AD 酶的晶体，但衍射能力较差，无论是在本实验室还是在北京高能所，衍射最高分辨率都只能在2.8 A 左右，且镶嵌度很高，在初步获得的晶体结构中，温度因子平均达到 80Alt;#39;2gt;以上，并且在一些重要的环区域的氨基酸电子云密度极差，整体结构显示，晶体有明显缺陷，还需要进一步优化晶体生长，以期获得堆积效果更好的蛋白质晶体。同时，有文献报道，原卟啉九是 ALAD 酶的重要抑制物，考虑到人类一系列与血卟啉相关的疾病都与 ALAD 的酶失活相关，而原卟啉九正是这一代谢途径下游的中间产物，推测原卟啉九可能在此系列疾病中有相关的致病机制，为此，我们还需要获得 ALAD 的酶与原卟啉九的复合物晶体
25、结构。这个酶的最适 pH 范围比较宽，热稳定性较好。测序结果显示的酶活中心含有保守的 Cys 和 His 残基，推测此酶为 Zn 依赖性酶，在酶液中加入 EDTA 后完全丧失酶活，加入 Cult;#39;2gt;和Hglt;#39;2+gt;显著地抑制了酶活，这些都进一步证明枯草杆菌 ALAD 是 Zn 依赖性酶，而Klt;#39;+gt;、Lilt;#39;+gt;、Mglt;#39;2+gt;、Mnlt;#39;2+gt;和Felt;#39;3+gt;都显著地增加了酶活力，表明无论是单价还是三价的金属离子都可以增加该酶活力。由于枯草杆菌 ALAD 是含有 Cys 残基的酶，所以加入 -巯基
26、乙醇后酶活有所增加，但是随着加入的二硫苏糖醇浓度的增大酶活却逐渐减弱，推测它影响酶活中心半胱氨酸和金属离子的结合，这一点与所报道的其它物种的 ALAD 的性质有很大的差别。1人类上游结合因子 hUBF 的 DNA 结合结构域的晶体结构及其与细胞周期调节因子 TAF1 的相互作用 hUBF HMG box 5 蛋白结构的核心特点：一个 L 型的三段阿尔法螺旋花样和简单的上下拓扑结构。hUBF HMG box 5 蛋白的晶体结构和核磁结构有着相似的折叠方式，但是两者又有着非常明显的不同。两者的表面残基在构象上有着较大的差异，有的高达 9.0 A。这种两个结构的不同反应了hUBF HMG box5
27、蛋白的两种潜在的状态。当与 TAF1 蛋白发生相互作用时，hUBF HMG box 5 蛋白的结构就发生了变化，这一点在核磁滴定实验中已经表明。此外，我们证实了 hUBF HMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的直接的相互作用，并提出了 hUBFHMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的可能的相互作用的位点。我们的结果，对于进一步了解 RNA 聚合酶在细胞周期调节中的分子机制提供了信息。 2来源于皖南山区的一种新型心脏毒类似蛋白的纯化，鉴定与初步晶体学研究通过两步柱层析方法，从来源于皖南山区的中华眼镜蛇毒腺中纯化获得了一种新型的心脏毒碱性蛋白的类似蛋白，基本的溶血试验表明
28、，此蛋白在没有卵磷脂参与下，不具有直接的溶血活性。在低浓度卵磷脂条件下(0.005-0.1)，能检测到溶血活性，并且随卵磷脂浓度上升而溶血活性下降。此蛋白的致死活性试验表明，CLBPah 毒性强于 CLBP，但是又低于心脏毒蛋白和神经毒蛋白。通过传统的悬滴法，获得了此蛋白的晶体，衍射分辨率达 2.35A，结构正在解析中，如果能获得更全面的序列信息，将能够更深入地了解心脏毒类似碱性蛋白的结构学特性，以及为了解心脏毒蛋白和心脏毒类似碱性蛋白的进化关系提供帮助。 3枯草杆菌中 5-氨基酮戊酸脱水酶的初步晶体学与功能的研究通过传统的悬滴法，在室温条件下，我们获得了枯草杆菌 ALAD 酶的晶体，但衍射能
29、力较差，无论是在本实验室还是在北京高能所，衍射最高分辨率都只能在2.8 A 左右，且镶嵌度很高，在初步获得的晶体结构中，温度因子平均达到 80Alt;#39;2gt;以上，并且在一些重要的环区域的氨基酸电子云密度极差，整体结构显示，晶体有明显缺陷，还需要进一步优化晶体生长，以期获得堆积效果更好的蛋白质晶体。同时，有文献报道，原卟啉九是 ALAD 酶的重要抑制物，考虑到人类一系列与血卟啉相关的疾病都与 ALAD 的酶失活相关，而原卟啉九正是这一代谢途径下游的中间产物，推测原卟啉九可能在此系列疾病中有相关的致病机制，为此，我们还需要获得 ALAD 的酶与原卟啉九的复合物晶体结构。这个酶的最适 pH
30、 范围比较宽，热稳定性较好。测序结果显示的酶活中心含有保守的 Cys 和 His 残基，推测此酶为 Zn 依赖性酶，在酶液中加入 EDTA 后完全丧失酶活，加入 Cult;#39;2gt;和Hglt;#39;2+gt;显著地抑制了酶活，这些都进一步证明枯草杆菌 ALAD 是 Zn 依赖性酶，而Klt;#39;+gt;、Lilt;#39;+gt;、Mglt;#39;2+gt;、Mnlt;#39;2+gt;和Felt;#39;3+gt;都显著地增加了酶活力，表明无论是单价还是三价的金属离子都可以增加该酶活力。由于枯草杆菌 ALAD 是含有 Cys 残基的酶，所以加入 -巯基乙醇后酶活有所增加，但是
31、随着加入的二硫苏糖醇浓度的增大酶活却逐渐减弱，推测它影响酶活中心半胱氨酸和金属离子的结合，这一点与所报道的其它物种的 ALAD 的性质有很大的差别。1人类上游结合因子 hUBF 的 DNA 结合结构域的晶体结构及其与细胞周期调节因子 TAF1 的相互作用 hUBF HMG box 5 蛋白结构的核心特点：一个 L 型的三段阿尔法螺旋花样和简单的上下拓扑结构。hUBF HMG box 5 蛋白的晶体结构和核磁结构有着相似的折叠方式，但是两者又有着非常明显的不同。两者的表面残基在构象上有着较大的差异，有的高达 9.0 A。这种两个结构的不同反应了hUBF HMG box5 蛋白的两种潜在的状态。当
32、与 TAF1 蛋白发生相互作用时，hUBF HMG box 5 蛋白的结构就发生了变化，这一点在核磁滴定实验中已经表明。此外，我们证实了 hUBF HMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的直接的相互作用，并提出了 hUBFHMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的可能的相互作用的位点。我们的结果，对于进一步了解 RNA 聚合酶在细胞周期调节中的分子机制提供了信息。 2来源于皖南山区的一种新型心脏毒类似蛋白的纯化，鉴定与初步晶体学研究通过两步柱层析方法，从来源于皖南山区的中华眼镜蛇毒腺中纯化获得了一种新型的心脏毒碱性蛋白的类似蛋白，基本的溶血试验表明，此蛋白在没有卵磷脂参与
33、下，不具有直接的溶血活性。在低浓度卵磷脂条件下(0.005-0.1)，能检测到溶血活性，并且随卵磷脂浓度上升而溶血活性下降。此蛋白的致死活性试验表明，CLBPah 毒性强于 CLBP，但是又低于心脏毒蛋白和神经毒蛋白。通过传统的悬滴法，获得了此蛋白的晶体，衍射分辨率达 2.35A，结构正在解析中，如果能获得更全面的序列信息，将能够更深入地了解心脏毒类似碱性蛋白的结构学特性，以及为了解心脏毒蛋白和心脏毒类似碱性蛋白的进化关系提供帮助。 3枯草杆菌中 5-氨基酮戊酸脱水酶的初步晶体学与功能的研究通过传统的悬滴法，在室温条件下，我们获得了枯草杆菌 ALAD 酶的晶体，但衍射能力较差，无论是在本实验室
34、还是在北京高能所，衍射最高分辨率都只能在2.8 A 左右，且镶嵌度很高，在初步获得的晶体结构中，温度因子平均达到 80Alt;#39;2gt;以上，并且在一些重要的环区域的氨基酸电子云密度极差，整体结构显示，晶体有明显缺陷，还需要进一步优化晶体生长，以期获得堆积效果更好的蛋白质晶体。同时，有文献报道，原卟啉九是 ALAD 酶的重要抑制物，考虑到人类一系列与血卟啉相关的疾病都与 ALAD 的酶失活相关，而原卟啉九正是这一代谢途径下游的中间产物，推测原卟啉九可能在此系列疾病中有相关的致病机制，为此，我们还需要获得 ALAD 的酶与原卟啉九的复合物晶体结构。这个酶的最适 pH 范围比较宽，热稳定性较
35、好。测序结果显示的酶活中心含有保守的 Cys 和 His 残基，推测此酶为 Zn 依赖性酶，在酶液中加入 EDTA 后完全丧失酶活，加入 Cult;#39;2gt;和Hglt;#39;2+gt;显著地抑制了酶活，这些都进一步证明枯草杆菌 ALAD 是 Zn 依赖性酶，而Klt;#39;+gt;、Lilt;#39;+gt;、Mglt;#39;2+gt;、Mnlt;#39;2+gt;和Felt;#39;3+gt;都显著地增加了酶活力，表明无论是单价还是三价的金属离子都可以增加该酶活力。由于枯草杆菌 ALAD 是含有 Cys 残基的酶，所以加入 -巯基乙醇后酶活有所增加，但是随着加入的二硫苏糖醇浓度
36、的增大酶活却逐渐减弱，推测它影响酶活中心半胱氨酸和金属离子的结合，这一点与所报道的其它物种的 ALAD 的性质有很大的差别。1人类上游结合因子 hUBF 的 DNA 结合结构域的晶体结构及其与细胞周期调节因子 TAF1 的相互作用 hUBF HMG box 5 蛋白结构的核心特点：一个 L 型的三段阿尔法螺旋花样和简单的上下拓扑结构。hUBF HMG box 5 蛋白的晶体结构和核磁结构有着相似的折叠方式，但是两者又有着非常明显的不同。两者的表面残基在构象上有着较大的差异，有的高达 9.0 A。这种两个结构的不同反应了hUBF HMG box5 蛋白的两种潜在的状态。当与 TAF1 蛋白发生相
37、互作用时，hUBF HMG box 5 蛋白的结构就发生了变化，这一点在核磁滴定实验中已经表明。此外，我们证实了 hUBF HMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的直接的相互作用，并提出了 hUBFHMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的可能的相互作用的位点。我们的结果，对于进一步了解 RNA 聚合酶在细胞周期调节中的分子机制提供了信息。 2来源于皖南山区的一种新型心脏毒类似蛋白的纯化，鉴定与初步晶体学研究通过两步柱层析方法，从来源于皖南山区的中华眼镜蛇毒腺中纯化获得了一种新型的心脏毒碱性蛋白的类似蛋白，基本的溶血试验表明，此蛋白在没有卵磷脂参与下，不具有直接的溶血活性
38、。在低浓度卵磷脂条件下(0.005-0.1)，能检测到溶血活性，并且随卵磷脂浓度上升而溶血活性下降。此蛋白的致死活性试验表明，CLBPah 毒性强于 CLBP，但是又低于心脏毒蛋白和神经毒蛋白。通过传统的悬滴法，获得了此蛋白的晶体，衍射分辨率达 2.35A，结构正在解析中，如果能获得更全面的序列信息，将能够更深入地了解心脏毒类似碱性蛋白的结构学特性，以及为了解心脏毒蛋白和心脏毒类似碱性蛋白的进化关系提供帮助。 3枯草杆菌中 5-氨基酮戊酸脱水酶的初步晶体学与功能的研究通过传统的悬滴法，在室温条件下，我们获得了枯草杆菌 ALAD 酶的晶体，但衍射能力较差，无论是在本实验室还是在北京高能所，衍射最
39、高分辨率都只能在2.8 A 左右，且镶嵌度很高，在初步获得的晶体结构中，温度因子平均达到 80Alt;#39;2gt;以上，并且在一些重要的环区域的氨基酸电子云密度极差，整体结构显示，晶体有明显缺陷，还需要进一步优化晶体生长，以期获得堆积效果更好的蛋白质晶体。同时，有文献报道，原卟啉九是 ALAD 酶的重要抑制物，考虑到人类一系列与血卟啉相关的疾病都与 ALAD 的酶失活相关，而原卟啉九正是这一代谢途径下游的中间产物，推测原卟啉九可能在此系列疾病中有相关的致病机制，为此，我们还需要获得 ALAD 的酶与原卟啉九的复合物晶体结构。这个酶的最适 pH 范围比较宽，热稳定性较好。测序结果显示的酶活中
40、心含有保守的 Cys 和 His 残基，推测此酶为 Zn 依赖性酶，在酶液中加入 EDTA 后完全丧失酶活，加入 Cult;#39;2gt;和Hglt;#39;2+gt;显著地抑制了酶活，这些都进一步证明枯草杆菌 ALAD 是 Zn 依赖性酶，而Klt;#39;+gt;、Lilt;#39;+gt;、Mglt;#39;2+gt;、Mnlt;#39;2+gt;和Felt;#39;3+gt;都显著地增加了酶活力，表明无论是单价还是三价的金属离子都可以增加该酶活力。由于枯草杆菌 ALAD 是含有 Cys 残基的酶，所以加入 -巯基乙醇后酶活有所增加，但是随着加入的二硫苏糖醇浓度的增大酶活却逐渐减弱，推
41、测它影响酶活中心半胱氨酸和金属离子的结合，这一点与所报道的其它物种的 ALAD 的性质有很大的差别。1人类上游结合因子 hUBF 的 DNA 结合结构域的晶体结构及其与细胞周期调节因子 TAF1 的相互作用 hUBF HMG box 5 蛋白结构的核心特点：一个 L 型的三段阿尔法螺旋花样和简单的上下拓扑结构。hUBF HMG box 5 蛋白的晶体结构和核磁结构有着相似的折叠方式，但是两者又有着非常明显的不同。两者的表面残基在构象上有着较大的差异，有的高达 9.0 A。这种两个结构的不同反应了hUBF HMG box5 蛋白的两种潜在的状态。当与 TAF1 蛋白发生相互作用时，hUBF HM
42、G box 5 蛋白的结构就发生了变化，这一点在核磁滴定实验中已经表明。此外，我们证实了 hUBF HMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的直接的相互作用，并提出了 hUBFHMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的可能的相互作用的位点。我们的结果，对于进一步了解 RNA 聚合酶在细胞周期调节中的分子机制提供了信息。 2来源于皖南山区的一种新型心脏毒类似蛋白的纯化，鉴定与初步晶体学研究通过两步柱层析方法，从来源于皖南山区的中华眼镜蛇毒腺中纯化获得了一种新型的心脏毒碱性蛋白的类似蛋白，基本的溶血试验表明，此蛋白在没有卵磷脂参与下，不具有直接的溶血活性。在低浓度卵磷脂条件下(
43、0.005-0.1)，能检测到溶血活性，并且随卵磷脂浓度上升而溶血活性下降。此蛋白的致死活性试验表明，CLBPah 毒性强于 CLBP，但是又低于心脏毒蛋白和神经毒蛋白。通过传统的悬滴法，获得了此蛋白的晶体，衍射分辨率达 2.35A，结构正在解析中，如果能获得更全面的序列信息，将能够更深入地了解心脏毒类似碱性蛋白的结构学特性，以及为了解心脏毒蛋白和心脏毒类似碱性蛋白的进化关系提供帮助。 3枯草杆菌中 5-氨基酮戊酸脱水酶的初步晶体学与功能的研究通过传统的悬滴法，在室温条件下，我们获得了枯草杆菌 ALAD 酶的晶体，但衍射能力较差，无论是在本实验室还是在北京高能所，衍射最高分辨率都只能在2.8
44、A 左右，且镶嵌度很高，在初步获得的晶体结构中，温度因子平均达到 80Alt;#39;2gt;以上，并且在一些重要的环区域的氨基酸电子云密度极差，整体结构显示，晶体有明显缺陷，还需要进一步优化晶体生长，以期获得堆积效果更好的蛋白质晶体。同时，有文献报道，原卟啉九是 ALAD 酶的重要抑制物，考虑到人类一系列与血卟啉相关的疾病都与 ALAD 的酶失活相关，而原卟啉九正是这一代谢途径下游的中间产物，推测原卟啉九可能在此系列疾病中有相关的致病机制，为此，我们还需要获得 ALAD 的酶与原卟啉九的复合物晶体结构。这个酶的最适 pH 范围比较宽，热稳定性较好。测序结果显示的酶活中心含有保守的 Cys 和
45、 His 残基，推测此酶为 Zn 依赖性酶，在酶液中加入 EDTA 后完全丧失酶活，加入 Cult;#39;2gt;和Hglt;#39;2+gt;显著地抑制了酶活，这些都进一步证明枯草杆菌 ALAD 是 Zn 依赖性酶，而Klt;#39;+gt;、Lilt;#39;+gt;、Mglt;#39;2+gt;、Mnlt;#39;2+gt;和Felt;#39;3+gt;都显著地增加了酶活力，表明无论是单价还是三价的金属离子都可以增加该酶活力。由于枯草杆菌 ALAD 是含有 Cys 残基的酶，所以加入 -巯基乙醇后酶活有所增加，但是随着加入的二硫苏糖醇浓度的增大酶活却逐渐减弱，推测它影响酶活中心半胱氨酸
46、和金属离子的结合，这一点与所报道的其它物种的 ALAD 的性质有很大的差别。1人类上游结合因子 hUBF 的 DNA 结合结构域的晶体结构及其与细胞周期调节因子 TAF1 的相互作用 hUBF HMG box 5 蛋白结构的核心特点：一个 L 型的三段阿尔法螺旋花样和简单的上下拓扑结构。hUBF HMG box 5 蛋白的晶体结构和核磁结构有着相似的折叠方式，但是两者又有着非常明显的不同。两者的表面残基在构象上有着较大的差异，有的高达 9.0 A。这种两个结构的不同反应了hUBF HMG box5 蛋白的两种潜在的状态。当与 TAF1 蛋白发生相互作用时，hUBF HMG box 5 蛋白的结
47、构就发生了变化，这一点在核磁滴定实验中已经表明。此外，我们证实了 hUBF HMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的直接的相互作用，并提出了 hUBFHMG box 5 蛋白与 TAF1-bm1 蛋白的可能的相互作用的位点。我们的结果，对于进一步了解 RNA 聚合酶在细胞周期调节中的分子机制提供了信息。 2来源于皖南山区的一种新型心脏毒类似蛋白的纯化，鉴定与初步晶体学研究通过两步柱层析方法，从来源于皖南山区的中华眼镜蛇毒腺中纯化获得了一种新型的心脏毒碱性蛋白的类似蛋白，基本的溶血试验表明，此蛋白在没有卵磷脂参与下，不具有直接的溶血活性。在低浓度卵磷脂条件下(0.005-0.1)，能
48、检测到溶血活性，并且随卵磷脂浓度上升而溶血活性下降。此蛋白的致死活性试验表明，CLBPah 毒性强于 CLBP，但是又低于心脏毒蛋白和神经毒蛋白。通过传统的悬滴法，获得了此蛋白的晶体，衍射分辨率达 2.35A，结构正在解析中，如果能获得更全面的序列信息，将能够更深入地了解心脏毒类似碱性蛋白的结构学特性，以及为了解心脏毒蛋白和心脏毒类似碱性蛋白的进化关系提供帮助。 3枯草杆菌中 5-氨基酮戊酸脱水酶的初步晶体学与功能的研究通过传统的悬滴法，在室温条件下，我们获得了枯草杆菌 ALAD 酶的晶体，但衍射能力较差，无论是在本实验室还是在北京高能所，衍射最高分辨率都只能在2.8 A 左右，且镶嵌度很高，
49、在初步获得的晶体结构中，温度因子平均达到 80Alt;#39;2gt;以上，并且在一些重要的环区域的氨基酸电子云密度极差，整体结构显示，晶体有明显缺陷，还需要进一步优化晶体生长，以期获得堆积效果更好的蛋白质晶体。同时，有文献报道，原卟啉九是 ALAD 酶的重要抑制物，考虑到人类一系列与血卟啉相关的疾病都与 ALAD 的酶失活相关，而原卟啉九正是这一代谢途径下游的中间产物，推测原卟啉九可能在此系列疾病中有相关的致病机制，为此，我们还需要获得 ALAD 的酶与原卟啉九的复合物晶体结构。这个酶的最适 pH 范围比较宽，热稳定性较好。测序结果显示的酶活中心含有保守的 Cys 和 His 残基，推测此酶为 Zn 依赖性酶，在酶液中加入 EDTA 后完全丧失酶活，加入 Cult;#39;2gt;和Hglt;#39;2+gt;显著地抑制了酶活，这些都进一步证明枯草杆菌 ALAD 是 Zn 依赖性酶，而Klt;#39;+gt;、Lilt;#39;+gt;、Mglt;#39;2+gt;、Mnlt;#39;2+gt;和Felt;#39;3+gt;都显著地增加了酶活力，表明无论是单价还是三价的金属离子都可以增加该酶活力。由于枯草杆菌 ALAD 是含有 Cys 残基的酶，所
