1、葛 黄 颗 粒 水 提 取 工 艺 研 究2016-12-26 14:17:44 云南中医中药杂志 2016 年 11 期陈玉兰+蒲清荣+魏嵋+沈宏萍+ 赵剑+罗群摘要：目的优选葛黄颗粒水提取工艺。方法以水提取物中有效组分多糖为指标，采用苯酚-硫酸法测定多糖的含量，运用正交设计法优选葛黄颗粒水提取工艺。结果葛黄颗粒的最佳水提取工艺为加 12 倍量水浸泡 1 h，煎煮 3 次，每次煎煮 1 h。结论采用该水提工艺提取，水提取物中多糖的收率较高且稳定。关键词：水提取工艺；正交设计；多糖中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2016）11-0079-02葛黄颗粒是本院自
2、制的复方中药制剂，具有醒酒解毒、健脾疏肝、清热利湿之功效，具有良好的解酒、保肝和降脂作用。处方含茯苓、党参、柴胡等中药均含有多糖，多糖具有解酒、保肝等药理作用且易溶于水，所以采用煎煮法提取。用苯酚硫酸法测定多糖的含量，采用正交设计优选最佳水提取工艺。1 实验部分仪器与材料：HH-S8 水浴锅；JA203H 天平；AUW120D 精密天平；754 型紫外可见分光；JPCT0328 超声机； D-无水葡萄糖（批号 110833-201205，供含量测定用，中国食品药品检定研究院）；苯酚（分析纯）；硫酸（分析纯）；多效蒸馏水（西南医科大学附属中医医院制剂室）。2 方法与结果2.1 正交试验样品的制备
3、选择加水量、浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数为因素，选用 L9（34）因素水平表安排正交试验。按 1/2 处方准确称取 9 份样品，每份 85 g，按表 1 中 9 种工艺条件组合进行水提取法提取，提取液水浴浓缩成干浸膏备用。2.2 正交试验样品中总多糖含量测定2.2.1 干浸膏收率的测定取正交试验浸膏，水浴蒸干，105烘至恒重，精密称定，计算干浸膏收率，结果见表 3。2.2.2 对照品溶液的配制精密称取 105干燥至恒重的无水葡萄糖对照品 18.9 mg，加水使之溶解于 100 mL 量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得浓度为 0.189 mg/ml 的葡萄糖对照品溶液。2.2.35%苯酚溶液的配制取
4、苯酚 100 g，加铝粉 100 mg，碳酸氢钠 50 mg，蒸馏收集 182馏分，取馏分 5 g，加水至 100 mL，摇匀，置棕色瓶中备用。2.2.4 供试品溶液的制备精密称取干浸膏粉 0.05 g，精密加入 50 mL 蒸馏水，超声提取 30 min，滤过，取续滤液，即得。2.2.5 硫酸用量的选择精密吸取供试品溶液 0.1 mL 3 份，分别置于 10 mL 试管中，加水使成2.0mL，各精密加入 5%苯酚 1.0 mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸 5.0、6.0、7.0 mL，摇匀，放置 30 min 冷却后，在分光光度仪上 490 nm 处测定吸光度值，为 0.309，0.308，0.3
5、10 。结果表明：浓硫酸用量为 5.0 mL 时，反应即可完全。2.2.6 试验温度的选择精密吸取供试品溶液各 0.1 mL，分别置 10 mL 试管中，加水使成 2.0 mL，各精密加入 5%苯酚 1.0 mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸 5.0 mL，摇匀，分为 3 组：室温放置 30 min； 40保温 30 min，放冷至室温；置沸水浴中加热 25 min，再放于冰水浴中 15 min。分别在490 nm 处测定吸光度值，分别为 0.311，0.322，0.336 。实验结果表明：置沸水浴中加热 25 min，再放于冰水浴中 15 min 较其他方法反应完全。2.2.7 葡萄糖标准曲线的制备
6、精密吸取葡萄糖对照品溶液 0.1， 0.2，0.4 ，0.8，1.0 mL 分别置10 mL 试管中，加水使成 2.0 mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸 5.0 mL，摇匀，置沸水浴中加热 25 min，再放于冰水浴中 15 min，取出。在 490 nm 处测定吸光度值，分别测得吸光度值为0.124， 0.233， 0.489，0.977， 1.186。以葡萄糖对照品溶液的质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，建立标准曲线。葡萄糖标准曲线回归方程为：Y=6.3289X+0.0037 （r=0.9993），葡萄糖在 0.0189 mg 0.189 mg 之间线性关系良好。2.2.8 显色稳定性试验精密吸取
7、供试品 0.1 mL，按标注曲线步骤操作，将同一份反应液间隔一定时间（0.5、1 、1.5、2、2.5、 3 h）测定吸光度值，结果分别为0.330， 0.342， 0.326，0.332， 0.329，0.338。计算 RSD 为 0.6%，结果表明在 3 h 内显色稳定。2.2.9 精密度试验精密吸取葡萄糖对照品溶液 0.1 mL，按标注曲线步骤操作，重复测定 5 次，记录吸光度值分别为 0.128，0.129，0.125，0.131，0.130 ，RSD 为 0.2%。结果 RSD3%，表明仪器精密度良好。2.2.10 重复性试验精密吸取供试品溶液 0.1 mL，共 5 份，按标注曲线步
8、骤操作，测定吸光度值，分别为 0.324，0.315 ，0.322，0.328，0.331 ，RSD 为 0.6%。结果 RSD3%，表明重复性良好。2.2.11 加样回收率试验精密称取干浸膏 0.025 g，共 6 份，精密加入 50 mL 蒸馏水，超声处理30 min，滤过，取续滤液。精密吸取续滤液 0.1 mL 置 10 mL 试管中，各加入 0.1 mL 的标准葡萄糖溶液，加水至 2.0 mL，按标准曲线步骤操作，测定吸光度值，计算加样回收率。结果回收率平均值为 103.28%，RSD 为 0.99%。2.12 样品的测定取正交试验干浸膏，依法制备供试品溶液。按上述条件，测定吸光度值，
9、计算含量。根据各因素对提取工艺影响的贡献大小给予不同的权重系数：干浸膏得率为 50%，总多糖含量为 50%，再进行加权求和：综合评分= （干浸膏收率/ 干浸膏收率最大值） 50% +（多糖含量/多糖含量最大值）50%。正交试验结果见表 3 和表 4。3 讨论葛黄解酒颗粒处方来源于名老中医经验方，该方成分比较复杂，由党参、白术、茯苓、柴胡、枳椇等组成，多味中药均富含水溶性有效成分，但其水溶性成分不明确，故以总多糖含量及干浸膏收率为综合评价指标，考察水提工艺，得出最佳提取工艺条件。参考文献：1徐广侠.苯酚-硫酸法测定党参提取物中多糖的含量J.中国中医药现代远程教育，2011，9 （15）：144.2杨静，苏强，刘恩荔，等.党参多糖滴丸中党参多糖的含量测定J.中国药物与临床，2010，10（5）：515-516.3藿务贞，卫世杰.感冒清口服液中总多糖的含量测定 J.今日药学， 2013，23 （5）：277-279.4王建舫，崔昊，高会军，等.正交设计法优选芪参口服液提取工艺J.中国兽医杂志，2013，49（5）：61-64.5李欢，张德志.枳椇属植物中的化学成分及提取技术研究进展J.亚太传统医药，2010，6 （11）：172-174. （收稿日期：2016-07-18 ）
