1、1实验九 DNA 的粗提取与鉴定【学习目标】 1. 初步掌握 DNA 粗提取和鉴定的方法2. 观察提取的 DNA【重点难点】学习重点：实验原理、方法步骤、实验现象及解释学习难点：实验材料的选择和试剂的作用。实验中两次加入蒸馏水、三次用纱布过滤、三次加氯化钠溶液、六次搅拌的目的比较。【知识链接】在学习本实验时，实验材料必须准备充足。实验所用的鸡血细胞液由活鸡的鲜血经沉淀后获得，但所用烧杯必须提前放入抗凝剂。盛放鸡血细胞液的容器最好是塑料容器，因为玻璃容器易吸附 DNA。鸡血细胞因吸水、搅拌破裂后（细胞膜和核膜破裂）释放出 DNA，当然也有 RNA,而且它们往往与蛋白质结合在一起。在浓度较高的氯化
2、钠溶液中（2M）,核蛋白容易解聚，游离出 DNA。而 DNA 在浓度较高的氯化钠溶液中溶解度很高，Na +与带负电的 DNA 结合成 DNA 钠盐，这时 DNA 在溶液中呈溶解状态。利用 DNA 在浓度较低的氯化钠溶液中溶解度小的原理，向含有 DNA 的浓度较高的氯化钠溶液中加入大量（约 500ml）蒸馏水，稀释氯化钠溶液，使 DNA 的溶解度下降，而蛋白质的溶解度增高，从而使二者分离。加上搅拌，使 DNA 呈丝状析出。【学习过程】一. 实验原理1. 粗提取：DNA 在氯化钠溶液中的溶解度随氯化钠溶液的浓度而改变。DNA 在0.14mol/L 的氯化钠溶液中的溶解度最低。利用此原理可使溶解于氯
3、化钠溶液中的 DNA析出。2. 纯化：DNA 不溶于酒精而细胞中其他物质可溶于酒精。利用此原理可提取含杂质较少的 DNA.3. 鉴定：DNA +二苯胺 呈蓝色 （用于 DNA 的鉴定 ）二.材料用具鸡血细胞液（约 510ml） 、体积分数为 95 的酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h） 、蒸馏水、质量浓度为 0.1g/ml 的柠檬酸钠溶液、物质的量浓度分别为2mol/L、0.015mol/L 的 NaCl 溶液，二苯胺试剂。三、方法步骤1、制备血细胞液选材:选用血细胞中含有 的动物。 （如鸡）取血：宰杀所选动物收集其血液，加入 ，防止凝血。离心：将血液倒入离心管中离心 2 分钟，除去上清液，
4、得到血细胞液。沸水浴22、提取血细胞核物质取血细胞液 5ml-10ml 加 20ml ，用玻璃棒沿一个方向快速搅拌 5 分钟。用单层纱布过滤，滤液中含 和其他核物质，如蛋白质。3、溶解核内 DNA：滤液+ 溶液 40ml，玻璃棒沿一个方向搅拌 1 分钟。要点：加入 NaCl 溶液，用玻璃棒沿一个方向搅拌。目的：使 DNA 溶于 NaCl 溶液中。4、析出含 DNA 的粘稠物：溶液+蒸馏水轻轻搅拌沿一个方向析出丝状物（加蒸馏水直至粘稠物不再增加为止） ，此时 NaCl 溶液被稀释倒 。要点：缓慢加入蒸馏水，用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌目的：析出 DNA现象：出现白色丝状物质5、滤取含 DNA 的粘
5、稠物用 过滤含 的粘稠物留在纱布上。要点：多层纱布过滤现象：纱布上由白色的粘稠物6、DNA 粘稠物再溶解20ml 溶液与上述粘稠物混合，沿一个方向搅拌 3 分钟，粘稠物溶解要点：用钝头镊子夹取粘稠物，用玻璃棒沿一个方向搅拌现象：粘稠物被溶解7、过滤含 DNA 的 NaCl 溶液要点：用 过滤目的：去除杂质8、提取含杂质较少的 DNA上述滤液+冷却的 ，缓慢搅拌，出现 ，用玻璃棒将丝状物卷起。要点：加入冷酒精，用玻璃棒沿一个方向搅拌现象：有白色丝状物 DNA 析出9、DNA 的鉴定在两支洁净的试管中各加入 5ml 的 NaCl 溶液，其中一支试管加入丝状物并搅拌使之溶解。然后再各加入 4ml 的
6、 并沸水加热 5 分钟。加丝状物的试管内3呈现 ，另一支不变蓝，说明丝状物为 。四、实验要点点拨1.实验材料的选择和试剂的作用鸡血经济且易制得，鸡血中的红细胞、白细胞都具有 ，含大量DNA 。制备鸡血细胞液时，离心后要除去上清液。因为血液分两部分，一部分是血浆，一部分是 ，离心后除去的是血浆。思考：该实验能否选用哺乳动物（如猪）的血液？为什么？几种化学试剂及作用2mol/L 的 NaCl 溶液：溶解 DNA 析出 DNA0.015mol/LNaCl 溶液：溶解 DNA ,鉴定 DNA 时作溶剂。0.1g/ml 的柠檬酸钠：防止凝血体积分数为 95的酒精：提纯 DNA二苯胺试剂：鉴定 DNA2.
7、实验中数次相同操作的目的比较.实验中两次加入蒸馏水的目的第一次加蒸馏水的目的是 第二次加蒸馏水的目的是 .实验中用纱布三次过滤的目的： 过滤使用纱布的层数与需用滤液或黏稠物有关第一次过滤血细胞破裂液，需提取细胞核物质，存在于 ，故用单层纱布第二次滤取 0.14mol/LNaCl 溶液中析出的 DNA,要提取的物质存在于 中，故用多层纱布第三次过滤溶有 DNA 的 2mol/L 的 NaCl 溶液，要提取的物质存在于 中，故用二层纱布。.实验中涉及到 NaCl 溶液 4 次第一次加 NaCl 溶液，溶解提取的细胞核物质。第二次加蒸馏水稀释到 NaCl 溶液，使 DNA 析出。第三次加 NaCl
8、溶液，溶解滤取的 DNA 黏稠物。第四次加 NaCl 溶液，为了溶解 DNA，用于鉴定 DNA。.实验中涉及到 6 次搅拌步骤 2 中搅拌的目的是 。步骤 3、6、9 中搅拌的目的是 。步骤 4、8 中搅拌的目的是 稀释至 0.14mol/L4。练一练：填写本实验操作过程中所用试剂。1.提取鸡血细胞中核物质： 2.溶解核内 DNA： 3.析出 2mol/L 的 NaCl 溶液中的 DNA ： 4.DNA 黏稠物的再溶解 ： 5.提取含杂质较少的 DNA 白色丝状物： 【反思小结】【当堂检测】1.做 DNA 粗提取和鉴定实验时，实验材料用鸡血而不用猪血的原因是 （ ）A.鸡血的价格比猪血的价格低
9、 B.猪的红细胞没有细胞核，不易提取到 DNAC.鸡血不凝固，猪血会凝固 D.用鸡血提取 DNA 比用猪血提取操作简便2.DNA 的粗提取和鉴定实验中，有三次过滤：过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤含黏稠物的 0.14mol/LNaCl 溶液过滤溶解有 DNA 的 2mol/L 的 NaCl 溶液以上三次过滤分别为了获得 （ ）A. 含核物质的滤液、纱布上的黏稠物、含 DNA 的滤液B. 含核物质的滤液、滤液中 DNA 黏稠物、含 DNA 的滤液C. 含核物质的滤液、滤液中 DNA 黏稠物、纱布上的 DNAD. 较纯的 DNA 滤液、纱布上的黏稠物、含 DNA 的滤液3.在 DNA 粗提取实验过程中，有两次 DNA 沉淀析出，其依据的原理是 （ ）DNA 在 0.14mol/LNaCl 溶液中的溶解度最低DNA 在冷却的体积分数为 95的酒精中能沉淀析出A.第一次是，第二次是B.两次都是C.第一次是，第二次是D. 两次都是
