1、临床常用生化鉴定技术2021目 录碳水化合物的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验各种酶类试验其他试验01020304碳水化合物的代谢试验一 不同细菌含有分解不同糖醇类的酶； 如发酵则产酸，使指示剂溴甲酚紫由紫色变为黄色； 如产气，则液体或半固体培养基产生气泡，固体培养基可裂开。糖发酵试验01OPTION一、碳水化合物的代谢试验一、碳水化合物的代谢试验 有氧分解葡萄糖， 氧化型 ； 无氧也可分解葡萄糖， 发酵型 ； 不分解葡萄糖， 产碱型 ； 通过加石蜡油来制造无氧环境。02OPTION氧化发酵试验一、碳水化合物的代谢试验KIA试验03OPTION 克氏双糖铁（ KIA）复合试验： 下半部分葡萄糖
2、，上半部分斜面乳糖； 产酸： 酚红为指示剂，酸性时为黄色； 不产酸： 碱性时为红色； 产气： 固体培养基裂开； 产 H2S： 使培养基变黑。一、碳水化合物的代谢试验 将七叶苷分解为葡萄糖和七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸铁的铁离子形成黑色的化合物；培养基颜色由黄色变黑褐色。 用于区分链球菌属和肠球菌属，也可用于革兰阴性杆菌的鉴定。04OPTION七叶苷水解试验甲基红（ MR)试验05OPTION一、碳水化合物的代谢试验 阳性： 分解葡萄糖产生丙酮酸，并进一步分解成多种酸，使 pH值降至 4.5以下，加入指示剂为红色； 阴性： 分解及产酸少， pH值在 6.2以上，加入指示剂不变色； 应用： 大肠
3、埃希菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。一、碳水化合物的代谢试验06OPTION 阳性： 分解葡萄糖产生丙酮酸，进一步分解为乙酰甲基甲醇，在碱性环境下被氧化成二乙酰，与蛋白胨中精氨酸的胍基结合呈红色；即培养过夜后加入甲液和乙液为红色； 阴性： 加入指示剂不变色； 应用：与甲基红试验结果相反， 大肠埃希菌为阴性，产气肠杆菌为阳性。V-P试验蛋白质和氨基酸的代谢试验二二、蛋白质和氨基酸的代谢试验01 阳性： 色氨酸酶，分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚，加入指示剂形成红色界面； 阴性： 加入指示剂不变色； 应用：主要用于肠杆菌科的鉴定。吲哚（又称靛基质或蛋白胨水）试验：二、蛋白质和氨基酸的代谢试验02 尿素酶
4、试验： 阳性： 尿素分解酶分解尿素产生大量的氨，使培养基呈碱性，加入指示剂为红色； 阴性： 加入指示剂不变色。 应用：主要用于肠杆菌科中的变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属的鉴定。二、蛋白质和氨基酸的代谢试验03氨基酸脱羧酶试验 阳性： 氨基酸脱羧酶，分解氨基酸生成胺和二氧化碳，使培养基变碱，接种后加石蜡油培养过夜，对照管为黄色，阳性为紫色； 阴性： 对照管为黄色，阴性为黄色。各种酶类试验三三、各种酶类试验01 氧化酶试验： 阳性： 具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素 C氧化，再由氧化型细胞色素 C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物；细菌涂于氧化酶纸片上，10秒内呈深紫色； 阴性： 不变色；
5、应用： 大肠埃希菌为阴性，铜绿假单胞菌为阳性。三、各种酶类试验02 过氧化氢酶（触酶）试验： 阳性： 具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡； 阴性： 不产生气泡； 应用： 葡萄球菌和微球菌阳性，链球菌和肠球菌阴性。三、各种酶类试验02 血浆凝固酶试验 : 金黄色葡萄球菌产生 结合凝固酶和游离凝固酶 结合凝固酶 ，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变为纤维蛋白，附着于细菌表面，发生凝集； 用玻片法，形成凝块；三、各种酶类试验03 分泌至菌体外的 游离凝固酶 ，可将血浆中的协同因子激活变为凝血酶样物质，试管法检测，使试管中的血浆发生凝固，呈 果胨状 ； 试
6、管法，生理盐水配制菌悬液；加 1/4新鲜兔血浆混匀； 37 水浴 4小时；两种凝固酶均起作用，菌少呈 大凝块 ，菌多呈 果胨状 ; 如果阴性， 37 孵箱过夜观察结果。三、各种酶类试验04 硝酸盐还原试验： 阳性： 使硝酸盐还原为亚硝酸盐，或离子态的胺，或氮；培养过夜后，滴加甲乙液等量，如出现红色为阳性；不变色，加入少许锌粉后仍不变色，也为阳性； 阴性： 滴加甲乙液等量后不变色，加入少许锌粉后变色，为阴性。三、各种酶类试验05 DNA酶试验： 阳性： 使长链 DNA水解成寡核苷酸链，用微量生化管培养过夜后，使指示剂变色；卡他布兰汉为阳性； 阴性： 奈瑟菌为阴性。其他试验四四、其他试验枸橼酸盐利
7、用试验： 阳性： 以胺盐为唯一氮源，利用枸橼酸盐为唯一碳源，可在枸橼酸盐培养基上生长，使培养基变碱性，使培养基中溴麝香草酚兰指示剂由淡绿色变为深蓝色； 阴性： 不变色。四、其他试验链球菌手工鉴定： 化脓性链球菌：杆菌肽敏感 ， 0.04U的杆菌肽药敏纸片贴于待测菌的平板上，35 培养过夜，观察抑菌圈以判断是否耐药，化脓性链球菌应 10mm；四、其他试验链球菌手工鉴定： 肺炎链球菌：奥扑托辛药敏纸片敏感 ，含 5g的该纸片贴于待测菌的平板上，35 培养过夜，抑菌圈的直径大于14 mm为敏感；四、其他试验链球菌手工鉴定： 无乳链球菌： CAMP试验阳性 ，该菌能产生CAMP因子，可促进葡萄球菌溶血能力； 试验时，先将金黄色葡萄球菌 ATCC25923沿血平板直径划线接种，再沿该线垂直方向接种链球菌，两线间隔约 3-4mm； 35 培养过夜，两种划线交界处出现箭头状溶血，即为阳性反应。感谢您的观看与聆听
