1、,微生物知识培训,培训是为了共同提高,广宇生物制药有限公司,第一部分：微生物基础知识第二部分：卫生管理,目录,微生物(microorganism)：微生物是指所有形体微小,单细胞或个体结构较为简单的多细胞,甚至没有细胞结构的低等生物的统称(是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物)。特点： 1、体积小面积大； 2、吸收多转化快； 3、生长旺繁殖快； 4、适应强变异频； 5、分布广种类多.,第一部分 微生物基础知识,微生物特点,1、体积小、面积大,微生物的个体极其微小，必须借助显微镜放大几倍、几百倍、上千倍，乃至数万倍才能看清。杆菌的宽度是0.5微米，因此80个杆菌“肩并肩”地排列成横队，也只有一根
2、头发丝的宽度。杆菌的长度约2微米，故1500个杆菌头尾衔接起来仅有一颗芝麻长。 物体的表面积和体积之比称为比表面积。大肠杆菌的比表面积是人的30万倍。,2、吸收多，转化快,微生物的食谱非常广泛，凡是动植物能利用的营养，微生物都能利用，大量的动植物不能利用的物质，甚至剧毒的物质，微生物照样可以视为美味佳肴。如大肠杆菌在合适条件下，每小时可以消耗相当于自身重量2000倍的糖，而人体则需要40年之久。,3、生长旺，繁殖快,微生物以惊人的速度“生儿育女”。例如大肠杆菌在合适的生长条件下，12.520分钟便可繁殖一代，每小时可分裂3次，由1个变成8个。每昼夜可繁殖72代，由1个细菌变成重约4722吨，细
3、菌数量的翻番只能维持几个小时，不可能无限制地繁殖。因而在培养液中繁殖细菌，它们的数量一般仅能达到每毫升110亿个，最多达到100亿。尽管如此，它的繁殖速度仍比高等动植物高出千万倍。微生物的这一特性在发酵工业上具有重要意义，可以提高生产效率，缩短发酵周期。,多数细菌能耐0196的低温；在海洋深处的某些硫细菌可在250300的高温条件下正常生长；一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生活；产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下能保藏几十年、几百年。由于微生物繁殖快，也可在短时间内产生大量变异的后代。正是由于这个特性，人们才能够按照自己的要求不断改良在生产上应用的微生物，如青霉素生产菌的发酵水平由每毫升20单
4、位上升到近10万单位，利用变异和育种得到大幅度的产量提高。,4、适应强，变异频,5、分布广，种类多,微生物在地球上几乎无处不在，无孔不入，人的皮肤上，口腔，肠道里都有许多微生物。微生物聚集最多的地方是土壤，土壤是各种微生物生长繁殖的大本营，约占微生物总量的7090%，任意取一把土或一粒土，就是一个微生物世界，不论数量或种类均最多。在肥沃的土壤中，每克土含有20亿个微生物，即使是贫瘠的土壤，每克土中也含有35亿个微生物。空气里悬浮着无数细小的尘埃和水滴，它们是微生物在空气中的藏身之地。哪里的尘埃多，哪里的微生物就多。迄今为止，我们知道的微生物约有10万种，目前已知的种类只占地球上实际存在的微生物
5、总数的20%，人类生产和生活中仅开发利用了已发现微生物种数的1%。,微生物的类群和形态结构,微生物按其结构、化学组成及生活习性等分为三大类：原核细胞型：细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体等真核细胞型：酵母菌、霉菌、微细藻类、原生动物和大型真菌等。非细胞型：病毒 噬菌体,（一）原核微生物原核生物的细胞中没有细胞核结构，只有明显核区，外面无核膜包围。包括：细菌、放线菌、蓝细菌、支原体、立克次氏体、衣原体和螺旋体等。,1、细菌,（1）细菌的形态和大小 细菌是单细胞生物，即一个细胞就是一个个体。细菌的基本形态有三种：球状、杆状和螺旋状，分别被称为球菌、杆菌和螺旋菌。,细菌是一类细胞细而短
6、、结构简单、细胞壁坚韧，以二等分裂方式繁殖的原核微生物，分布广泛。,细菌的繁殖,二分分裂繁殖是细菌最普遍、最主要的繁殖方式。在分裂前先延长菌体，染色体复制为二，然后垂直于长轴分裂，细胞赤道附近的细胞质膜凹陷生长，直至形成横隔膜，同时形成横隔壁，这样便产生两个子细胞。,=细菌细胞分裂的电镜超薄切片图,杆菌二分裂过程模式图,杆菌(bacillus),不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。,螺旋菌(spiral bacterium),细胞呈球状或椭圆形。根据这些细胞分裂产生的新细胞所保持的一定空间排列方式有以下几种情形：见图2-1单球菌尿素微球菌（图2-1-1）双球菌肺炎双球菌（图2-1-2）链球菌溶
7、血链球菌（图2-1-3）四联球菌四联微球菌（图2-1-4）八叠球菌尿素八叠球菌（图2-1-5）葡萄球菌金黄色葡萄球菌（图2-1-6）,A、球菌,葡萄球菌,肺炎链球菌,杆菌的大小以宽度长度表示，一般为0.21.250.55.0微米。分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等。杆菌是细菌中种类最多的，如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。杆菌细胞呈杆状或圆柱形。图2.1中B的7为长杆菌和短杆菌，8为枯草芽孢杆菌，9为溶纤维梭菌。,B、杆菌,乳酸杆菌,螺旋菌大小一般为0.31.01.050微米，根据细胞弯曲程度和螺旋数目分为两种，若菌体弯曲不足一圈，似逗号形，称为弧菌，如霍乱弧菌；菌体回转如螺旋状，称为螺菌，如迂回螺菌。细
8、胞呈弯曲杆状的细菌统称为螺旋菌。弧菌 偏端单生鞭毛或丛生鞭毛（图2-1-10）螺旋菌 两端都有鞭毛（图2-1-11）,C、螺旋菌,勾端螺旋体,0,细菌的菌落,单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。细菌的菌落特征因种而异。可作为鉴定细菌种的依据。,需氧菌总数,定义：需氧菌总数是指食品检样经过处理，在一定条件（营胰酪大豆胨琼脂培养基、3035）下培养35天，所得1g或1ml检样中所含需氧菌菌落的总数,粘质沙雷氏菌的菌落特征,沙门氏菌
9、的菌落特征,铜绿假单孢菌的菌落 特征,弗氏志贺氏菌的菌落 特征,粘质沙雷氏菌的菌落 特征,（二）真核微生物,真核微生物是一大类具有真正细胞核，具有核膜与核仁分化的较高等微生物，细胞内有线粒体等较复杂的细胞结构。这类微生物包括酵母菌、霉菌、微细藻类、原生动物和大型真菌等。,是一类单细胞的真核微生物的通俗名称。其繁殖方式包括无性繁殖和有性繁殖。无性繁殖方式有芽殖和裂殖，芽殖是酵母菌最普遍的繁殖方式。酵母菌是人类实践中应用较早的一类微生物，如酿酒，发酵等。酵母菌的细胞里含有丰富的蛋白质和维生素。酵母菌在自然界中分布很广，喜欢在偏酸性且含糖较多的环境中生长。,1、酵母菌,酵母菌,2、霉菌,霉菌是丝状真
10、菌的俗称，意即发霉的真菌，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。,霉菌的形态、大小和结构,霉菌的菌丝是构成霉菌营养体的基本单位。菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像一根透明胶管，它的直径一般为3-10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。,霉菌的菌丝,霉菌的菌落,由于霉菌的菌丝较粗而长，因而霉菌的菌落较大，有的霉菌的菌丝蔓延，没有局限性，其菌落可扩展到整个培养皿，有的种则有一定的局限性，直径1-2厘米
11、或更小。菌落质地一般比放线菌疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取；菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致。,霉菌的繁殖,有性繁殖和无性繁殖两种以无性繁殖为主,各种曲霉的菌落,酵母菌的形态、大小和结构,酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1-5微米5-30微米。酵母菌无鞭毛，不能游动。酵母菌具有典型的真核细胞结构,有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等，有的还具有微体。,酵母菌的繁殖,1、芽殖 2、裂殖 3、孢子生殖,酵母菌的菌落,
12、大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。,各种酵母菌的菌落,啤酒酵母的菌落,红酵母的菌落,微生物的营养,水分：水占细胞浆的70%90%，是细胞的重要组成成分。较普遍的观点认为，只有在含水的环境中微生物才能存活。但也有人发现在无水碳氢化合物中微生物可长期存活。碳源：碳源是构成细胞的重要物质。有些微生物的碳源必须来自有机碳化合物如糖、蛋白质、脂肪、有机酸等（同时利用其化学能），属异养型；有些微生物不需有机碳化合物，以CO2为碳源，属自养型（分为光能自养型和化
13、能自养型）。,氮源：氮是组成蛋白质和核酸的重要元素。无机盐类：细菌所需无机盐包括磷、硫、镁、铁、钾、钠、钙、氯、锰、锌、钴、铜等。其中磷、硫、镁、钾、钠、铁需要量较多，其他只需微量。生长因子：生长因子是某些微生物生长发育所必需，而其自身又不能合成的一类营养物质。包括维生素、嘌呤和嘧啶。,五 微生物生长的影响因素,1、营养物 2、PH值3、温度 4、氧气5、渗透压 6、表面张力,其他因素： 温度 氧气 厌氧 光照 水份等,推行GMP目的：消灭污染、混药、差错污染的定义：当一个产品存在有不需要的物质时，它即受到污染。污染的形式：尘粒污染、微生物污染微生物污染：因微生物产生、附着而给特定的环境带来的
14、不良影响。 如果细菌得到了必要的养料、一定量的水份和合适的温度，它们就能迅速繁殖，它们繁殖的速度快得惊人。通常一个细菌在仅仅2小时后可产生出281兆(百万)个的细菌。 传播污染的四大媒介：空气、水、表面、人,GMP与微生物,传播污染的第一帮凶就是空气，空气携带着敌人来污染药品。每立方米的空气中至少含有60万颗尘粒，同时还存在着大量的微生物，在这样的空气条件下进行生产，肯定会污染药品。因此，要杜绝带有大量尘埃微粒和微生物的空气污染药品的办法是对空气采取过滤的措施，把隐藏在空气中的敌人通通过滤掉，使空气质量达到我们的要求。这就是要建立密闭厂房和空气净化系统的原因。对空气处理，只过滤了尘粒，但还有大
15、量微生物存在空气中，所以采取对空气消毒的措施来消灭微生物，例如：臭氧消毒的方式等杀死微生物。但是常使用一种消毒剂会使微生物产生耐药性，因此，在使用消毒剂时，必须定期交替使用。,传播污染的四大媒介空气,第二个帮凶是水，从理论上来讲，微生物在纯水中是不能生长的。但是，所有的各类水，不管怎样仔细地蒸溜或过滤，总会含有一定量的可溶性有机物和盐类。正是这些可溶性的物质可被微生物利用作为它们生长的养料源泉。水是我们药品生产不可缺少的要素之一，不只是用于生产中，还用于设施、设备清洗中。当带有大量尘埃粒子和微生物的水用于生产或清洗设施、设备时，就转移到药品上面，污染了药品。因此，我们直接用于药品生产的水必须经
16、过处理，以防止敌人通过水来污染产品。,传播污染的四大媒介水,第三个帮凶是表面，包括：天花板、墙壁、地面、设备、容器、工具或桌子；由于空气中的湿度，所有表面都包上一层含水的薄膜。这层薄膜由于静电吸引而饱含尘埃微粒，有很多时候，表面还覆盖一层油状物质，此层油膜易受到尘粒污染。表面因尘埃微粒和微生物由空气传播的回降而受到污染。 请记住：一个表面看起来很干净，而实际上已经被千百万个微生物所污染，除非已经做了正确的消毒灭菌。第四个帮凶可能是大家都不会想到的，它就是我们自己，人体是一个永不休止的污染媒介。当您每天来药厂上班时，您也许随身将几百万细菌带入工厂。,传播污染的四大媒介表面、人,采用不同洗手方式，
17、经微生物培养检测呈现的洗手效果,未洗手(成片菌落生长),用清水漂洗(仍有成片菌落生长),用皂液洗净的手(仍有菌落生长),用消毒剂消毒后的手(未见明显菌落生长),每平方厘米皮肤表面就含有一至十万个细菌，一只脏手则可能带菌多达四十万个 !,人体中的微生物,人自出生后，外界的微生物就逐渐进入人体。在正常人体皮肤、粘膜及外界相通的各种腔道（如口腔、鼻咽腔、肠道和泌尿道）等部位，存在着对人体无害的微生物群，包括细菌、真菌、螺旋体、支原体等，称为正常菌群。能使宿主致病的为致病菌或病原菌，不能造成宿主感染的为非致病菌或非病原菌。有些细菌在正常情况下并不致病，但当在某些条件改变的特殊情况下可以致病，这类菌称为
18、条件致病菌或机会致病菌,人的头发和皮肤：每分钟从人类皮肤中要散发出约10,000个微生物嘴巴和鼻子水滴：呼吸、咳嗽和喷嚏将产生出大量水滴，这种水滴既含有尘粒污染也含有微生物污染。咳嗽一次的发菌量为70700个(min人)，喷嚏一次的发菌量为400060000个(min人).衣着：洁净室内当工作人员穿无菌服时，静止时的发菌量为10300个/(min人)，躯体一般活动时的发菌量为1501000个(min人)，快步行走时的发菌量为9002500个(min人)化妆品和珠宝手饰：发胶、气雾除臭剂、眼脸膏、香粉等，为微生物污染提供了极好的源泉。耳环、戒指、项链、手链等首饰，因为它们难于清洗，所以可能成为感
19、染源或污染源。 生产过程中的人为差错：当员工没有按照SOP进行工作时，车间的污染程度增加。,人员污染的途径和方式,由于药品的特殊性，卫生管理不善，很容易造成污染。药品污染后，质量会发生变化，这是GMP要防止的核心。因此，卫生管理在药品生产中的重要性是不言而喻的。,第二部分 卫生管理,生产区环境卫生要求,物料卫生管理：符合要求的物料是生产合格产品的前提，因此用于生产的物料必须是符合质量标准的。一方面我们所使用的物料必须经检验合格，最重要的另一方面必须保证物料在使用的过程中不得受到污染。切记：（1）进入洁净区的物料必须对其外包装处理。 （2）流转过程的物料必须密闭。 （3）盛装物料的容器具必须是经
20、过消毒的。设备卫生管理：除了对设备保养外，更重要的目的是防止交叉污染。因此，每次使用完或使用前都要对设备进行清洁，确保产品符合标准。一清除 清除文件、器具和残余物料。二清洁 用饮用水或纯化水进行冲洗。三消毒 对需要用消毒液对设备消毒的进行消毒。,第二部分 卫生管理,生产现场卫生管理：案例：我们所用的物料微生物指标均符合要求，可生产出来的成品的微生物指标检测却不符合要求，这就是未做好生产现场卫生管理的直接体现。（1）生产前注意上批清场是否在效期内，超过有效期应重新清场且符合要求。（2）生产过程中随时保持现场的卫生工作，不得出现脏、乱、差的场面，物料、设备应符合上述要求。 人员卫生管理：要养成良好
21、的卫生习惯，做到勤洗澡、勤洗手、勤刮胡子、勤剪指甲、勤换衣。切记：手是我们工作时使用的最重要的工具之一，只要触摸到污染的东西，微生物就会留在你手上或指甲里，因此手是最大的细菌传播工具和途径。在药品生产时必须保持手的清洁。,第二部分 卫生管理,在净化室工作，必须遵守洁净室内每一个细节的工作规范不允许将任何有害的物质带入洁净室；避免污染带给产品可能的严重损害；人员的清洁和卫生是很重要的；进入洁净室必须卸妆；工作服帽子大小要合适，必须遮盖所有头发，以防止皮肤碎片及头发屑污染；不得将手机、传呼机、手表及首饰带入洁净室；戴口罩是控制来自口腔污染的有效方法之一；洁净工作服不得接触地面；穿洁净鞋或鞋套时，脚
22、不得接触地面；进入洁净室要正确着装。,第二部分 卫生管理,正确的更衣要求：,1.接触物品前应对手（手套）消毒2.工作时，不要触摸口罩3.揉鼻子去更衣室，并更换手套和口罩4.操作时，不要坐着5.不要在层流下面的工作台上休息6.休息时，站着，手臂顺着身体下垂，不要把两臂交叉，也不要放在臀部7.休息时，坐着，双手放在膝盖上，不要交叉双手或双脚8.工作中必要时才讲话9.工作时，可使用电话，不可通过气锁讲话。,第二部分 卫生管理,在洁净区内工作的要求：,洁净室清场顺序及注意事项：天花板、墙壁、与墙壁连接的物体、管道、台面、设备、地面。先上后下、先里后外、先清洗、再清洁、后消毒，不要在清洁过的地面上走动。
23、洁净室的清洁方法：1.真空吸尘：仅对大粒子有效2.干擦：干擦可能脱落粒子，通常仅用于擦干潮湿表面3.湿擦：这是大多数的除污及清洁的方法。消毒：用于消灭多种微生物，使其数量减少到可接受的水平。常用： 甲醛、臭氧、乙醇、来苏儿、新洁尔灭。灭菌：杀灭所有微生物。121 30min，115 30min。,第二部分 卫生管理,三、消毒与灭菌,消毒与灭菌是微生物实验技术中最基本的操作，从事药品生产和检验的人员都应当了解消毒与灭菌的方法及其意义，严格遵守操作规程，否则会影响产品质量，危害患者安全。,Disinfection,消毒与灭菌,杀死物体上病原微生物的方法,并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物,杀
24、灭物体上所有微生物的方法。,不存在活菌的意思。,防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。,消毒：,灭菌：,无菌：,防腐：,Asepsis,Sterilization,Antisepsis,常用消毒剂, 70%75%乙醇水溶液； 0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油，用于皮肤、器具等消毒；异丙醇 75%水溶液，用于皮肤、器具等消毒；甲醛 37%40%甲醛液89ml，再加入45g高锰酸钾，每m3熏蒸量，密闭1224h，刺激性强；戊二醛 2%水溶液，用于空气、器具等消毒。广谱、高效、低毒，可杀芽孢和病毒，毒性较轻；,新洁尔灭（苯扎溴铵） 0.2%水溶液，用于皮肤、粘膜、器具等消毒，有清洁和消毒双重
25、功效，抗菌谱较窄；杜灭芬（消毒宁） 0.05%0.1%水溶液，用于皮肤、器具等消毒；过氧乙酸 a、 0.2%0.5%水溶液；b、新配0.5%水溶液；c 、1g/m3； 用于器具等消毒，抗菌谱广，可用于皮肤消毒杀灭某些病毒；熏蒸，但性质不稳定。乳酸 a、0.331mol/L；b、 11.5ml/m3熏蒸或与等量苯酚合用熏蒸 喷雾，用于空气消毒，有强杀菌作用；熏蒸，密闭12h以上。甲酚皂 5%器械、用具消毒。臭氧消毒 强氧化剂、氧化蛋白质的活性基团。,热力灭菌法,一、物理消毒灭菌法,高温杀灭細菌,焚烧-最彻底的灭菌方法,烧灼-直接用火焰灭菌方法,干烤-加热160-180 2小时,干热灭菌法,湿热灭
26、菌法,加压蒸汽灭菌法,最有效的灭菌方法 121 2030分钟,煮沸消毒法,水煮100 5分钟(繁殖体)2小时(芽胞),流通蒸汽消毒法,巴氏消毒法,间歇蒸汽灭菌法,水蒸汽100 1530分钟(繁殖体),反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌,较低的温度（61 30分钟）杀灭致病菌,湿热灭菌与干热灭菌的比较,同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好,原因,1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固,2、湿热的穿透力比干热大,3、湿热的蒸汽有潜热,辐射杀菌法,紫外线,杀菌机理：,波长200300nm的紫外线具有杀菌作用,干扰DNA的复制与转录,紫外线穿透力较弱,不耐热物品的表面消毒,特 点：,应用范围：,空气消毒 手术室、传染病房、细菌实验室,我们的工作关系着人的生命安危和健康我们的职业是一个崇高的职业，责任重大我们的工作质量直接影响着产品质量我们应自觉遵守行业规范，提高个人修养！,我们应谨记：,我们要自觉地遵守医药行业的职业道德，成为一个优秀的制药工人!,谢谢大家！,
