1、消毒质量现场采样及检测方法,采样及检测原则,GB 15982-1995 医院消毒卫生标准规定： 采样时间：消毒处理后，医疗活动前期间 采样后尽快检测，送检时间6小时，若样品保存04，送检时间24h,一、空气,器材：9cm普通营养琼脂平板方法：平板暴露法（沉降法）,一般情况：按GB 15982-1995 医院消毒卫生标准：,布点方法：室内面积30m2,设内、中、外对角线三点，内外布点距墙壁1m；室内面积30m2，设中央及四角5点，四点的布点位置距墙1m，暴露时间5min培养时间：48小时,计算公式：细菌总数（cfu/m3）=50000N/(AT)A：平板面积（cm2） T：平板暴露时间 N：平均
2、菌落数,检出限：对于30m2房间，如果3块平板共长1个菌，则根据公式，计算结果为52.3 报53cfu/ m3如果先四舍五入，保留一位小数，以平均菌量0.3计，结果是47.2，报48cfu/ m3数值的不同与在哪一步采取数字修约有关,对于30m2房间 计算结果为31.4， 报32cfu/ m3上述情况说明：平板沉降5分钟只能适用于卫生标准值高于检测限的空气采样，例如普通手术室，标准值200cfu/ m3,对于洁净度要求高的环境，该方法的最低检出限与评价标准不一致GB 15928-1995规定 类环境10 cfu/ m3怎么解决？延长采样时间,洁净手术室：依据GB 50333-2002检测,平板
3、沉降方法： 沉降时间30min布点要求及沉降菌标准,二、物体表面,1、采样液对于只清洁、未消毒的表面：无菌生理盐水消毒后的物体表面：根据使用消毒剂选择含相应中和剂的采用液,2采样方法,5cm5cm标准规格板 棉拭采样100cm2；门把手等不规则物体表面：直接涂抹,3、中和剂的选择,中和剂中需要加硫代硫酸钠的：过氧化氢、过氧乙酸、二氧化氯、氧化还原电位水、臭氧、含氯消毒剂、碘和其他消毒剂要加卵磷脂和吐温80的：乙醇、洗必泰、季 铵盐类、要加甘氨酸的：戊二醛、三氯生、对氯间二甲苯酚、要加皂基的：聚六亚甲基胍（若没有皂基，可将1%组氨酸、5%卵磷脂、10%吐温80加入D/E肉汤,医院常用手消毒剂的中
4、和剂举例：爱护佳（3M公司）：2%卵磷脂4%吐温80百能牌免洗外科手消毒液：2%甘氨酸6%卵磷脂10%吐温80诗乐氏（含双氯苯双胍乙烷）、 净手（氯羟基二苯醚）：1%组氨酸4%卵磷脂6%吐温80,4、检测,细菌总数：取1ml接种平皿金黄色葡萄菌：1ml接种9mlSCDLP液体培养基，361培养24h，血平板分离乙型溶血性链球菌：样品1ml接种1%葡萄糖肉汤沙门氏菌：按照GB4789.4 1ml加入增菌液中,四、工作人员手,1采样液：无菌生理盐水 适合只清洁，未用消毒剂的情况含相应中和剂的采样液 适用于消毒后采样,手卫生效果的监测方法,WS/T313-2009医务人员手卫生规范附录B如果消毒后采
5、样，需要用证实符合要求的中和剂怎样知道用何种中和剂？ 通过进货时查验产品的检验报告 或进行中和剂鉴定试验,2采样方法,被检人员五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子，在双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约30cm2）并随之转动采样棉拭，剪去操作者手接触部位，将棉拭投入10ml采样液 。检测方法：混匀器振荡20秒或用力振打80次，取1ml接种，36 培养48小时。,标准： 卫生手消毒：监测的细菌菌落总数应10cfu/cm 外科手消毒：监测的细菌菌落总数应5cfu/cm,五使用中消毒液,1采样时间：更换前，使用中的消毒液2需要检测微生物污染情况的： 采样液：含相应中和剂的
6、营养肉汤， 采样方法：取1.0ml消毒液加入9.0ml含中和剂的营养肉汤,3需要测定含量：另取干净、干燥的采样瓶直接取样 采样量100ml 要求采样量满足检测需要。,标准要求： 使用中的消毒液污染的微生物100cfu/ml；不得检出致病性微生物 使用中消毒液有效成分含量要求符合标识浓度,六、内窥镜,采样依据：内镜清洗消毒技术规范方法 检测部位：内镜的内腔面 用无菌注射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检口注入，用15ml无菌试管从活检出口收集，及时送检，2小时内检测,一般情况的中和剂酸化水：0.5%硫代硫酸钠、0.5%吐温80 戊二醛：1%甘氨酸、0.5%吐温80,采样时注意事项
7、： 避免污染 防止酒精灯火焰伤及内镜镜头 操作一人难以完成，需要两人配合 采样时最好标明内镜编号，有问题好追溯（不合格查明原因，消毒液问题还是生物膜问题）,检测：菌落计数：充分振荡，取0.5ml接种2个平皿后倾注营养琼脂，35培养48h后计数致病菌： 0.2ml接种血平板 0.2ml接种中国兰平板 0.2ml接种SS平板涂布 35培养48h 观察有无致病菌生长,七污水,1、检测依据：GB 18466-2005 医疗机构水污染排放标准2、检测项目余氯的检测：用干净空瓶采样，现场检测。直接用余氯测试盒检测余氯粪大肠菌群沙门氏菌志贺氏菌的检测： 采样：污水采样加入含1g硫代硫酸钠的灭菌瓶中，根据GB
8、18466-2005检测,八灭菌器,1、压力蒸汽灭菌器灭菌效果：嗜热脂肪杆菌芽孢 培养温度：561消毒技术规范2002年a.检测方法：下排气式压力蒸汽灭菌器、预真空和脉动真空灭菌器，生物指示剂置于标准包中心部位，标准包置于排气口上方。,b.手提压力蒸汽灭菌器 用通气储物盒代替标准包，盒内盛满中试管，生物指示剂放于中心部位放于中心部位两只灭菌试管内，储物盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部,WS310.3-2009医院消毒供应中心第3部分：清洗消毒及灭菌效果,按照消毒技术规范的规定，将嗜热脂肪杆菌芽胞菌片制成标准生物测试包，或使用一次性标准生物测试包，对灭菌器的灭菌质量进行生物监测。标准生物监测包置于
9、灭菌器排气口的上方或生产厂家建议的灭菌器内最难灭菌的部位，并设阳性对照和阴性对照。,具体监测方法为：将生物指示物置于标准试验包的中心部位。标准试验包由16条41cm66cm的全棉手术巾制成。制作方法：将每条手术巾的长边先折成3层，短边折成2层，然后叠放，制成23cm23cm15cm大小的测试包。经一个灭菌周期后，在无菌条件下取出标准试验包的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，经561培养7d（自含式生物指示物按产品说明书执行），观察培养结果。,小型压力蒸汽灭菌器因一般无标准生物监测包，应选择灭菌器常用的、有代表性的灭菌包制作生物测试包，置于灭菌器最难灭菌的部位，且灭菌器应处于满载状态
10、。生物测试包应侧放，体积大时可平放。,采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时，应直接将一支生物指示物，置于空载的灭菌器内，经一个灭菌周期后取出，规定条件下培养，观察结果。,2、环氧乙烷灭菌器灭菌：枯草杆菌黑色变种芽孢生物指示管 置于常规生物测试包中，测试包放在最难灭菌的部位（整个装载灭菌包的中心部位），灭菌周期完成后取出， 361培养7天观察结果（自含式生物指示物应遵循产品说明），观察颜色变化，同时设阳性对照和阴性对照。,常规生物指示包的制备：取一个20ml无菌注射器，去年针头，拔出针栓，将生物指示剂放入针筒内，带孔的塑料帽应朝向针头处，再将注射器的针栓插回针筒，之后用一条全棉小毛巾两层包裹，置于纸塑
11、包装袋中，封装。,3、干热灭菌器：按照消毒技术规范采用枯草杆菌黑色变种芽孢菌片，制成标准生物测试包，置于灭菌器最难灭菌的部位，并设阳性和阴性对照。,将枯草杆菌芽孢菌片分别装入无菌试管内（1片/管）。灭菌器与每层门把手对角线内、外角处放置2个含菌片的试管，试管帽于试管旁，关好柜门，经一个灭菌周期后，待温度降至80时，加盖试管帽后取出试管。在无菌条件下，加入普通营养肉汤培养基（5ml/管）,361培养48h，观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7日,九紫外线辐照强度,1器材：紫外辐照计2检测方法：开灯5min后，探头放在灯管中心距高1m处检测3注意事项： 仪器定期检定，在检定期内使用 每次使用时需
12、要仪器调零 个人防护：眼罩、口罩、帽子、防止紫外线灼伤。,十、血液净化室（中心）的监测,依据：血液净化标准操作规程2010版,透析用水的水质监控：（P2223),1.电导率约10s/cm2.纯水的pH值应维持在573.细菌培养应每月1次，要求细菌数200cfu/ml；采样部位为反渗水输水管路末端，每台透析机每年至少监测1次内毒素检测每3个月1次， 2Eu/ml，每台透析机至少每年检测1次。化学污染物监测1次1年,工作人员手卫生,依据：血液净化标准操作规程2010版P19 ： 要求遵守医务人员手卫生规范卫生手10cfu/cm2外科手5cfu/cm2,空气和物体表面,血液净化标准操作规程2010版
13、 P20 参照血液透析中心感染控制的管理要求，明显被污染的表面应用500mg/L有效氯消毒液消毒应达到医院消毒卫生标准GB15982-1995规定的对三类环境的要求 空气培养500cfu/m3 物体表面10cfu/cm2,国内消毒产品相关评价标准,谈智,一、灭菌剂与高水平消毒剂,(一)定义 灭菌剂：能杀灭一切微生物达灭菌要求的制剂。 高水平消毒剂：可杀灭各种微生物，对细菌芽孢的杀灭作用达到消毒效果的制剂。,(二)相关评价标准 1、消毒技术规范(卫生部，2002)：灭菌剂能在说明书规定时间的一半（0.5T）杀灭芽孢，定性灭菌试验达到合格；高水平消毒剂 悬液法对芽孢的杀灭指数5.00： 载体法对芽
14、孢的杀灭指数3.00。,2、美国官方分析化学协会(AOAC)消毒剂标准测试方法：灭菌剂效果评价，要求以枯草杆菌黑色变种芽孢为指标，720个载体全部无菌生长。3、欧洲标准化委员会消毒剂与防腐剂测试标准(CEN)：灭菌保证水平10-6。,二、抗（抑）菌剂与皮肤黏膜消毒剂,(一)定义 抗菌剂：杀灭或妨碍细菌生长繁殖及其活性的制剂。 抑菌剂：抑制或妨碍细菌生长繁殖及其活性的制剂。 皮肤黏膜消毒剂：杀灭皮肤黏膜上的微生物达消毒要求的制剂。,(二)相关评价标准 1、我国：评价依据消毒技术规范(卫生部，2002)一次性使用卫生用品卫生标准(GB15979-2002)。,(1)皮肤黏膜消毒剂；悬液法对细菌杀灭
15、对数值5.00，对真菌杀灭对数值4.00；载体法的杀灭对数值3.00,外科洗手和皮肤消毒：金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆菌作用时间3min。 卫生洗手消毒：金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆菌作用时间1min。 皮肤黏膜消毒：金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌作用时间5min。 足部消毒：金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌作用时间5min。,(2)抗(抑)菌洗剂：接触皮肤黏膜，具有一定杀(抑)菌作用的制剂(栓剂、皂剂除外)。抑菌洗剂不得用于破损的皮肤黏膜。 抗菌洗剂：对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌与白色念珠菌杀灭率90%。参照国标进行定量杀菌试验。 抑菌洗剂：对大、金、白念抑菌率50%。参
16、照国标进行定量抑菌试验。,消毒剂(disinfectants)：杀灭传播媒介上的微生物使其达消毒要求的制剂 我国规定的实验指标菌：高效消毒剂：枯草杆菌黑色变种芽胞中效消毒剂：龟分枝杆菌低效消毒剂：细菌繁殖体，如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、 （不包括分枝杆菌）,(四)相关评价标准 1、我国：评价依据为消毒技术规范(卫生部，2002) (1)空气消毒剂：对白色葡萄球菌杀灭率99.90%。,(2)医疗器械消毒剂： 中水平消毒剂：对金黄葡萄球菌、绿脓杆菌杀灭对数值5.00，对龟分枝杆菌杀灭对数值4.00，对脊髓灰质炎病毒灭活对数值4.00。 低水平消毒剂：对金黄葡萄球菌、绿脓杆菌杀灭对数值5.00，对白色念珠菌杀灭对数值4.00。,(3)一般物表与织物消毒剂：对金黄葡萄球菌、大肠杆菌杀灭对数值5.00。(4)餐(饮)具消毒剂：对大肠杆菌杀灭对数值5.00，对脊髓灰质炎病毒灭活对数值4.00。 (5)果蔬消毒剂：对大肠杆菌杀灭对数值5.00。,以上为采用悬液法进行杀菌试验的评价标准，如采用载体法进行杀菌试验,则杀灭对数值均应3.00。,(6)饮水与游泳池水消毒剂： 需要做水消毒效果鉴定试验，要求消毒后饮用水大肠杆菌和游泳池水的大肠杆菌和细菌总数达到国家标准。,谢谢,
