1、消毒与灭菌,头发和手指上的细菌,基本概念,灭菌（sterilization）杀灭所有的微生物，包括细菌的芽孢；消毒（disinfection）杀灭病原微生物；防腐（antiseptic）抑制体外微生物的生长繁殖；无菌（Asepsis）：即不含活菌。无菌技术（aseptic technique）: 在进行外科手术或分离转接及培养时防止其它微生物污染实验材料的操作方法。,物理因素杀菌,杀灭或抑制微生物的物理因素有：温度（热力灭菌法）、辐射作用（紫外线等）、过滤（机械除菌法）、渗透压、干燥、超声波等。,热力灭菌法,干热灭菌法,湿热灭菌法,火焰灼烧法烘箱热空气灭菌法,常压下加压下,巴氏消毒法煮沸消毒法
2、间歇灭菌法,高压蒸汽灭菌法连续加压灭菌法,焚烧：动物尸体，废弃物。烧灼：金属制品（镊子，接种环等）。干烤灭菌（1）160/2h烤箱（2）适用于耐高温 物品。,1 干热灭菌法,2.湿热灭菌法 A 巴氏消毒法： 63/30min，72/15-30s， 135-150/2-6S B 煮沸消毒法： 100， 难以杀灭芽胞 C 流通蒸气消毒法： 100，15-30min 难以杀灭芽胞 D 间歇蒸汽灭菌法： 100，15-30min，37过夜培养（3次） E 高压蒸气灭菌法: （1）含糖培养基: 113（8Ib/in2 ）， 2030min （2） 一般耐高温物品(如培养基)：121.3 ，103.46k
3、Pa（15 Ib/in2 ），1530min,高压蒸汽灭菌锅结构,（二）辐射的消毒作用1 日光与紫外线机理：细胞DNA吸收能量，形成胸腺嘧啶二聚体，干扰DNA复制和蛋白质合成。 特点：穿透力弱,只适用于物体表面和空气；产生对人有害的臭氧,2 电离辐射：包括X射线和射线 机制：干扰DNA的合成；破坏细胞膜； 产生过氧化氢等 特点：穿透力强，不升高温度,光复活作用,当微生物收到紫外线照射后，立即暴露在可见光下时，其中一部分微生物可以恢复正常生长，此即光复活作用。光复活作用在于可见光激活了光修复酶（PRE），PRE可以将TT二聚体切除。,（三）滤过除菌法 a.适用于不耐热、不能用化学方法处理的液体和
4、气体：抗生素、维生素、酶、血清、病毒溶液、毒素溶液、细胞培养液b.不能除去病毒和支原体c.常用膜滤器：0.220.45m,棉花、玻璃纤维 滤膜 核孔滤器或石棉,被阻留在滤膜上的大肠杆菌和放线菌的扫描电镜照片,过滤除菌的装置,过滤除菌的装置,（四）超声波的消毒作用 可裂解细菌，尤其对G+更敏感 主要用于粉碎细胞，提取细胞组分或制备抗原等 (五）渗透压 高渗引起细胞脱水产生质壁分离。 常用盐腌，糖渍来保存食品。,化学消毒灭菌法,化学消毒灭菌是指用化学药品来杀死或抑制微生物防腐剂控制微生物生长，防止病原菌污染。消毒剂杀死微生物的营养体。,消毒剂的作用原理,1、蛋白质变性作用2、破坏细胞的表面结构 3
5、、改变酶的功能基团或干扰细胞的正常代谢,消毒剂的主要种类、浓度及用途1 酚类：作用：菌体蛋白凝固；损伤细胞膜； 灭活酶类浓度：石炭酸为3%- 5%、来苏儿为2% 用途：地面、器具表面和皮肤的消毒2 醇类 ：作用机制：使菌体蛋白变性与凝固； 干扰细菌代谢浓度：乙醇70%-75%用途：用于皮肤的消毒和体温计等的浸泡,3 重金属盐类： 使蛋白发生变性和沉淀；酶活性丧失 （1）2%红汞：皮肤、粘膜和小创伤 （2）0.05-0.01%升汞：非金属器皿 4 氧化剂： 氧化作用；使蛋白质变性 （1）0.1%高锰酸钾：皮肤、尿道、水果 （2）3%过氧化氢：创伤、皮肤粘膜 （3）2%-2.5%碘酒：皮肤消毒 （
6、4）0.2ppm-0.5ppm氯：饮水和游泳池 （5）10%-20%漂白粉：地面、厕所等,5 表面活性剂： 损伤细胞膜；灭活氧化酶等酶的活性；蛋白质沉淀（1）0.05%-0.1%新洁尔灭：皮肤粘膜、手术器械（2） 0.05%-0.1%杜灭芬：伤口冲洗，金属器械、塑料、橡皮类6 烷化剂： 使菌体蛋白和核酸的烷基化（1）10%甲醛：物品表面、空气（2）2%戊二醛： 精密仪器、内窥镜等 缺点：有一定的毒性卤素，酸碱类,消毒剂的应用 1 病人的排泄物：等量的20%漂白粉、5%石炭酸或2%来苏儿、搅拌均匀，作用2小时 2 皮肤：2.5%碘酒、70%酒精、2%红汞 3 粘膜：1%硝酸银、3%过氧化氢、0.1% 高锰酸钾等 4 饮水: 氯气、漂白粉 5 厕所：生石灰 6 空气：甲醛熏蒸 7 手：2%来苏儿、2%碘酊、70%酒精,影响消毒剂灭菌的因素,消毒剂的性质、浓度与作用时间微生物的种类与数量温度酸碱度有机物,
