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毛细管电泳.ppt.ppt

上传人:天天快乐 文档编号:1289479 上传时间:2018-06-22 格式:PPT 页数:75 大小:9.10MB
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资源描述

1、2018/6/22,1,第五章 高效毛细管电泳,high porfomance capillary electrophoresis,艾尼娃尔.艾克木,教学目的:,2018/6/22,2,通过本章学习,掌握毛细管电泳分离原理和常用术语,毛细管电泳的基本分离模式,熟悉各类型毛细管电泳法,了解毛细管电泳仪的主要组成及其在药物分析中的应用。,2018/6/22,3,教学要求1、掌握毛细管电泳分离原理和过程。2、了解毛细管电泳的特点、分类、毛细管电泳仪器的主要组成。3、掌握毛细管电泳分析的基本理论和基本术语:电泳和电泳淌度,电渗和电渗淌度。4、熟悉评价分离效率的参数及谱带展宽的影响因素。5、熟悉各类型电

2、泳法(如纸电泳法、醋酸纤维素薄膜电泳法、琼脂糖凝胶电泳法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法)及其应用6、掌握毛细管电泳的基本分离模式。7、熟悉毛细管区带电泳及其操作条件的选择。,教学内容,2018/6/22,4,1、毛细管电泳的特点和分类。2、毛细管电泳理论。(1)电泳和电泳淌度。(2)电渗和电渗率。(3)表观淌度。(4)分离效率和谱带展宽。3、熟悉各类型电泳法原理及应用:纸电泳法、醋酸纤维素薄膜电泳法、琼脂糖凝胶电泳法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法4、毛细管电泳的主要分离模式。(1)毛细管区带电泳。(2)胶束电动毛细管色谱。(3)毛细管凝胶电泳。(4)

3、毛细管电色谱。5、毛细管电泳仪。(高压电源、毛细管柱、进样、检测),6/22/2018,5,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,6,毛细管电泳概述generalization ( Capillary Electrophoresis, CE ),早在一百多年以前,较原始的电泳实验,是在一个U形一管中进行的,管中盛有溶液,两端置有电极,加上几百伏电压后,首次实验了对毒素和抗毒素的分离。1909年,L.Michaelis提出“电泳”这一术语,他的实验是用于测定蛋白质的等电点。,Animation动画,第一节 毛细管电泳基础原理,6/22/2018,7,此后,许多的研究报告涉及氨基

4、酸、肽类、蛋白质的分离。为了防止电泳完成了的溶液中,再次发生对流混合,曾使用了各种稳定介质,如琼脂、纤维粉、玻璃丝、硅胶及丙烯酸胺; 为了防止热扩散而使用了一种内径小的管道,管道内径由3mm缩小至75m。1981年,Jorgenson和Lukacs 使用75m内径的熔融石英毛细管,电泳分离氨基酸和肽。至此,出现了毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)技术。,6/22/2018,Page 8,电泳 electrophoresis :溶液中带电粒子在电场作用下发生迁移的电动现象。利用这种现象对物质进行分离分析的方法-电泳.,毛细管电泳 capillary elect

5、rophoresis :是利用被分析离子在电场作用下移动的速率不同而达到分离的目的,这种技术主要用来分析在毛细管缓冲溶液中能离解为离子的物质。,6/22/2018,9,毛细管电泳,又称高效毛细管电泳(High Performance capillary electrophoresis,HPCE),它不同于经典的区带电泳,有如下特点:,(1)它是在内径(10200)m的石英毛细管中进行的,在毛细管中的散热较好,沿着管截面的温度梯度很小,因此,可以提高加在毛细管两端的电压,所加电压可高达几十千伏。 (2)它不需要阻流介质,但可使用凝胶作分子筛介质。,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析

6、教研室,10,成为与GC以及HPLC相媲美的一种分离技术,并被认为是当代分析科学最具活力的前沿研究课题。,Tiselins首先将电泳方法出色的应用到了生物化学方面,使移动界面电泳成为研究生物大分子的准确方法,成功分离了人血清并得到了血清白蛋白和-,-,-球蛋白,并于1948年获得诺贝尔化学奖。,Jorgenson和 Lukacs奠定了毛细管区带电泳的基础理论后,电泳技术才开始重新得到发展,出现了一种高效液相分离法毛细管电泳(亦称高效毛细管电泳)。,毛细管电泳的兴起与发展,HPCE,6/22/2018,11,高效毛细管电泳仪器,6/22/2018,Page 12,5-1毛细管电泳的特点和分类,一

7、、电泳和色谱,电泳:在电解质溶液中,位于电场中的带电离子在电场力的作用下,以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象,称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同,迁移速率不同可实现分离。,色谱:是利用不同组分在固定相及流动相中的分配系数不同而分离的。,1、分离原理,Animation动画,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,13,2、分离过程,差速迁移的过程,可用相同的理论来描述,保留值、塔板理论和速率理论。,带电粒子的迁移速度=电泳+电渗流;两种速度的矢量和。 正离子:两种效应的运动方向一致,在负极最先流出; 中性粒子无电泳现象,受电渗流影响,在阳离子后流出; 阴

8、离子:两种效应的运动方向相反。电渗流 电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,14,毛细管电泳装置示意图,3、仪器流程,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,15,电泳仪,进样系统,分离系统,检测系统,数据处理系统,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,16,2018/6/22,17,3、毛细管电泳的特点,毛细管的采用使产生的热量能够较快散发,大大减小了温度效应,使电场电压可以很高。电压升高,电场推动力大,又可进

9、一步使柱径变小,柱长增加,高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱,理论塔板数高达几十万块/米,特殊柱子可以达到数百万。,高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进: 一是采用了0.05mm内径的毛细管, 二是采用了高达数千伏的电压。,6/22/2018,Page 18,四、高效毛细管电泳的特点,1.仪器简单、易自动化 电源、毛细管、检测器、溶液瓶2.分析速度快、分离效率高 在3.1min内分离36种无机及有机阴离子,4.1min内分离了24种阳离子;分离柱效:105107/m理论塔板数;3.操作方便、消耗少 进样量极少,水介质中进行;4.应用范围极广 有机物、无机物、生物、中性分子;生物大分子等

10、; 分子生物学、医学、药学、化学、环境保护、材料等;,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,19,高效毛细管电泳,普通色谱,2018/6/22,20,毛细管电泳(按填充物质的形状),自由溶液毛细管电泳,毛细管电泳(按机制),电泳型,电泳/色谱型,非自由溶液毛细管电泳,色谱型,4、毛细管电泳的分类,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,21,(1)毛细管区带电泳(CZE)(2)毛细管胶束电动色谱 (MECC) mfcellar electrokinetic capillary chromatography, (3)毛细管凝胶电泳 (CGE) capillary

11、 gel electrophoresis,(4)毛细管等电聚焦(CIEF)capillary isoelelectric focusing,(5)毛细管电色谱 (CEC) capillary electrochromatography(6)非水毛细管电泳(NACE),六种分离类型,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,22,6/22/2018,Page 23,一、高效毛细管电泳(HPCE)基本原理 basic principles of PHCE,电泳是指带电离子在电场中的定向移动,不同离子具有不同的迁移速度,迁移速度与哪些因素有关? 当带电离子以速度 在电场中移动时,受到大

12、小相等、方向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用。,电场力:FE = qE 阻 力:F = f故: qE = fq离子所带的有效电荷;E 电场强度;离子在电场中的迁移速度;f 平动摩擦系数 ( 对于球形离子: f =6; 离子的表观液态动力学半径; 介质的粘度; ),2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,24,所以,迁移速度:,(球形离子),物质离子在电场中差速迁移是电泳分离的基础。淌度 :单位电场强度下的平均电泳速度。,Animation动画,6/22/2018,Page 25,二、电渗现象与电渗流 electroosmosis and electroosmotic flo

13、w,1.电渗流现象 当固体与液体接触时,固体表面由于某种原因带一种电荷,则因静电引力使其周围液体带有相反电荷,在液-固界面形成双电层,二者之间存在电位差。,当液体两端施加电压时,就会发生液体相对于固体表面的移动,这种液体相对于固体表面的移动的现象叫电渗现象。 电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流(electroosmotic flow ,简称EOF)。,6/22/2018,Page 26,2.HPCE中的电渗现象与电渗流,石英毛细管柱,内充液pH3时,表面电离成-SiO-,管内壁带负电荷,形成双电层。,在高电场的作用下,带正电荷的溶液表面及扩散层向阴极移动,由于这些阳离子实际上是溶剂化的,故将引

14、起柱中的溶液整体向负极移动,速度电渗流。,6/22/2018,Page 27,3.HPCE中电渗流的大小与方向,电渗流的大小用电渗流速度电渗流表示,取决于电渗淌度和电场强度E。即 电渗流 = E电渗淌度取决于电泳介质及双电层的Zeta电势,即 = 00真空介电常数;介电常数;毛细管壁的Zeta电势。 电渗流 = 0 E实际电泳分析,可在实验测定相应参数后,按下式计算 电渗流 = Lef/teoLef 毛细管有效长度; teo电渗流标记物(中性物质)的迁移时间。,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,28,HPCE中电渗流的方向,电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质: 内表

15、面带负电荷,溶液带正电荷,电渗流流向阴极; 内表面带正负电荷,溶液带负电荷,电渗流流向阳极; 石英毛细管;带负电荷,电渗流流向阴极;改变电渗流方向的方法: (1)毛细管改性 表面键合阳离子基团; (2)加电渗流反转剂 内充液中加入大量的阳离子表面活性剂,将使石英毛细管壁带正电荷,溶液表面带负电荷。电渗流流向阳极。,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,29,4. HPCE中电渗流的流形,电荷均匀分布,整体移动,电渗流的流动为平流,塞式流动(谱带展宽很小); 液相色谱中的溶液流动为层流,抛物线流型,管壁处流速为零,管中心处的速度为平均速度的2倍(引起谱带展宽较大)。,2018/

16、6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,30,5. HPCE中电渗流的作用,电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的57倍; 各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为: + =电渗流 + +ef 阳离子运动方向与电渗流一致; - =电渗流 - -ef 阴离子运动方向与电渗流相反; 0 =电渗流 中性粒子运动方向与电渗流一致;(1)可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离;(2)改变电渗流的大小和方向可改变分离效率和选择性,如同改变LC中的流速;(3)电渗流的微小变化影响结果的重现性; 在HPCE中,控制电渗流非常重要。,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,31,三、HPCE中

17、影响电渗流的因素 factors influenced electroosmosis,1.电场强度的影响 电渗流速度和电场强度成正比,当毛细管长度一定时,电渗流速度正比于工作电压。,2.毛细管材料的影响 不同材料毛细管的表面电荷特性不同,产生的电渗流大小不同;,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,32,3. 电解质溶液性质的影响,(1)溶液pH的影响 对于石英毛细管,溶液pH增高时,表面电离多,电荷密度增加,管壁zeta电势增大,电渗流增大,pH=7,达到最大; pH3,完全被氢离子中和,表面电中性,电渗流为零。分析时,采用缓冲溶液来保持pH稳定。(2)阴离子的影响 在其他

18、条件相同,浓度相同而阴离子不同时,毛细管中的电流有较大差别,产生的焦耳热不同。 缓冲溶液离子强度,影响双电层的厚度、溶液黏度和工作电流,明显影响电渗流大小。缓冲溶液离子强度增加,电渗流下降。,6/22/2018,Page 33,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,34,毛细管内温度的升高,使溶液的黏度下降,电渗流增大。温度变化来自于“焦耳热”; 焦耳热:毛细管溶液中有电流通过时,产生的热量; HPCE中的焦耳热与背景电解质的摩尔电导、浓度及电场强度成正比。 温度每变化1,将引起背景电解质溶液黏度变化2%3%;,4. 温度的影响,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分

19、析教研室,35,5. 添加剂的影响,(1)加入浓度较大的中性盐,如K2SO4,溶液离子强度增大,使溶液的黏度增大,电渗流减小。,(2)加入表面活性剂,可改变电渗流的大小和方向; 加入不同阳离子表面活性剂来控制电渗流。 加入阴离子表面活性剂,如十二烷基硫酸钠(SDS),可以使壁表面负电荷增加,zeta电势增大,电渗流增大;(3)加入有机溶剂如甲醇、乙腈,使电渗流增大。,6/22/2018,36,淌度:带电离子在单位电场下的迁移速度; 淌度不同是电泳分离的基础。1.绝对淌度(absolute mobility)ab 无限稀释溶液中带电离子在单位电场强度下的平均迁移速度,简称淌度。可在手册中查阅。2

20、.有效淌度(effective mobility)ef 实际溶液中的淌度(实验中测定的)。 ef=aii ai 溶质i 的解离度;i 溶质i 在解离状态下的绝对淌度3.表观淌度 ap 离子在实际分离过程中的迁移速度(表观迁移速度): ap=ap E,四、淌度 mobility,6/22/2018,37,五、HPCE中的参数与关系式 parameters and relation in HPCE,1.迁移时间(保留时间) HPCE兼具有电化学的特性和色谱分析的特性。有关色谱理论也适用。,V外加电压;L毛细管总长度;2.分离效率(塔板数) 在HPCE中,仅存在纵向扩散,2=2Dt,扩散系数小的溶质

21、比扩散系数大的分离效率高,分离生物大分子的依据。,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,38,3.分离度,影响分离度的主要因素;工作电压V;毛细管有效长度与总长度比;有效淌度差。分离度可按谱图直接由下式计算:,D扩散系数;Lef毛细管有效长;L毛细管全长度;V工作电压;二者之差。,第二节 毛细管电泳的主要分离模式,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,39,一、教学目的:通过本节学习,毛细管电泳的基本分离模式。,二、教学要求掌握毛细管电泳的基本分离模式。,6/22/2018,40,影响分离效率的因素区带展宽 factors influenced the ef

22、ficiencyband broadening,1.纵向扩散的影响 在HPCE中,纵向扩散引起的峰展宽:2=2Dt 由扩散系数和迁移时间决定。大分子的扩散系数小,可获得更高的分离效率,大分子生物试样分离的依据。2.进样的影响 当进样塞长度太大时,引起的峰展宽大于纵向扩散。分离效率明显下降;理想情况下,进样塞长度: Winj= (24D t )1/2实际操作时进样塞长度小于或等于毛细管总长度的1%2%。,Animation动画,6/22/2018,41,3.焦耳热与温度梯度的影响,电泳过程产生的焦耳热可由下式计算:,m电解质溶液的摩尔电导;I工作电流:cm电解质浓度; 散热过程中,在毛细管内形成

23、温度梯度(中心温度高),破坏了塞流,导致区带展宽。 改善方法: (1)减小毛细管内径; (2)控制散热;,6/22/2018,42,4.溶质与管壁间的相互作用,存在吸附与疏水作用,造成谱带展宽; 蛋白质、多肽带电荷数多,有较多的疏水基,吸附问题特别严重,是目前分离分析该类物质的一大难题。 细内径毛细管柱,一方面有利于散热,另一方面比表面积大,又增加了溶质吸附的机会。 减小吸附的方法和途径:加入两性离子代替强电解质,两性离子一端带正电,另一端带负电,带正电一端与管壁负电中心作用,浓度约为溶质的100-1000倍时,抑制对蛋白质吸附,又不增加溶液电导,对电渗流影响不大。,6/22/2018,43,

24、5.其他影响因素,(1)电分散作用对谱带展宽的影响 当溶质区带与缓冲溶液区带的电导不同时,也造成谱带展宽;尽量选择与试样淌度相匹配的背景电解质溶液。(2)“层流”现象对谱带展宽的影响 一般情况下,HPCE中不存在层流,但当毛细管两端存在压力差时,出现抛物线形的层流; 产生的原因:毛细管两端液面高度不同。 实际操作时,保持毛细管两端缓冲溶液平面高度相同。,6/22/2018,44,第三节 高效毛细管电泳仪high performance capillary electrophoresis apparatus,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,45,一.仪器,6/22/201

25、8,46,二、仪器流程与主要部件 process and main assembly,电压:030kV; 分离柱不涂敷任何固定液; 紫外或激光诱导荧光检测器;(可检测到:10-1910-21 mol/L),6/22/2018,Page 47,1.高压电源,(1)030 kV 稳定、连续可调的直流电源;(2)具有恒压、恒流、恒功率输出;(3)电场强度程序控制系统;(4)电压稳定性:0.1%;(5)电源极性易转换;,2. 毛细管柱 (1)材料:石英:各项性能好;玻璃:光学、机械性能差; (2)规格:内径2075m,外径350400m;长度电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离

26、,同种类离子由于差速迁移被相互分离。 最基本、应用广的分离模式;,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,55,二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ,CGE,将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶。 其具有多孔性,类似分子筛的作用,试样分子按大小分离。能够有效减小组分扩散,所得峰型尖锐,分离效率高。 蛋白质、DNA等的电荷/质量比与分子大小无关,CZE模式很难分离,采用CGE能获得良好分离,DAN排序的重要手段。 特点:抗对流性好,散热性好,分离度极高。 无胶筛分技术:采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺。柱便宜、易制备

27、。,6/22/2018,Page 56,1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂,其浓度达到临界浓度,形成一疏水内核、外部带负电的胶束。,三、 胶束电动毛细管色谱(MECC ,MEKC)micellar electrokinetic capillary chromatography,MEKC,在电场力的作用下,胶束在柱中移动。,6/22/2018,Page 57,2. 电泳流和电渗流的方向相反,且电渗流 电泳 ,负电胶束以较慢的速度向负极移动;,5.色谱与电泳分离模式的结合。,3.中性分子在胶束相和溶液(水相)间分配,疏水性强的组分与胶束结合的较牢,流出时间长; 4.可用来分离中性物质,扩展了高效毛

28、细管电泳的应用范围;,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,58,1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术; 2. 毛细管内充有两性电解质(合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物),当施加直流电压(68V)时,管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度; 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关,在酸性溶液中带正电荷,反之带负电荷。在其等电点时,呈电中性,淌度为零;,四、毛细管等电聚焦 capillary isoelectric focusing,CIEF,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,59,4. 聚焦:具有不同

29、等电点的生物试样在电场力的作用下迁移,分别到达满足其等电点pH的位置时,呈电中性,停止移动,形成窄溶质带而相互分离;,5. 阳极端装稀磷酸溶液,阴极端装稀NaOH溶液; 6. 加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测; 7. 电渗流在CIEF中不利,应消除或减小。,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,60,1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子,试样离子的淌度全部位于两者之间,并以同一速度移动。 2. 负离子分析时,前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进,逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样,

30、阳极检测。,五、毛细管等速电泳 capillary isotachophoresis ,CITP,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,61,3. 不同离子的淌度不同,所形成区带的电场强度不同(=E),淌度大的离子区带电场强度小; 沿出口到进口,将不同区带依次排序1、2、3、4 电场强度依次增大。假设“2”号中离子扩散到“3”号,该区电场强度大,离子被加速,返回到“2”区;当“2”号中离子跑到“1”号区,离子被减速使之归队; 4. 特点:界面明显,富集、浓缩作用;,capillary isotachophoresis ,CITP,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分

31、析教研室,62,在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液,以电渗流为流动相,试样组分在两相间的分配为分离机理的电动色谱过程;,六、毛细管电渗色谱 capillary electroosmostic chromatography ,CEC,6/22/2018,Page 63,一、离子分析 analysis of ion,阳离子分析 迁移方向和电渗流方向一致; 4.5min内分离了24种金属离子; 阳极进样,阴极检测; 具有很高的灵敏度;,应用与进展,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,64,阴离子分析,阴离子电泳方向和电渗流方向相反、速度接近,分析时间长、效率低; 质量小、

32、电荷密度大的离子如:SO4-2、Cl-、F-等,电泳速率大于电渗流,阳极端流出,在阴极端无法检测; 加入电渗流改性剂,十六烷基三甲基溴化胺等,使电泳方向和电渗流方向一致,可在3.1min内分离36种阴离子;阴极进样,阳极检测;离子价态及存在形态分析;,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,65,二、药物分析 analysis of pharmaceutics,检测体液或细胞中某些代谢产物的分析; 尿液中的氨基酸含量作为临床诊断糖尿病的辅助手段; 采用毛细管区带电泳方式,在11min内分离17种药物;,6/22/2018,66,采用MEKC模式,鉴定违禁药物;效果优于HPLG法

33、,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,67,二、山茱萸及六味地黄丸中没食子酸的含量测定 没食子酸为中药山茱萸的有效成分,山茱萸为六味地黄丸药味之一。没食子酸在碱水中可电离成阴离子,故本法采用毛细管区带电泳法(CZE),肉桂酸为内标物,测定二者中没食子酸的含量,以控制其质量。,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,68,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,69,三、手性化合物分析 analysis of chiral compounds,合成获得单一手性化合物相当困难;528种手性合成药物,61中以单一对映体形式销售,其他为外消旋体;检测

34、分析也相当困难;研究热点;R-反应停是安眠药,S-式致胎儿畸形; HPCE分离分析手性化合物的方法:加入手性选择剂;形成配合物的稳定常数有差异,结合HPCE的高效率; 常用手性选择剂:环糊精及其衍生物;手性冠醚;手性表面活性剂(氨基酸衍生物、胆酸钠、牛磺脱氧胆酸及其钠盐、低聚糖等天然手性表面活性剂),2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,70,四、氨基酸与蛋白质分析 analysis of amino acids,采用MEKC模式,在25分钟内分离了23种丹酰化氨基酸;HPCE可取代传统的氨基酸分析仪;问题:吸附和检测;,6/22/2018,71,蛋白质分析,6/22/201

35、8,Page 72,五、核酸分析及DNA排序 analysis of nucleic acids and sequence of DNA,重要分析手段;图,酶解的双螺旋DNA限制性片段的分离;,小结,6/22/2018,Page 73,熟悉CZE, MECC, CGE , CEC, CE,HPCE , NACE等名词解释,掌握毛细管电泳分离原理和常用术语,毛细管电泳的基本分离模式。,2018/6/22,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,74,1.何谓电泳?电泳分离与哪些因素有关?毛细管电泳分离的描述参数是什么?2.何谓电渗?它的产生机制如何?3.讨论电渗流在毛细管电泳分离中的意义。4.比较液相色谱分析法与毛细管电泳分离的柱效和分离度。,练习题 Exercises,新疆医科大学药学院药分/分析教研室,2018/6/22,75,谢谢大家!,

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