1、临床免疫学检验质量控制,评价情况总结,临床检验科全面质量管理系统,内容提要,分析前质量控制分析中质量控制分析后质量控制,一、分析前质量控制,培训实验室工作人员；建立临床实验室质量管理体系；实验室规范设置；试剂盒的选择、评价、使用与保存仪器的校准、评价、维护和保养；标本采集、运输、核收、登记、处置与保存；质控品、校准品的选择、评价和使用。,1、试剂盒的选择、评价、使用与保存,乙肝等试剂盒 生产批准文号； 生产许可证 经营许可证 药品经营许可证 批批检定合格； 贴有防伪标签。 未作规定的试剂，应从如下方面进行评价： 灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性等。,试剂盒的评价,真实性和
2、可靠性 1、真实性：指测量值与实际值符合的程度（诊断试验应能提供哪些人确实有病（真阳性）和哪些人确实无病（真阴性）的指标）。 评价指标 相对灵敏度：是试验检出有病（即阳性）的人数占患者总数的比例，即真阳性率。相对灵敏度是衡量真阳性率的尺度。 相对特异性：是试验检出无病（即阴性）的人数占无病者总数的比例，即真阴性率。相对特异性是衡量真阴性率的尺度。,评价试剂盒相关指标一览表,相对灵敏度= TP /(TP + FN)； 相对特异性= TN/(FP + TN)； 相对符合率=(TP + TN)/(TP + FP + FN +TN)。 2、可靠性：是指在相同条件下重复试验获得相同结果的稳定程度。如试验
3、结果为均数，可用变异系数表示。 公式为：CV=s / x 100% S为标准差，x 为平均值。,列举范例（资料参考）,（1）标准品来源：中国药品生物制品检定所。 （2）标准品模式： 抗HCV预期阳性100份,预期阴性98份。 （3）试剂来源于H厂家。 （4）在一次对丙肝试剂评价试验中，通过使用该试剂对198份标准品进行检测，发现抗HCV预期阳性100份标本中，检出阳性98份、阴性2份：预期阴性98份标本中，检出阴性96份，阳性2份。,评价丙肝试剂盒相关指标一览表,经分析： 相对灵敏度 = TP /(TP + FN) =98/100=98% 相对特异性 = TN/(FP + TN) =96/98
4、=97.96% 相对符合率 = (TP + TN)/(TP + FP + FN +TN) =98+96/198=97.98%,试剂的正确使用与保存,按说明书操作，不能想当然； 详实记载-批号、有效期、使用情况及更换试剂记录等； 索要试剂商相关证件并有效保存，特别是批批检报告书； 试验用试剂 冰箱内？ 使用时？ 多余部分如何处置？ ,存在的问题: （1）将试剂盒从冰箱中拿出即用 后果是：温育时间不够，对一些弱阳性标本的检测出现假阴性，尤其是冬天没有空调的环境里。 要求： 试剂盒从冰箱中拿出室温放置20min以上，与室温平衡，然后再进行测定。 目的： 在后面的温育反应中，能使反应孔内的温度较快地达
5、到所要求的高度，以满足要求。,（2）商品化ELISA试剂盒中,洗板液由所提供的浓缩液稀释配置而成，故所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。 （3）OPD底物溶液必须在反应显色前临时配制。,2、目前免疫学检验所要控制的仪器,（1）移液器 利用称重法校准：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否正确，一般应在10%以内。 （2）水浴箱、温箱、冰箱 使用标准温度计，经常检查水浴箱温度计所示的温度与水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有1的误差。,（3）洗板机 设置洗板后的残留液一般不超过2ul；人工扣板时，垫纸不湿；定期检查管孔是否堵塞。 （4）酶标仪 经常维护其光学部分，防止滤光片霉变；定
6、期检查校准，使其保持良好的工作性能。,3、临床标本的收集与保存 免疫试验标本十分广泛， 体 液：如血清、血浆、各种积液； 分泌物：如唾液、脑脊液； 排泄物：粪便、尿液； 均可用于测定其中的抗原或抗体成分，一般使用血清。,可能影响测定结果的标本因素,患者标本中有可能会含有干扰酶免疫测定导致假阳性和假阴性结果的干扰因素，其分为两类： 1、内源性干扰因素：类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体、因使用鼠抗体治疗或诱导的抗鼠Ig抗体、交叉反应等。,2、外源性干扰因素：如标本溶血、细菌污染、储存时间过长、标本凝固不全、冷冻保存标本反复冻融等。 （1）尽量避免溶血 红细胞破
7、裂释放出具有过氧化物酶活性物质，增加非特异性显色而成假阳性。 （2）血清标本宜在新鲜时检测 如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性。 （3）尽量不用抗凝血，尤其不能用肝素抗凝血。 抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰也可产生假阳性。 （4）标本在冰箱中保存不宜过长 易导致血清IgG聚合，使间接法试剂本底加深。 （5）尽量避免污染,4、建立临床实验室质量管理体系 最重要的一点： “实验室质量管理文件”的书写文件包含：质量手册、程序性文件、作业指导书和相关表格、报告等质量记录。 程序性文件：包括管理性和技术性文件两种。 作业指导书：包括检测细则、标准操作程序(SOP) 以文件形式存
8、在，便于查阅，并确保得到实施。,（二）分析中质量控制 1、如何做好病毒性肝炎酶免检验质控物定值的选择？ 2、质控品的正确使用； 3、ELISA检测方法的注意事项； 4、室内质控的实际操作步骤；,1.如何做好病毒性肝炎酶免检验质控物定值的选择？ 质控物：高值、中值、低值及阴性值； 设置临界于cut-off(CO值)的低值弱阳性质控物是室内质控的关键； 低值弱阳性临界值质控物 是室内质控精密度观察的最敏感的窗口，是提示试验成功与否的最重要标志； 不是判断阴阳性的标准。,现有的室内质控血清 项目 梅毒螺旋体抗体 质控血清 抗HIV 国家二级标准物质 抗HCV 国家二级标准物质 抗HAVIgM 质控血
9、清 HBcAbIgM 质控血清 HBcAb 质控血清 HBeAb 质控血清 HBeAg 质控血清 HBsAb 质控血清 HBsAg 国家二级标准物质 由国家质量监督检验检疫总局批准， 可在国家标准物质信息平台上检索到，网址：http：/,2、质控品的正确使用,用 途：灵敏度控制、精密度控制 。 稳定性： 1、室温（20-25 ，相对湿度20-25%）可稳定两周； 2、高温高湿度（37 ，相对湿度60-80% ）条件下，可稳定3天； 3、在冰箱内冷藏（2-8 ）保存，可稳定一年； 4、-20保存可稳定一年以上。,室内质控血清的规格,HBeAg质控血清 定值 适用试剂1NCU/ml 进口的试剂2N
10、CU/ml 国产试剂4NCU/ml 国产试剂 新的4NCU/ml原0.25 NCU/ml,HBeAb质控血清 定值 适用试剂 1NCU/ml 进口的试剂 2NCU/ml 进口的试剂 4NCU/ml 国产试剂,3、 检测方法的注意事项, 结果判读 卫药发（1995）第32号及（1996）第25号文要求： 凡开展ELISA检测项目的单位，必须使用酶标仪判读结果，不准使用目测法。, ELISA测定的“灰区”,是指ELISA测定时，吸光度处于Cutoff值周围的一定区域，其结果应为“可疑”。需重复实验或换试剂重测以确定其阴、阳性，如仍落在灰区范围内则报告值。 灰区概念对血站系统的献血员筛查尤为重要 灰
11、区的设置有两种 （1）C.O（1CV），CV为该试剂的批内CV（一般在15%-20%间）。如：HBsAg 1.05 （118%） （2）C.O2s，s为实验室做室内质控OCV的s。如：HBsAg 1.052 0.189, 原始记录,（1）分类别、客观、如实、准确、及时登记，项目齐全、书写清晰、规范； （2）阴、阳性与可疑结果不能用“ +、- 、”表示，必须用汉字书写或盖印章； （3）ELISA试验每次检测必须有原始酶标仪打印结果，其S/c.o值应与原始登记结果一一对应； （4）定量试验结果必须采用法定的国际计量单位；,4、室内质控的实际操作步骤,1）设定靶值和控制限 2）特殊情况的处理：如Cr
12、ubbs氏法 3）更换试剂及质控品： 应在“旧”批号质控品使用结束前与“新”批号质控品一起测定，设立新的靶值和控制限。 4）绘制质控图及记录质控结果：根据质控图的靶值和控制限绘制Levey-Jennings控制图，将原始质控结果记录在质控图表上，保留打印的原始质控记录。,5）质控规则的应用： 判断每一分析批是在控还是失控。 6）失控情况处理： 失控-填写失控报告单-交专业室主管（组长）- 作出是否发出检验报告的决定。,7）失控原因分析 操作失误、试剂、校准物、质控品的失效，仪器维护不良以及采用的质控规则、控制限范围、一次测定的质控标本数等。 失控信号出现：意味着与测定质控品相关的那批病人标本报告可能作废。 8）查明失控原因 随机挑选5%或10%的患者标本进行重测，依既定标准判断先前测定结果是否可接受，对失控做出正确判断。,（三）分析后质量控制,1、实验结果报告 （1）统一的报告形式，包含必要的信息，应有核对制度，当天的报告应由主管或主管委托人审核，签字或盖章后方能发出。 （2）各项目原始数据及测定结果应保存310年，便于查询。 （3）如遇危及生命的“紧急值”，应立即通知临床诊治医师予以处置。,2、室内质控数据管理（1）每月室内质控数据处理；（2）每月室内质控数据保存；（3）每月上报的室内质控数据图表。,谢谢大家！,
