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荧光分光光度计的原理及应用.ppt
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1、2020 4 27 荧光分光光度计的原理及应用 2020 4 27 一 分子荧光的产生 1 电子激发态的多重度单重激发态S 电子自旋方向和处于基态轨道的电子配对 第一节荧光分光光度法原理 三重激发态T 电子自旋方向和处于基态轨道的电子平行 2020 4 27 2 分子能级与跃迁基态 S0 激发态 S1 S2激发态振动能级 吸收特定频率的辐射 激发态 基态 多种途径和方式 见能级图 速度最快 激发态寿命最短的途径占优势 2020 4 27 2020 4 27 二 激发光谱与荧光光谱 1 荧光的激发光谱曲线固定测量波长 选最大发射波长 化合物发射的荧光 磷光 强度与激发光波长的关系曲线 图中曲线I
2、 激发光谱曲线的最高处 处于激发态的分子最多 荧光强度最大 2020 4 27 2 荧光光谱 固定激发光波长 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线 图中曲线II 问题 荧光 磷光 的激发光波长如何选择 Stokes位移 激发光谱与发射光谱之间的波长差值 发射光谱的波长比激发光谱的长 2020 4 27 三 荧光强度和溶液浓度的关系 1定量依据荧光强度If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率 If Ia由朗 比耳定律 Ia I0 1 10 lc If I0 1 10 lc I0 1 e 2 3 lc 浓度很低时 将括号项近似处理后 If 2 3 I0 lc Kc 浓度高时如何 2020 4 2
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