1、蒸汽灭菌效果验证作业指导书验证原则：本所的高压灭菌器必须用生物指示法进行灭菌效果验证。验证周期暂定为半年。实验材料：四环牌压力蒸汽灭菌生物指示剂(由嗜热脂肪芽孢杆菌片、恢复培养基和外管组成)方法：1、将生物指示剂放入密封容器中，分别放置在高压灭菌器蒸汽口处、底部排气口处及上下左右共 6 处，分别在空载和满载（满载时不超过总体积的 2/3）时按规定的灭菌温度和时间进行灭菌处理，分别验证不同状态下的灭菌效果；2、灭菌完毕，即刻将生物指示剂取出，盖朝上垂直握于手中，用专门工具夹碎管内安瓿，让培养液流出浸没菌片，置于 56恒温培养箱内或配套的微型培养器内培养 24 小时观察初步结果，48 小时观察最终
2、结果。同时，要用未经灭菌的生物指示剂作为阳性对照；3、结果判断：培养后生物指示剂中的溴甲酚紫培养液由紫色澄清液体变为黄色澄清液体即表示有菌生长，判定为灭菌不合格；培养液仍为紫色澄清液体为无菌生长，同时阳性对照管中的嗜热脂肪杆菌生长正常即培养液由紫色澄清液体变为黄色澄清液体，判定为灭菌合格。 注意事项：1、 将生物指示剂从灭菌器内取出或从冰箱内取出后，需在室温下放 10min 左右，再夹碎安瓿，以免过热或过冷夹碎外管；2、 液体培养基的 PH 值低于 7.0 或高于 7.5，均可使嗜热脂肪杆菌不能生长；3、 培养温度须在 5665之间，否则可导致嗜热脂肪杆菌生长不良，或不能生长；4、 灭菌处理后，生物指示剂中的液体培养基颜色与压力蒸汽灭菌前比较会变浅，显呈浅紫色；5、 用恢复培养液在 56培养时间过长（72 小时以上） ，阳性对照管中培养液的黄色容易消退，培养液逐渐干燥，应注意每天观察，随时记录培养结果。
