1、第七章分子发光分析法 一 分子荧光与磷光产生过程luminescenceprocessofmolecularfluorescencephosphorescence二 激发光谱与荧光光谱excitationspectrumandfluore scencespectrum三 荧光的产生与分子结构关系relationbetweenfluorescenceandmolecularstructure四 影响荧光强度的因素factorinfluencedfluorescence 第一节分子荧光与磷光 molecularluminescenceanalysis molecularfluorescencean
2、dphosphorescence 一 荧光与磷光的产生过程luminescenceprocessofmolecularfluorescencephosphorescence 由分子结构理论 主要讨论荧光及磷光的产生机理 1 分子能级与跃迁分子能级比原子能级复杂 在每个电子能级上 都存在振动 转动能级 基态 S0 激发态 S1 S2 激发态振动能级 吸收特定频率的辐射 量子化 跃迁一次到位 激发态 基态 多种途径和方式 见能级图 速度最快 激发态寿命最短的途径占优势 第一 第二 电子激发单重态S1 S2 第一 第二 电子激发三重态T1 T2 2 电子激发态的多重度 电子激发态的多重度 M 2S
3、1S为电子自旋量子数的代数和 0或1 平行自旋比成对自旋稳定 洪特规则 三重态能级比相应单重态能级低 大多数有机分子的基态处于单重态 S0 T1禁阻跃迁 通过其他途径进入 见能级图 进入的几率小 2 激发态 基态的能量传递途径 电子处于激发态是不稳定状态 返回基态时 通过辐射跃迁 发光 和无辐射跃迁等方式失去能量 激发态停留时间短 返回速度快的途径 发生的几率大 发光强度相对大 荧光 10 7 10 9s 第一激发单重态的最低振动能级 基态 磷光 10 4 10s 第一激发三重态的最低振动能级 基态 非辐射能量传递过程 振动弛豫 同一电子能级内以热能量交换形式由高振动能级至低相邻振动能级间的跃
4、迁 发生振动弛豫的时间10 12s 内转换 同多重度电子能级中 等能级间的无辐射能级交换 通过内转换和振动弛豫 高激发单重态的电子跃回第一激发单重态的最低振动能级 外转换 激发分子与溶剂或其他分子之间产生相互作用而转移能量的非辐射跃迁 外转换使荧光或磷光减弱或 猝灭 系间跨越 不同多重态 有重叠的转动能级间的非辐射跃迁 改变电子自旋 禁阻跃迁 通过自旋 轨道耦合进行 辐射能量传递过程 荧光发射 电子由第一激发单重态的最低振动能级 基态 多为S1 S0跃迁 发射波长为 2的荧光 10 7 10 9s 由图可见 发射荧光的能量比分子吸收的能量小 波长长 2 2 1 磷光发射 电子由第一激发三重态的
5、最低振动能级 基态 T1 S0跃迁 电子由S0进入T1的可能过程 S0 T1禁阻跃迁 S0 激发 振动弛豫 内转移 系间跨越 振动弛豫 T1发光速度很慢 10 4 100s 光照停止后 可持续一段时间 二 激发光谱与荧光 磷光 光谱excitationspectrumandfluore scencespectrum 荧光 磷光 光致发光 照射光波长如何选择 1 荧光 磷光 的激发光谱曲线固定测量波长 选最大发射波长 化合物发射的荧光 磷光 强度与照射光波长的关系曲线 图中曲线I 激发光谱曲线的最高处 处于激发态的分子最多 荧光强度最大 2 荧光光谱 或磷光光谱 固定激发光波长 选最大激发波长
6、化合物发射的荧光 或磷光强度 与发射光波长关系曲线 图中曲线II或III 2020 6 15 复旦大学区别分子的荧光发射和磷光发射 并讨论其原因 3 激发光谱与发射光谱的关系 a Stokes位移激发光谱与发射光谱之间的波长差值 发射光谱的波长比激发光谱的长 振动弛豫消耗了能量 b 发射光谱的形状与激发波长无关电子跃迁到不同激发态能级 吸收不同波长的能量 如能级图 2 1 产生不同吸收带 但均回到第一激发单重态的最低振动能级再跃迁回到基态 产生波长一定的荧光 如 2 c 镜像规则通常荧光发射光谱与它的吸收光谱 与激发光谱形状一样 成镜像对称关系 镜像规则的解释 基态上的各振动能级分布与第一激发
7、态上的各振动能级分布类似 基态上的零振动能级与第一激发态的二振动能级之间的跃迁几率最大 相反跃迁也然 200 250 300 350 400 450 500 荧光激发光谱 荧光发射光谱 nm 蒽的激发光谱和荧光光谱 三 荧光的产生与分子结构的关系relationbetweenfluorescenceandmolecularstructure 1 分子产生荧光必须具备的条件 1 具有合适的结构 2 具有一定的荧光量子产率 荧光量子产率 荧光量子产率与激发态能量释放各过程的速率常数有关 如外转换过程速度快 不出现荧光发射 2 化合物的结构与荧光 1 跃迁类型 的荧光效率高 系间跨越过程的速率常数小
8、 有利于荧光的产生 2 共轭效应 提高共轭度有利于增加荧光效率并产生红移 3 刚性平面结构 可降低分子振动 减少与溶剂的相互作用 故具有很强的荧光 如荧光素和酚酞有相似结构 荧光素有很强的荧光 酚酞却没有 4 取代基效应 电子基团 使荧光增强吸电子基团 使荧光减弱重原子效应 四 影响荧光强度的因素relationbetweenfluorescenceandmolecularstructure 影响荧光强度的外部因素1 溶剂的影响除一般溶剂效应外 溶剂的极性 氢键 配位键的形成都将使化合物的荧光发生变化 2 温度的影响荧光强度对温度变化敏感 温度增加 外转换去活的几率增加 3 溶液pH对酸碱化合
9、物 溶液pH的影响较大 需要严格控制 5 溶液荧光的猝灭 碰撞猝灭 组成化合物猝灭氧的熄灭作用等 自猝灭 第六章分子发光分析法 一 仪器与结构流程instrumentandgeneralprocess二 荧光分析法和应用fluorescenceanalysisandapplication三 磷光分析法的应用phosphorescenceanalysisandapplication 第二节分子荧光与磷光分析法 molecularluminescenceanalysis molecularfluorescenceandphosphorescenceanalysis 一 仪器结构流程 测量荧光的仪器
10、主要由四个部分组成 激发光源 样品池 双单色器系统 检测器 特殊点 有两个单色器 光源与检测器通常成直角 基本流程如图 单色器 选择激发光波长的第一单色器和选择发射光 测量 波长的第二单色器 光源 氙灯和高压汞灯 染料激光器 可见与紫外区 检测器 光电倍增管 二 荧光分析方法与应用 1 特点 1 灵敏度高比紫外 可见分光光度法高2 4个数量级 为什么 检测下限 0 1 0 1 g cm 3相对灵敏度 0 05mol L奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液 2 选择性强既可依据特征发射光谱 又可根据特征吸收光谱 3 试样量少缺点 应用范围小 2 定量依据与方法 1 定量依据荧光强度If正比于吸收的光量Ia和荧
11、光量子效率 If Ia由朗 比耳定律 Ia I0 1 10 lc If I0 1 10 lc I0 1 e 2 3 lc 浓度很低时 将括号项近似处理后 If 2 3 I0 lc Kc 2 定量方法 标准曲线法 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度 绘制标准曲线 再在相同条件下测量未知试样的荧光强度 在标准曲线上求出浓度 比较法 在线性范围内 测定标样和试样的荧光强度 比较 3 荧光分析法的应用 1 无机化合物的分析与有机试剂配合物后测量 可测量约60多种元素 铍 铝 硼 镓 硒 镁 稀土常采用荧光分析法 氟 硫 铁 银 钴 镍采用荧光熄灭法测定 铜 铍 铁 钴 锇及过氧化氢采用催化荧光法测定
12、铬 铌 铀 碲采用低温荧光法测定 铈 铕 锑 钒 铀采用固体荧光法测定 2 生物与有机化合物的分析脂肪族化合物芳香族化合物 2020 6 15 7 4磷光分析法 7 4 11 磷光的特点磷光辐射的波长比荧光长磷光寿命比荧光长磷光的寿命和辐射强度对于重原子和顺磁性离子是极其敏感的 2020 6 15 2 低温磷光激发三重态的寿命长 非辐射过程概率大 所以在低温下测量 第六章分子发光分析法 第三节化学发光分析法 molecularluminescenceanalysis chemiluminescenceanalysis 一 基本原理principle 1 化学发光反应在化学反应过程中 某些化合物接受能量而被激发 从激发态返回基态时 发射出一定波长的光 A B C D D D h 1 能够发光的化合物大多为有机化合物 芳香族化合物 2 化学发光反应多为氧化还原反应 激发能与反应能相当 E 170 300kJ mol 位于可见光区 3 发光持续时间较长 反应持续进行 化学发光反应存在于生物体 萤火虫 海洋发光生物 中 称生物发光 bioluminescence
