1、精品文档随意编辑Cell Counting Kit （CCK 试齐U盒）目”产品名称规格包装025Cell Counting Kit100次1mL026Cell Counting Kit500次5mL027Cell Counting Kit1000 次10mL028Cell Counting Kit3000 次30mL产品简介：Cell Counting Kit简称CCK试剂盒，为 MTT法的替代方法，是一种基于WST （水溶性四陛盐，化学名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四陛单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和 细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒
2、。CCK法与其它检测方法之间的比较:细胞计数方法MTT法XTT法WST-1 法CCK法形成的formazan 的水溶性差好好好产品性状粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用现配现用无需预制无需预制检测灵敏度高很高很高高检测时间较长较短较短最短检测波长560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm细胞毒性高，细胞形态完全消失很低，细胞形态不变很低，细胞形态不变很低，细胞形态不变试剂稳定性一般较差一般很好大批量样品检测可以非常适合非常适合非常适合便捷程度一般便捷便捷非常便捷CCK用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验操作说明：一、制作标准曲线（测
3、定细胞具体数量时）1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。般要做3-5个细胞浓度梯度,2、按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度, 每组3-6个复孔。3 、接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标（ X 轴） ， OD 值为纵坐标（ Y 轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK 后的培养时间 。 ）二、细胞 活性 检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100科1/孔）。将培养板放
4、在培养箱中预培养（在 37 C ,5% CO2的条件下）。2、向每孔加入10 的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。3 、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。4 、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。5、如果暂时不测定 OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 L 0.1M的HCL溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。三、细胞增值- 毒性检测1、在96孔板中配置100科L的细胞悬液。将培养板在培养箱预 培养24小时（在37 C, 5% CO 2的条件下）。2、向培养板 加入10 不同浓度的待测物
5、质。3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如： 6、12、24或48小时）。12后/24h4、想每孔加入10 CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。5 、将培养板在培养箱内 孵育 1-4 小时 。 （ 2h 后）6 、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。7、如果暂时不测定 OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 L 0.1M的HCL溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生变化。注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次， 然后加入新的培
6、养基） ， 去掉药物影响。 当然药物影响比较小的情况下， 可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。备注：建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入 CCK 试剂后的培养时间。 （怎么判断哪个时间好？）有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。加入CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD 值读数。白细胞可能需要培养较长时间。当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔（100科L培养基）。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔（100培养基）。如果要使用24孔板或6孔板实
7、验，请先计算每孔相应的接种量，并按照 每孔培养基总体积的 10% 加入 CCK 溶液 。如果没有450nm 的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片，但是450nm 滤光片的检测灵敏度最高。培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影 响。活力计算：细胞活力* （%） =A（加药）-A （空白）/A （0力口药）-A （空白） X 100A （加药） ：具有细胞、 CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度A （空白） ：具有培养基和 CCK 溶液而没有细胞的孔的吸光度A （ 0 加药） ：具有细胞、 CCK 溶液而 没有药 物溶液的孔的吸光度* 细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力保存条件：4 干燥避光保存，有效期一年。
