1、冈崎片段,目录,冈崎片段的发现者冈崎令治,DNA半保留复制(什么是冈崎片段),冈崎片段的实验检测,意义及展望,PART ONE,冈崎片段的发现者,冈崎令治(1930-1975) 广岛白岛人 1945广岛被炸原子弹 1960在华盛顿大学留学 1963担任名古屋大学副教授 1966发现冈崎片段 1972进一步发现与冈崎片段相关的RNA 成果构建起DNA半不保留复制模型 1975因早年广岛核爆辐射引起的白血病发作病逝。 (夫人冈崎恒子继续他的研究),PART TWO,DNA半保留复制,DNA半保留复制,PART THREE,冈崎片段的实验检测,冈崎提出两个预测 1 新合成的DNA 存在许多小的片段
2、2如果消除了使DNA片段在一起的连接酶, 将导致新生短链的明显累计,冈崎片段的实验检测,脉冲标记实验 T4侵染大肠杆菌 3H标记脱氧胸苷(DNA合成的直接前体之一) 基于脉冲标记(短时间饲喂)被标记的dTTP 分离DNA,在碱中沉淀,变性,让新合成的单链和模链分开 密度梯度离心,用从噬菌体DNA带的距离表示沉降距离。 短时间(2.7.15)合成较短的DNA片段(大约1000-2000个) 随着时间的脉冲时间推移出现较大的DNA分子 两条子链不连续复制。,脉冲标记实验,冈崎片段的实验检测,抑制DNA连接酶导致新生短链累积的实验 有热敏DNA连接酶突变基因(tsA80,tsB20)的T4噬菌体突变
3、体侵染大肠杆菌 温度从20变动到43,冈崎片段的实验检测,检测尿嘧啶实验 1使用有缺失的dUTPase(水解dUTP,脱氧尿苷三磷酸酶) 2使用有缺失的尿嘧啶-N-糖苷酶 使用1 片段变短 使用2 没有片段 新标记DNA大约50%是冈崎片段,冈崎片段的实验检测,半保留复制,需要引物,半不连续复制,双向复制,PART FOUR,意义及展望,YOUR TITLE,解释了DNA聚合只能从5到3复制和双向平行DNA的矛盾,真核生物冈崎片段的了解还很少 它对于是否有其他的影响?,线粒体D-环复制可能是双链连续,有温度敏感强突变体测试,高温条件下仍得到低分子量,认为两条链均不连续,THANKS,SALUTE TO APPLE.INC,