1、ICS67.040C53DB33浙江省地方标准DB33/T 7052008农产品中苯并咪唑类农药残留量的测定高效液相色谱法Determination of benzimidazole in agricultural products -High performance liquid chromatography2008-09-18 发布2008-10-18 实施浙江省质量技术监督局发布DB33/T 705 2008前言本标准的附录A 为资料性附录。本标准由农业部稻米及制品质量监督检验测试中心提出。本标准由并浙江省农业厅归口。本标准起草单位： 农业部稻米及制品质量监督检验测试中心、 中国水稻研究
2、所、 浙江大地农作物产品质量安全检测中心。本标准主要起草人：牟仁祥、陈铭学、闵捷、应兴华、吴俐、许萍、曹赵云。IDB33/T 705 2008农产品中苯并咪唑类农药残留量的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了用反相离子对高效液相色谱法测定农产品中多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵和2氨基苯并咪唑残留量的方法。本标准适用于农产品中多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵苯并咪唑类农药及代谢物残留量的测定。本标准检出限：本方法最小检出量多菌灵为1.4 10-9 g ，噻菌灵为 1.0 10-9 g，甲基硫菌灵为 1.8 10-9 g， 2氨基苯并咪唑为 2 10-9g。若称取 25 g 试样，进样量为 40 L，本标
3、准的最低检出浓度多菌灵为 0.07 mg kg ，甲基硫菌灵为0.09 mg kg ，噻菌灵为 0.05 mg kg ， 2氨基苯并咪唑为 0.10 mg kg 。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度( 正确度与精密度 )第 1部分 : 总则与定义GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度( 正确度与精密度 )第2部
4、分 : 确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法（neq ISO 3936 ）3原理样品中的苯并咪唑类农药用乙腈提取，硫酸镁盐析，沉淀法净化，经反相离子对色谱分离，根据保留时间定性，外标法定量。4试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水为GB/T 6682 二级。4.1乙腈：色谱纯。4.2甲醇：色谱纯。4.3丙酮：色谱纯。4.4三乙胺：色谱纯。4.5磷酸。4.6硫酸镁： 140 烘烤 4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。4.7乙二胺基 N 丙基（ PSA ）：40 m，60?。1DB33/T 705 20084.8 癸烷磺酸
5、钠：纯度 98。4.9离子对试剂（ 4.1 mmol/L ）：吸取 7.0 mL 磷酸于 200 mL 水中，加入1.0 g 癸烷磺酸钠，溶解，再加入 10.0 mL 三乙胺，稀释至 1 000 mL 。4.10流动相： 量取 600mL离子对试剂，加入 400mL甲醇，搅拌后超声波震荡脱气， 此溶液 pH 值应约为2.4 。4.11多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵和2氨基苯并咪唑标准品：纯度98。4.12标准储备溶液（ 100 mg/L ）：分别准确称取 0.0100 g 多菌灵、噻菌灵、甲基硫菌灵和2氨基苯并咪唑标准品 ,用丙酮溶解定容至 100mL ，0 4避光保存。4.13混合标准工作溶液：
6、准确吸取适量的标准储备溶液，在30 40 下用氮气缓缓吹干，用流动相配制成浓度系列为 0.5 mg/ L， 1.0mg/ L ， 2.0 mg/L ， 5.0mg/L 的混合标准工作溶液，0 4避光保存。5 仪器5.1高效液相色谱仪（附可编程紫外检测器） 。5.2高速分散机。5.3离心机。5.4天平（感量 0.001g）。5.5天平（感量 0.0001g）。5.6组织捣碎机。6 试样的制备取不少于1000g 样品，去除杂物， 取可食部分， 将样品缩分至250g，匀浆后密封， 于 4冷藏保存。7 分析步骤7.1样品处理7.1.1提取称取 25 g 试样（精确到0.01 g ）于 100mL具塞离
7、心管中，加入25.0 mL 乙腈，高速匀浆2 min ，加入 15 g 无水硫酸镁，加盖后，剧烈振摇1min，静置 30 min ， 2 500 r/min 离心 5 min ，使乙腈和水相分层。7.1.2净化移取 1.0 mL上清液于 2mL 离心管中，加入200 mg 无水硫酸镁和 50 mg PSA(4.7) ， 2 500 r/min 离心5 min 。准确吸取 0.5 ml 上清液，然后加入离子对试剂0.5 mL，振荡后过 0.45 m滤膜，待测。7.2 测定7.2.1色谱参考条件7.2.1.1色谱柱： C18 柱， 250 mm 4.6 mm, 5m。7.2.1.2检测波长：多菌灵
8、275 nm，甲基硫菌灵 265 nm，噻菌灵 300 nm， 2氨基苯并咪唑 275 nm。7.2.1.3柱温： 45 。7.2.1.4进样量： 50 L。7.2.1.5流速： 1.25 mL/min。2DB33/T 705 20087.2.2 品 定按 器参考条件， 准工作液和 溶液等体 交替 ，根据保留 定性，外 法定量。8 果 算 品中被 含量以 量分数W ，数 以毫克每千克（mg/kg）表示，按式 (1) 算：c V1000f (1)Wm 1000式中：W 品中被 的 量 度， 位 毫克每千克（mg/kg ）；c 中被 量 度， 位 毫克每升（mg/L）；V加入乙 体 ， 位 毫升（
9、mL）；m 的 量的数 ， 位 克（g）。f 稀 倍数（f=2， 品中加入了离子 ， 好稀 了一倍）。 算 果表示到二位有效数字。 品含量超1 mg/kg 表示到三位有效数字。9 精密度本 准的精密度数据是按照 GB/T 6379.1 和 GB/T 6379.2 的 定确定的。重复性和再 性的 以95%的可信度来 算。9.1重复性在重复性条件下 得的两次独立 果的 差 不超 重复性限程 表 1、表 2 和表 3。表 1 添加水平及重复性和再 性方程（基 大米）化合物名称含量范围（ mg/kg）重复性限 r多菌灵0.50-2.00r = 0.0063+0.0880甲基硫菌灵0.50-2.00r
10、= 0.0077+0.0822噻菌灵0.50-2.00r = -0.0062+0.09762- 氨基苯并咪唑0.50-2.00r = -0.0196+0.0975注 :m 为两次测定结果的算术平均值r ，被 物的含量及重复性方再现性 Rm R = 0.0024+0.0978 mm R = 0.0076+0.0840 mm R = -0.0072+0.1006 m m R = -0.0208+0.1006 m表 2 添加水平及重复性和再 性方程（基 辣椒）化合物名称含量范围（ mg/kg）重复性限 r多菌灵0.50-2.00r = 0.0208+0.0613甲基硫菌灵0.50-2.00r = 0
11、.0047+0.0884噻菌灵0.50-2.00r = -0.0234+0.10512- 氨基苯并咪唑0.50-2.00r = 0.0161+0.0690注 :m 为两次测定结果的算术平均值再现性 Rm R = 0.0328+0.0568 mm R = 0.0052+0.0911 mm R = -0.0277+0.1206 m m R = 0.0164+0.0861 m表 3 添加水平及重复性和再 性方程（基 葡萄）化合物名称含量范围（ mg/kg）重复性限 r再现性 R多菌灵0.50-2.00r = 0.0009+0.0959mR = 0.0035+0.1072m甲基硫菌灵0.50-2.00
12、r = 0.0023+0.0895mR = 0.0022+0.0992m3DB33/T 705 2008噻菌灵0.50-2.00r = -0.0135+0.0853mR = -0.0130+0.0859m2- 氨基苯并咪唑0.50-2.00r = 0.0176+0.0601mR = 0.0287+0.0556m注 :m 为两次测定结果的算术平均值如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。 9.2 再现性在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限程见表 1、表 2 和表 3。10 准确度本方法在0.5mg/kg2.0mg/kg 添加浓度的回收率在70%1
13、10%。附录 A（资料性附录）四种苯并咪唑类农药标准色谱图和空白苹果样品标准添加色谱图mAU60ello50zyahdtnmemeibze40ataidahnntea-30bhrp3ao9ci5h.-1t1207-891.399.01010024681012mAU图 A.1四种苯并咪唑类农药标准色谱图25elloy20hztamedmniezetbaaa15dnihnateh-bpro8ai710ch5-t.19-16912.995.010024681012图 A.2空白苹果样品标准添加色谱图R，被测物的含量及再现性方elozimiznebonima-2-995.3114minelozimiznebonima-2-936.31775.5114min4
