1、实 验二 十 五基因 重 组实 验 重 组 体 的 筛 选与 鉴定原理 限制性内切核酸酶酶切鉴定： 具体原理见实验二十一。PCR 反应鉴定：具体原理见实验十八。试剂 1、DNA 模板2、引物3、Taq DNA 聚合酶4、dNTPs（dATP、dGTP、dCTP、dTTP）5、10 PCR 反应缓冲液： 100mmol/L Tris-HCl pH 8.3 ，500mmol/LKCl ， 15mmol/L MgCl 2，0.1%明胶6、矿物油1、超纯水8、EcoR I 酶解反应液（ 10）:1mol/L pH7.5Tris-HCl , 0.5mol/LNaCl ,0.1mol/LMgCl 2。9、
2、Hind III酶解反应液（10）：1mol/L pH7.4Tris-HCl , 1mol/LNaCl ,0.07mol/LMgCl 2。3.50TAE电泳缓冲液：称取242 克Tris，加入57.1ml冰乙酸，100ml 0.5mol/L EDTA ，调节 pH 至 8.0，加蒸馏水至 1000ml。10、.凝胶加样缓冲液： 0.25%溴酚蓝、 0.25%二甲苯青 FF、40%蔗糖水溶液（ w/v ）。11、1%（ 1.5%）琼脂糖凝胶： 1TAE 100ml 含 1g（ 1.5g）琼脂糖。器材 1、DNA 扩增仪2、电泳仪、电泳槽3、微量移液器4、紫外投射仪5、0.5ml 塑料离心管6、样
3、品槽模板（梳子）7、锥型瓶（ 100ml 或 50ml ）8、一次性塑料手套9、凝胶成像系统操作步骤 1. 酶切反应体系的建立（ 20l 反应体系）按下表要求配制酶切反应体系质粒 DNA6l10Buffer2lHindIII1lH2O10lEcoR I1l混匀后置 37水浴 3h。2. PCR 反应体系的制备 (25 l 反应体系 ) 按下表要求配制酶切反应体系DNA2l10Buffer2.5 ldNTP0.1lH O17.2l2Primer-10.1lTaqE1 lPrimer-20.1l50%甘油2 l混匀后， 2000rpm 离心 30sec，然后按945min9440sec5540se
4、c35cycles7290sec723min3. 电泳： 1%琼脂糖凝胶（酶切）和1.5%琼脂糖凝胶（ PCR 反应）1将 20l 酶切和 PCR 产物进行电泳，观察结果。Vocabulary in Biochemical technologyAAbsorbance吸光度Absorbent吸附剂Absorption chromatography吸附层析Absorption spectrum吸收光谱Acrylamide, Aa/Acr丙烯酰胺（单体）Adenine, A腺嘌呤Affinity chromatography亲和层析Agarose琼脂糖Agarose gel electrophore
5、sis ，AGE琼脂糖凝胶电泳Allele specific oligonucleotide, ASO等位基因特异性寡核苷酸杂交Ammonium persulfate, AP过硫酸胺Angle rotor角式转头Anion exchange chromatography阴离子交换层析CCarrier ampholyte载体两性电解质Cation exchange chromatography阳离子交换层析Celluloseacetate membraneelectro醋酸纤维薄膜电泳-phoresis ，（CAME ）Cellulose ion-exchangers纤维素离子交换剂Centri
6、fuge离心机Centrifugal force离心力Centrifugal technique离心技术Coenzyme辅酶Column chromatography柱层析2Cytosine, CDDenature gradient gel eletro -phoresis , DGGE Deoxyribonucleic acid, DNADialysisDifferential centrifugationDiscontinuous PAGEEEletro-osmosisEmission spectrumExclusion chromatographyGGel chromatographyG
7、el filtrationGuanine ，GHHomogenizerHolozymaseIIon-exchange chromatography Ion-exchange gel Ion-exchange resin Isoelectric focusing, IEF IsoenzymeLLigandMMelting temperature, TmMatrixMobile phase胞嘧啶变性梯度凝胶电泳脱氧核糖核酸透析差速离心不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳电渗发射光谱排阻层析凝胶层析凝胶过滤鸟嘌呤匀浆器全酶离子交换层析离子交换凝胶离子交换树脂等电点聚焦同工酶配基溶解温度载体流动相3Molecul
8、ar sieve filtration分子筛过滤NN,N,N ,N- 四 亚 甲 基N,N,N ,N-methylencBisacrylamide ,Bis双丙烯酰胺N,N,N ,N-tetramethylethylenedi四甲基乙二胺-amine, TEMEDOOsmosis渗透PPaper chromatography纸层析Partition chromatography分配层析Partition coefficient分配系数Photoelectric colorimetry光电比色法Plasmid质粒Polyacrylamidegel electrophoresis,聚丙烯酰胺凝胶P
9、AGEPolymerase chain reaction, PCR聚合酶链反应Primer引物RRelative centrifugal force, RCF相对离心力Restriction endonuclease，RE限制性内切酶Restrictionfragmentlength限制性片段长度多态polymorphism, RFLP性Rate zonal centrifugation速率区离心法Reverse osmosis反向渗透Revolution per minute ,rpm每分钟转速Ribonucleic acid, RNA核糖核酸Rotor转头Salting inS盐溶Salt
10、ing out盐析Saphadex葡聚糖凝胶SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶SDS-4Sedimentation coefficient沉降系数Sedimentation velocity沉降速率Sedimentation time,ST沉降时间Sepharose琼脂糖凝胶Sequencing测序Singlestrandconformative单链构象多态性polymorphism, SSCPSodium dodecyl sulfate, SDS十二烷基硫酸钠Spectrophotometer分光光度计Spectrophotometery分光光度法Stationary phase固定相Swing-out rotor水平式转头TThin-layer chromatography, TLC薄层层析Transmittance透光率Thymine, T胸腺嘧啶Transformation转化Transfection转染Transduction转导Transposition转位UUltrafiltration超滤Uracil, U尿嘧啶VVisibleand ultravioletSpectro紫外可见分光光度法-photometeryVector载体5
