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PCR实验室发生污染后处理方法.doc
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1、PCR 实验室发生污染后处理方法1、确定污染类型1、PCR 实验室发生污染后主要表现为:1 )所有同批次标本及阴阳对照全部为阳性;2)阴阳对照正常,所有标本检测均为阳性;3)除了 CT 值靠前的标本其余标本及阴性对照 CT 值接近临界值,都有微弱翘尾。出现以上三种情况,均可判为发生污染。PCR 污染类型分为样本污染和产物污染。所谓样本污染一般发生在操作 2 区,由使用被污染的耗材和样本交叉污染产生;产物污染有 PCR 扩增产物引起,一般发生在扩增分析区,即 3 区,由于 PCR 反应体系没有完全闭合或者扩增后的体系没有及时安全清理引起。2、确认污染类型才能有效清除污染。发生污染后,更换所有一次
2、性耗材即移液枪及使用新拆分试剂。有两种简易方法如下:1)不加内标重复实验,检测结果如果内标没有扩增,可判为样本污染,反之为产物污染。2)分 A 和 B 两组,A 组在上机前,八联管开盖在 2 区放置 10min 左右,B 组闭合八联管直接上机。检测结果中若 A 组发生污染 B 组正常,则为气溶胶污染。气溶胶污染有两个来源,其一为扩增产物引起,其二为浓度较高的标本在制备过程中外释累积形成。2、污染处理措施一般而言,发生产物形成的气溶胶污染是很难在短时间内及时清理掉的,这是由 PCR 反应的特点决定的,及其微小的污染物都可以作为模板扩增,释放出巨大荧光信号。因此,很多试剂厂商都有相应的防污染试剂产
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