1、安徽农业科学Journal of Anhui Ag=Sci2009，37 I 2)：654656 责任编辑罗芸责任校对李洪迷迭香挥发油成分及抑菌活性研究刘昭明1，田玉红1,2黄翠姬1，林艾1(1广西工学院生物与化学工程系。广西柳州545006；2广西中烟T业公司技术中心，广西柳州545006)摘要目的研究迷迭香挥发油的成分及其抑茵活性。方法用水蒸气蒸馏法提取迷迭香挥发油，采用GCMs联用技术分析了挥发油的化学成分用滤纸片法测其抑菌活性，用平板稀释法测其最小抑茵浓度。结果迷迭香挥发油提取率为227，从迷迭香挥发油中分离鉴定出20种化合物，占挥发油总量的995，其主要化学成分为d一蒎烯和l，8一按
2、叶油素，分别占4336和3210；挥发油对多种菌株均有抑茵效果对金黄色葡萄球菌、大肠杆茵、枯草杆菌、黑曲霉、黄曲霉和桔青霉的最小抑菌浓度分别为：5、80、80、10、20和10 mlL。l结论I迷迭香挥发油具有广谱的抗菌性。关键词迷迭香；挥发油；气相色谱；质谱；抑茵活性中图分类号s5671+9 文献标识码A 文章编号051766ll(2009)0200654一03Studies on the Chemical Components and Antimicrobial Acti“ties of Volatile 0il from Rosmarinus officinalis LLIU Zhao-
3、ming et al(Department of Biological and Chemical Engineering，Guangxi University oflechnology，Liuzhou，Guangxi 545006)Abstract 0bjectiveStudy on the chemical components and antimierobial activities of volatile oil from Rosmarinus offwinalis LI MethodThe volatile oil was extracted from Rosmarinus offic
4、iualis Lby water steam distillation and its ehemica】constituents were analyzed by GCMSIts antimicrobial activities were investigated by plate diffuse and the minimum inhibitory concentration(MIC)was investigated by plate spreadResult111e extract ratio of volatile oil from Rosmarinus offwinalis Lwas
5、227and 20 compounds were identified from volatile oil，ac-counting for 995of its totaI content，the major chemical compositions of volatile oil are Otpinene(4336)and l，8-eineole(3210)The volatile oil had inhibition to all bacterial species in our experimentsthe minimum inhibitory concentration to Stap
6、hyloeocus aureusEscherichia coil，Bacillus subtilis，AspergiUus niger，Aspergillusflavus and Penicillium citrinum were：5，80，80，10，20 and 10 mlL，respectivelyf Conclusion volatile oiI from Rosmarinus officinalis Lhas broadspectrum antimicrobial activitiesKey words Rosmarinus qficirtalis L：Volatile oil；GC
7、MS：Antimicrobial activities迷迭香(Rosmarinus offwinalis L)系多年生唇形科常绿小灌木植物，原产地中海沿岸一带，主产地为西班牙、摩洛哥、前南斯拉夫、保加利亚和突尼斯。近年来，广西百色地区已经有大面积引种种植。迷迭香茎、叶挥发油具有很好的抗菌消炎之功效。在医药上可作为健胃药及利脂剂，能有效缓解由消化不良引起的胃胀，缓解小肠和胆道痉挛、增强肌收缩，促进胆汁分泌。迷迭香挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及霍乱弧菌有抗菌作用。迷迭香挥发油还可用于日化调香、食品加工等行业，有广泛的应用前景口“。目前有关其他植物挥发油抑菌活性研究报道比较多“。，对迷迭香挥发油
8、研究主要是对其化学成分进行分析“1，对其提取物的抑菌活性研究也有报道1。”J，但对其抑荫性能研究尚未见报道。笔者用水蒸气蒸馏法提取迷迭香茎、叶的挥发油，采用气相色谱一质谱联用技术(GCMS)对广西产迷迭香挥发油的化学成分进行鉴定分析，并对挥发油进行抑菌活性和抗菌性能研究，为促进迷迭香的研究与开发利用提供了科学依据。l材料与方法11材料111原材料。迷迭香(广西金绣香精香料有限公司)；蓝桉油(广西黄冕林场)；注射用硫酸链霉素，100104 Ug(山东鲁抗医药股份有限公司)；克霉唑(金坛市中兴医药原料化工厂)。112菌种。大肠杆菌(Escherichia coil)、枯草芽孢杆菌(Bacillus
9、 subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococus alMeus)、黑基金项目 广西青年科学基金(桂科青0542015)。作者简介刘昭明(1966一)，男，广东广州人，硕士，副教授，从事食品生物技术研究。收稿日期2008Il-03曲霉(AspergiUus n谤r)、黄曲霉(Aspergilluj flavus)、桔青霉(Penicillium citrinum)，由广西工学院生物与化学工程系微生物实验室提供。113培养基。PDA培养基(霉菌同体培养用)：去皮马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，蒸馏水定容至l 000 ml，自然pH值。营养肉汤(细菌液体培养用)：牛肉
10、膏5 g，NaCl 5 g，蛋白胨10 g，蒸馏水定容至1 000 ml，pH 72。营养琼脂(细菌固体培养用)：在配好的营养肉汤中加入2的琼脂即得。114主要仪器和设备。全自动新型生化培养箱，垂直流超净工作台，恒温培养振荡器，立式高压蒸汽灭菌锅，PE AutosystemXL GC Turbo Mass气相色谱一质谱联用仪。12方法121迷迭香挥发油的提取和成分分析。1211提取方法。迷迭香挥发油的提取采用水蒸气蒸馏法。称取100 g上述样品置于挥发油提取器中按常规水蒸气蒸馏法提取6 h，静置分层后读取挥发油的体积，得到淡黄色精油254 nll。1212成分分析。采用气相色谱一质谱联用和气相
11、色谱法对迷迭香挥发油进行定性定量分析。PE AutosystemXL GCTurbo Mass气相色谱一质谱联用仪：色谱柱Supeleo-5 30 m x30 ITlrfl025岬。色谱条件：60(1 ITlin)，以5min升至温度250(5 min)，分流流量30 mlmin，DB-5MS柱。进样El温度250。离子源温度170，传输线温度250。质谱条件：电离方式EI；电子能量70 eV；扫描范围40350arouoI22迷迭香挥发油抗菌效力测定。1221供试菌液的制备。细菌。取一环经营养琼脂斜面活化培养好的供试细菌接种到营养肉汤中，置于37250 rrain，振荡培养12 h，用无菌生
12、理盐水制成一定浓度(大万方数据37卷2期 刘照明等迷迭香挥发油成分及抑茵活性研究肠杆菌和金黄色葡萄球菌108 cfuml、枯草芽孢杆菌106cfum1)的菌悬液备用。霉菌。用无菌生理盐水将PDA斜面(已活化培养好)上的供试霉菌的孢子洗脱下来，充分振荡使得孢子完全分散后用血球计数板进行计数，并用无菌生理盐水将孢子悬液的浓度调整为106个lIll，备用。1222抗菌活性的测定。采用滤纸片法一1：取吸水力较强且质地均匀的滤纸，用打孔器打成直径6 mm的圆形滤纸片，置洁净干燥的培养皿中，干热灭菌后备用。吸取01 ml已稀释到一定浓度的各种菌液，将其均匀地涂布于平板表面，正置在培养箱1 h(细菌37，霉
13、菌28)。1 h后在每个平皿呈正三角放入3张已灭菌的滤纸片，再吸取各种待测药品10斗l垂直滴加到滤纸片上。细菌在37恒温正置培养1 h后倒置培养24 h，霉菌在28恒温正置培养1 h后倒置培养48 h，观察抑菌情况，并测量抑菌圈直径。以常用植物精油蓝桉油作对照，以注射用硫酸链霉素溶液(01104 UIIll)为细菌抑菌试验的阳性对照；以克霉唑溶液(27mgm1)为霉菌抑菌试验的阳性对照。1223最小抑菌浓度(MIC)的测定。采用平板连续稀释法”1：用经灭菌处理的1Tween80蒸馏水溶液，将迷迭香挥发油配成不同浓度的药液。吸取l rnl不同浓度药液，分别加入无菌培养皿中，再加入经灭菌处理并冷至
14、50左右的9rnl培养基中，立即混匀，得到含挥发油浓度分别为160、80、40、20、10、5、25、125、0625、0312和0156 mlL的培养基。待培养基凝固后，吸取制备好的菌悬液或孢子悬液01 ml，将其均匀地涂布于上述平板表面，置一定温度(细菌37、霉菌28)下，培养一定时间(细菌培养24 h，霉菌培养48h)后，观察供试菌的生长情况。以完全没有菌生长的挥发油浓度作为挥发油的最小抑菌浓度(MIC)，以蓝桉油作为阳性对照，ITween一80蒸馏水溶液为空白对照，重复3次。2结果与分析，21挥发油提取率及理化常数水蒸气蒸馏法提取迷迭香挥发油，约6 h可基本提取完全，得油率227左右，
15、密度为0892 0ml。挥发油为淡黄色液体，气味芳香、浓郁，香味独特。22迷迭香挥发油的成分经GCMS分析，得到样品的总离子流色谱图和各峰质谱图(图1)。采用计算机对各峰的100*1 80邑警 so嵌吾莲_：蚕 一。巾宝|畦兰20n 一萄 龠 积归一法计算各组分的相对含量(表1)。由表1可见，迷迭香挥发油中共鉴定出20种化合物，占挥发油总量的995。含量较高的有仪蒎烯(4336)和1，8-桉叶油素(3210)，其次是樟脑(345)、莰烯(953)和柠檬烯(235)等，占挥发油含量的90以上，为迷迭香挥发油的主要成分，其混合香气组成了迷迭香挥发油的特征香气。这些化合物具有消炎镇痛、解热、抗菌的功
16、效，是某些中药的主要有效成分15-16 3。表I 迷迭香挥发油的主要化学成分和含量Table 1 The main chemical compounds of volatile oil and theircontents in Rosmarinus officinails L化合物 保留时间min相对含量Retention RelativeCompoundtime content23迷迭香挥发油的抑菌效果 由表2可见，迷迭香挥发油对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、黄曲霉、桔青霉都具有一定的抑制作用，但抑菌作用的大小不同，其顺序为：黑曲霉桔青霉黄曲霉金黄色葡萄球菌大肠杆菌枯草杆菌。这
17、可能是因为迷迭香挥发油中d一蒎烯含量较高的原因，已有报道。17 o认为d一蒎烯能通过抑制真菌的DNA、RNA、多糖及麦角固醇的生物合成来抑制真菌的生长。迷迭香挥发油对供试细菌的抑菌效果比蓝桉油好，比浓度为01104 Uml的注射用硫酸链霉素稍差，对黑曲霉的抑菌效果比浓度为27 mr,ml的克霉唑溶液好。24迷迭香挥发油对各种供试菌的最小抑菌浓度(MIC)由表3可见，迷迭香挥发油对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、黄曲霉和桔青霉的最小抑菌浓度各不相同，其中对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度最小，为5 mlL，对黑曲霉、黄曲霉和桔青霉的最小抑菌浓度为1020 mlL，而对大肠杆菌、枯草杆菌的
18、最小抑菌浓度都是80 mlL，高于其他4种菌的抑制浓度，其结果与抑菌圈的测定结果相吻合。由此可见，除了枯草杆菌，迷迭香挥发油对其他各种供试菌的抑菌效果都比蓝桉油好一些。万方数据656 安徽农业科学 2009雄迷迭蒋Rofficinalis蓝桉油Eucalyptus globulus oil注砉孛舞l藏酸链霉索Streptomycin sulfate for injection克霉蛾Clotrimazole阴性对照Negative control12511O2G。O一083O17，O一0265215一175024024037OO12513O一29O0窒自鬟雩慧Blank control 0 0
19、0 0 0 0注：一表示没有做相应的试验，无数据。Note：一stands for nO related test or data+表3遴迭香挥发演对各季爨试鬻戆最夺静篱滚裹MIC)Table 3 TheC of the volatile oil to tested strains in Rosmarinus officinalis L供试菌 挥发油稀释液浓度Concentration of volatile oil diluent,彤L MtCTesting strain l国 8。 2。 国 5 2。5 1签 馥625 疆312 0156 mlL迷迭耀争挥发油置蒯i 一 一 + 十+ +
20、+十 + + + +十80Volatlie oil of S OMtebl8 一 一 一 一 一 一 + +十 +十 +十+ 5是捌舞d蔽 覆subtis 一 一 + 争+ + + + + 8。Pcitrinum 一 一 一 一 一 + + + + + 10A，加 一 一 一 一 一 + + + + +十+ +十+ 10A是删 一 一 一 一 + + + + +十十 + + 2。蓝萤陵浦 嚣co + + + + + + +十 + + + +十+ 一Eucalyptus sa世3 一 一 一 + + + + + + + 40globulus 嚣-s托娥 一 一 一 十 + + + +斗+ 40o
21、il 产citrinum 一 一 一 一 一 + + + + +十+ 10Aager 一 一 一 一 + + +十 + + + + 20A舟蝴 一 一 一 一 + + + + + + + 3绻论 一成药，2007，29(5)；754，756 (1)迷迭香撵发油掇敬率努27岔璐；经Gc。Ms分辑，共 93蔷煮蒸荔黧鞫婺鬟喜菱茹慧雾赞竺尝分及掷菌活性研究高的有a-蒎烯(4336)和l8桉叶油素(3210)，其次是 1d窘攀翥蠡誓黧辫警；鋈装纛基物抑菌作用研究J中国食(2)迷迭臀挥发油对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性黼都有 121羹望纛曩：!嚣簧嚣雾羞笔，提取物的抑菌作用研究3-广帅|食翼有广谱的抗菌性；
22、挥发油对大肠杆菌程桔萃杆菌酶最小撵 ，4葛菜雾龚冀錾篓蓥夏奚；：；：!淼乏北京：化学工业出版社，黄熬霉为嬲彬L，对黑隧霉为，o彬L。 f搿鬟：蠢燃等：麓台曩慕i型篙譬盎药晶，1 3许鹏翔，贾卫民，毕良武，等不同产地的迷迭香摔发油成分分析及品 17 3要害蓥，毛学政，罗映辉a。蒎烯抗真菌机制的研究J湖南医科大鼹研究J分搴厅科学学缀，2003，19(4)：361362 学学报，1999，24(6)：2一509瞄3秦慧20窝04良38冀63艺4 3黻6 香挥发漓化学成分鼢褫列袜产仡工面聂宽，郁建平，涟宾等贵州1引种I的迷逸眷(鼢。批o0一qc溅、i苗讯 ()： 一-v L Io J刈穴魁1|p避干，
23、琏兵，寺员州j个fJ日。坯端曾L彻s盯配玳摊淞 l，嚣、3蒜杀襁，潘杀u幽4滇产迷迭眷精油的撵发性化学成分研究J云南中 L)中挥发油化学成分分析J-贵州I大学学报：农业与生物科学版，4】廖浚杰，扬涤陡，廖鹅程。等。粤产迷迭番酶挥发演旋取及其烹甏成分 19QI L Y，LIU L L，YU P R，珙a1Preliminary studies，On、antifungal 8c”吲黟螽蕊篓激躲等慧憋油的提取及其抑菌活性研究 ，鬻麓茹羰蓬嚣是质9(谱分4)：14邪4-1，48J28(3 588 594 LZOJ 鼢胖艘捌1)78【3。吲踺爨癌鹭爱，2008， )： 一 。凰伏还述曾婵删嫩托万列蕊潜“
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