1、凝胶的种类及凝胶配方方法 （一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）Sephadex G 交联葡聚糖的商品名为 Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母 G 表示，G 后面的阿拉伯数为凝胶得水值的 10 倍。例如，G-25 为每克凝胶膨胀时吸水 2.5 克，同样G-200 克每克千胶吸水 20 克。交联葡聚糖凝胶的种类有 G-10，G-15 ，G-25 ，G-50 ，G-75，G-100 ， G-150，和 G-200。因此， “G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。Sephadex LH-20，是Sephadex G-25 的羧丙基衍生物， 能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水
2、的物质。（二）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose （瑞典，pharmacia ） ，Bio-Gel-A （美国 Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9 范围内的盐溶液） 。琼脂糖凝胶在 40以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。（三）聚丙烯酰胺消毒凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位， 由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为
3、生物胶P （Bio-Gel P） ，由美国 Bio-Rod 厂生产，型号很多，从 P-2 至 P-300 共 10 种，P 后面的数字再乘 1000 就相当于该凝胶的排阻限度。该凝胶多用于配制医疗消毒用的消毒凝胶。（四）聚苯乙烯凝胶商品为 Styrogel ， 具有大网孔结构， 可用于分离分子量 1600 到40，000，000 的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。三、实验技术（一）层析柱 层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于
4、2 厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外， 直径加大，洗脱液体体积增大，样品稀释度大。分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度，分离度与柱高的平方根相关，但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞，一般不超过 1 米。分族分离时用短柱，一般凝胶柱长 20-30 厘米，柱高与直径的比较 5:110:1，凝胶床体积为样品溶液体积的 4-10 倍。 分级分离时柱高与直径之线为 20:1100:1，常用凝胶柱有 5025 厘米，1025 厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小，如果支掌滤板下的死体积大，被分离组分之间重新混合的可能性就大，其结果是影响洗脱峰形，出现拖尾出象，降低分
5、辩力。在精确分离时，死体积不能超过总床体积的 1/1000。（二）凝胶的选择 根据所需凝胶体积，估计所需干胶的量。 一般葡聚糖凝胶吸水后的凝胶体积约为其吸水量的 2 倍，例如 Sephadex G-20 的吸水量为 20，1 克 Sephadex G200吸水后形成的凝胶体积约 40ml。凝胶的粒度也可影响层析分离效果。粒度细胞分离效果好，但阻力大，流速慢。一般实验室分离蛋白质采用 100-200 号筛目的的 Sephadex G-200 效果好， 脱盐用 Sephadex G-25、 G-50，用粗粒，短柱，流速快。（三）样品溶液的处理 样品溶液如有沉淀应过滤或离心除去，如含脂类可高速离心或
6、通过Sephadex G-15 短柱除去。样品的粘度不可大，含蛋白为超过 4，粘度高影响分离效果。上柱样品液的体积根据凝胶床体积的分离要求确定。分离蛋白质样品的体积为凝胶床的 1-4（一般约 0.5-2ml） ，进行分族分离时样品液可为凝胶床的 10，在蛋白质溶液除盐时，样品可达凝胶床的 20-30。 分级分离样品体积要小，使样品层尽可能窄，洗脱出的峰形较好。（四）防止微生物的污染 交联葡聚糖和琼脂糖都是多糖类物质，防止微生物的生长，在凝胶层析中十分重要，常用的抑菌剂有:叠氨钠（NaN3 ）在凝胶层析中只要用 0.02叠氮钠已足够防止微生物的生长，叠氮钠易溶一水，在 20时约为 40；它不与蛋
7、白质或碳水化合物相互作用，因此叠氮钠不影响抗体活力；不会改变蛋白质和碳水化合物的层析我特性。叠氮钠可干扰荧光标记蛋白质。可乐酮Cl3C-C(OH)(CH3)2在凝胶层析中使用浓度为 0.01-0.02。在微酸性溶液中它的杀菌效果最佳，在强碱性溶液中或温度高于 60时易引起分解而失效。乙基汞代巯基水杨酸钠 在凝胶层析中作为抑菌剂使用浓度为 0.05-0. 01。在微酸性溶液中最为有效。重金属离子可使乙基代巯基的物质结合，因而包含疏基的蛋白质可在不同程度上降低它的抑菌效果。苯基汞代盐 在凝胶层析中使用浓度为 0.001-0.01。在微碱性溶液中抑效果最佳，长时间放置时可与卤素、硝酸根离子作用而产生
8、沉淀；还原剂可引起此化合物分解；含疏基的物质亦可降低或抑制它的抑菌作用。四、凝胶配方及配制方法凝胶的制备 商品树脂是干燥的颗粒使用前需直接在欲使用的洗脱液中膨胀。将一定比例的水加入烧杯中，加入称量好的树脂，轻微搅拌使其分散均匀，然后加盖，密封放置12h，使树脂吸水膨胀形成均一透明的树脂溶液。如果想加快浸泡速度，可以用加热搅拌的方法，在持续搅拌的状态下将水加热到 60 度左右，用加热法在几小时内完成。这种方法不但节约时间，而且还可消毒，除去凝胶中污染的细菌和排除胶内的空气。如果是配制医用皮肤消毒凝胶，需要在水中加入能够消毒的成份，可以根据自己的需要添加不同的消毒剂。但是一般皮肤消毒用往往会加入一定比例的酒精，加快凝胶的干燥速度。配制好的成品凝胶应该无色透明，均一稳定，不拉丝不粘手，成膜快干燥快，有持久稳定的消毒效果，能快速杀灭金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、化脓性球菌等常见的致病菌。这种凝胶无论在医用领域还是民用领域都具有很大的市场，除了携带方便，使用方便，还有一个很大的优点是消毒凝胶能在皮肤上形成保护膜，被很多医生护士形象的称为“隐形手套” ，对保护医护人员的人身安全有很大的作用。如果您想要生产这种凝胶，可以联系/我，Q/Q：1（05） （64） （11）8 我会给您提供各种详细的配方和生产工艺，保证按照您的要求生产出合格的产品。
