1、 产品说明书 / Specification Sheet 地址: 上海市松江区香闵路 698号 Add: 698 Xiang Min Road SongJiang Shanghai China 电话/Tel: 86-21-37772436 传真/Fax: 86-21-37772170 技术支持/Support: 800-820-1016 邮箱/Email: 过氧化氢定量分析试剂盒（脂兼容性） 产品编号：BSP067 产品简介： 在酸性环境中，过氧化氢可将Fe 2+ 离子氧化成Fe 3+ 离子，Fe 3+ 离子再与染料分子结合形成Fe 3+ -染料复合物，该复 合物在 560nm（或 595n
2、m）处有最大吸收波长，且吸收值与过氧化氢的浓度成正比。本试剂盒针对溶解于脂相中的 样品而设计，通过添加特殊的增敏剂，增强了过氧化氢的检测信号，使得过氧化氢的检测灵敏度得到很大提高，可 应用于监测低密度脂蛋白和脂蛋白中脂类的氧化情况和细胞活性，血清或血浆中的过氧化氢含量和在有脂类物质存 在的情况下，不要对生物样品抽提，直接定量分析过氧化氢含量。本试剂盒定量过氧化氢的浓度范围为 1-250M， 本试剂盒用离心管法可以使用 50次或酶标法 250次。 产品特点： 1 有离心管法和酶标法两种定量方法，定量范围为 1-250M。 2 不需要过氧化氢酶，快速，即用型。 3 不需要进行脂肪提取。光谱分析，不
3、需要加热。 4 用于监测低密度脂蛋白和脂蛋白中脂类的氧化情况和细胞活性，血清或血浆中的过氧化氢含量和在有脂类物 质存在时，直接分析过氧化氢含量。 运输和保存条件： 常温下运输，收到后，将溶液 A 和 B 在2-8的环境中避光保存，保质期一年 产品组成： 本试剂盒由溶液 A和溶液 B 构成，离心管法可以使用 50 次或酶标法 250次。 1、 BSP067-1 溶液A 0.6m l 2、 BSP067-2 溶液B 60 m l 使用方法： 一、试剂准备 1.1 按照以下公式计算所需的工作液总体积。 工作液总体积=（标准曲线测定点数+样品数）重复次数每个样品所需的工作液体积 1.2 根据所需的工作
4、液总体积，取1份溶液 A 和 100份溶液 B，混匀，制成工作液。 1.3 取一试管，加入 1l 30%过氧化氢溶液和 8.8ml纯净水，混匀，配成 1mM过氧化氢溶液。 1.4 取若干支 1.5ml 离心管，按照下表平行操作，制备一系列的标准过氧化氢溶液。 网址/Web: 管号 所加溶液 0 1 2 3 4 5 6 7 纯净水（l） 1000 999 990 950 900 850 800 750 1mM过氧化氢溶液（l） 0 1 10 50 100 150 200 250 过氧化氢终浓度（M） 0 1 10 50 100 150 200 250 二、离心管法 2.1 制作标准曲线 2.1
5、.1 取若干支 1.5ml 离心管，各管分别加入 100l相应浓度的标准过氧化氢溶液。 2.1.2 各管加入 1ml 工作液，迅速混匀。 产品说明书 / Specification Sheet 地址: 上海市松江区香闵路 698号 Add: 698 Xiang Min Road SongJiang Shanghai China 电话/Tel: 86-21-37772436 传真/Fax: 86-21-37772170 技术支持/Support: 800-820-1016 邮箱/Email: 网址/Web: 2.1.3 室温静置20min。 2.1.4 在分光光度计上测各管的A 560 值。
6、 2.1.5 重复步骤2.1.1-2.1.4。 2.1.6 计算两组编号相同的两个离心管中A 560 的平均值。 2.1.7 以各管A 560 平均值为纵坐标，对应的过氧化氢浓度为横坐标，在坐标纸上或Microsoft Excel软件中绘制标准 曲线。 2.2 未知样品过氧化氢浓度测定 2.2.1 将样品做适当的稀释。 2.2.2 取 3支 1.5ml离心管，其中一管加入 100l 蒸馏水作为空白对照，另两管加入 100l 样品稀释液。 2.2.3 各管分别加入 1ml工作液，迅速混匀，室温静置20min。 2.2.4 在分光光度计上测各管的A 560 值。 2.2.5 计算两个相同浓度样品稀
7、释液A 560 值的平均值。 2.2.6 根据两个相同浓度样品稀释液A 560 值的平均值，在标准曲线上确定出该样品稀释液的过氧化氢浓度。 2.2.7 根据下式计算样品的过氧化氢浓度 样品过氧化氢浓度（M）=该样品稀释液的过氧化氢浓度样品稀释倍数 三、酶标板法 3.1 制作标准曲线 3.1.1 在一酶标板上取若干孔，各孔分别加入 20l相应浓度的标准过氧化氢溶液。 3.1.2 各孔加入 200l工作液，盖上盖子，将酶标板置于摇床上，震荡混匀 30 秒。 3.1.3 将酶标板于室温静置 20min。 3.1.4 在酶标仪上测各孔的A 595 值。 3.1.5 重复步骤 3.1.1-3.1.4。
8、3.1.6 计算相同编号的两孔A 595 值的平均值。 3.1.7 以各孔A 595 平均值为纵坐标，对应的过氧化氢浓度为横坐标，在坐标纸上或Microsoft Excel软件中绘制标准 曲线。 3.2未知样品过氧化氢浓度测定 3.2.1 将样品做适当的稀释。 3.2.2 在一酶标板上取若干孔，其中一孔加入 20l纯净水作为空白对照，其余各孔分别加入 20l样品稀释液。 3.2.3 各孔加入 200l工作液，盖上盖子，将酶标板置于摇床上，震荡混匀 30 秒。 3.2.4 将酶标板置于室温静置 20min。 3.2.5 在酶标仪上测各孔的A 595 值。 3.2.6 计算两个相同浓度样品稀释液的
9、A 595 值的平均值。 3.2.7 根据两个相同浓度样品稀释液A 595 值的平均值，在标准曲线上确定出该样品稀释液的过氧化氢浓度。 3.2.8 根据下式计算样品的过氧化氢浓度 样品过氧化氢浓度（M）=该样品稀释液的过氧化氢浓度样品稀释倍数 四：血清或血浆中的过氧化氢含量测量方法 由于血清或血浆中含有较低的过氧化氢，并且含有内源性的铁离子，产生的背景较高，所以采用过氧化氢的还原 试剂 TCEP（Tris2-carboxyethylphosphine hydrochloride）测量背景吸收值，再根据标准曲线，从总的待测样品 的吸收值减去内源性的铁离子背景吸收值，从而得出血清或血浆中过氧化氢的
10、真实含量。 41对于每个血清或血浆样品，取 4支 1.5ml离心管，各管分别加入 90l的血清或血浆样品。 42 其中两管加入 10ul的甲醇，另外两管加入 10ul的含有终浓度 10m M TCEP的甲醇。 产品说明书 / Specification Sheet 地址: 上海市松江区香闵路 698号 Add: 698 Xiang Min Road SongJiang Shanghai China 电话/Tel: 86-21-37772436 传真/Fax: 86-21-37772170 技术支持/Support: 800-820-1016 邮箱/Email: 网址/Web: 43 涡旋震
11、荡几秒，再在室温静置20-30min。 44各管加入 0.9ml工作液，迅速混匀。 45 涡旋震荡几秒，再在室温静置20-30min。 46 12000g离心5-10分钟，转移一定量的上清（离心管法 900ul 或酶标板法 300ul） ，测量吸收值。 47 计算加入 10ul的甲醇的两管和加入 10ul的含有终浓度 10m M TCEP的甲醇的两管的吸收值的平均值。 4 8 根据标准曲线和吸收值的平均值，查出含有 10ul 的甲醇管的过氧化氢含量和含有 10ul 的含有终浓度10m M TCEP的甲醇管的过氧化氢含量。 49 将含有 10ul的甲醇管的过氧化氢含量减去含有 10ul 的 10
12、m M TCEP的甲醇管的过氧化氢含量，从而得出血清 或血浆中过氧化氢的真实含量。 注意事项： 1、 溶液 B具有一定的挥发性和毒性，且易燃。使用时，请戴上一次性手套并注意远离火源。 2、 工作液须现配现用，不能够长期保存，过夜后须废弃。并且吸光值检测最好当天完成。 3、 若样品未经过去盐纯化，或其中含有过渡金属、金属螯合剂，金属蛋白和其它在检测波长处有强吸光值 的物质，须使用溶液 B和样品的混合液（即 10份溶液 B 和 1份样品，不含溶液 A）作为检测样品时的空 白对照。 4、 样品稀释的倍数应使其过氧化氢含量在标准曲线范围之内，若超过此范围则需将样品酌情稀释。 5、 若样品中的过氧化氢含量250M 且不适合稀释，可适当提高工作液与待测样品的比例，如工作液：样 品=100：1或 50：1，同时提高标准品在制作标准曲线时的过氧化氢浓度。 6、 过量的过氧化氢（1mM）对染料分子具有漂白作用，导致吸光值急剧下降。 7、 若需要精确的定量过氧化氢浓度，建议在初步测定样品中过氧化氢浓度后，建议缩小标准曲线的浓度范 围和梯度，以提高标准曲线的精度。 8、 使用后，请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。 9、 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担 责任。
