1、上海市奶牛研究技术文件 -奶牛冬痢技术要点 -2012-1201 内部资料，主要保管 1 奶牛冬痢 预防控制技术 要点 奶牛冬痢是成年奶牛的一种重要传染病。近二十年来在国内 奶牛养殖业屡见不鲜 ，并逐渐得到重视。在我国，冬痢在各地都有发生 ，包括南方的广东等地 ，但以北方多见。 本技术要点是 上海市奶牛研究所兽医疾病控制中心 依据近 5 年研究成果，并综合了国内外最新科研成果而提出的，希望 为控制我国南方地区奶牛冬痢提供理论依据和技术支持。 一、病原研究进展 1、 流行 情况 早 在 1931 年美国就有奶牛冬痢相关报道，当时还没有明确提出冬痢 (WD, Winter Dysentery)的概
2、念，报道的是奶牛冬天大规模的由肠道紊乱引起的肠炎和腹泻。在以后的几十年间，日本、澳大利亚、瑞典、加拿大、美国、韩国、英国及新西兰等国陆续有相关的研究报道。 2、 临床症状 奶牛冬痢主要症状是牛群出现暴发性的水样腹泻，并迅速播及全群。粪便中常含有粘液和血液，同时伴有奶产量急剧下降（ 25-95%）。有时 奶牛会出现脱水、精神沉郁、食欲下降和轻微的呼吸 系统 症状 （ 如咳嗽 ） ， 多数情况下牛只直肠温度和瘤胃功能正常。 冬痢发病率很高，在 1 个泌乳牛群中几天之内可能同时出 现 2050%的 牛发病， 1-2 周左右几乎 100%的泌乳奶牛都会发病，但死亡率上海市奶牛研究技术文件 -奶牛冬痢技
3、术要点 -2012-1201 内部资料，主要保管 2 很低。个体牛只 通常情况下 1-3 天左右会粪便会 逐渐 恢复正常，但奶产量的恢复需要几周时间 ， 同样的牛群可能会具有 1 5 年的免疫力。有报道称约有 31%的冬痢 牛群 暴发 犊牛 腹泻。 3、 病原 研究 最早的报道怀疑 奶牛 冬痢是 由 弯曲杆菌引起的。随即有人认为根据其发病规律，病原更应该是传染性极强的病毒。 近年来大量报道 普遍 认为其 主要 是由牛冠状病毒 （ BCV） 感染引起的 ，因为绝大多数冬痢粪便样品中都可以通过电镜观察到冠状病毒粒子 ，极少分离到弯曲杆菌 。 而且 通常在 正常 奶 牛肠道中可以发现很多弯曲杆菌，
4、其致病性值得怀疑 。 还有 研究 发现，使用电镜在粪便样品中 观察到的一些冠状病毒样粒子，但使用 BCV 免疫电镜检查为阴性，认为可能 是冠状病毒科凸隆 病毒属的 病毒 ， 该病 毒 可能也 引起奶牛腹泻 。 当 牧场 BCV 和 BVDV抗体检测均为阳性 时 ， 暴发的 冬痢更为严重 ，表明严重的冬痢可能是多种病原混合作用的结果 。 通过 双份血清中和抗体试验检测证明 冬痢发病牛只 BCV 中和抗体水平比 同群正常牛只升高了 4 倍。 这种 针对BCV 的血清学变化也为 BCV 为冬痢病原提供了有力的佐证。 上海市奶牛研究所 对 上海地区发生 冬痢 9 个牧场采取血清样品，使用 ELISA
5、方法对其中的 BCV 抗体进行检测发现所有牧场 BCV 抗体均为阳 性，同各个牧场都有冬痢发生一致。 结合多项研究认为， 我国南方地区奶牛冬痢的元凶为冠状病毒（ BCV）和轮状病毒（ BRV）混合感染，感染途径为病牛或带毒牛粪便污染的水和食物 。 上海市奶牛研究技术文件 -奶牛冬痢技术要点 -2012-1201 内部资料，主要保管 3 4、 发病机理 病毒可经口或呼吸道感染。 冠状病毒在成母牛上引起的病 理 变化与犊牛冠状病毒感染非常相似 。 病毒首先感染小肠近侧端 ， 然后向下扩散至整个小肠和大肠。在肠道表 面 上皮细胞和小肠远端肠绒毛上皮细胞中复制。感染细胞发生死亡、脱落 ， 被未成熟细胞
6、代替 。 小肠的这些变化导致肠绒毛生长受阻 , 相邻的肠绒毛 融合 ， 在大肠致使结肠嵴萎 缩。小肠绒毛和结肠 嵴 上柱状 上皮细胞被立方上皮和鳞状上皮细胞代替 ， 感染严重的细胞可完全脱落 ， 杯状细胞数量减少。 肠 细胞上的微绒毛的 长度和大小差别显著 。肠表面积的减少和未成熟细胞的存在使肠道吸收能力大大降低 ， 未成熟的细胞不能分泌正常消化酶 ， 致使肠道消化能力降低。未被消化的乳糖积聚 ， 导致微生物活动增加 ，渗透作用失衡 ， 致使更多的水分进入肠腔。消化吸收能力降低而致腹泻 , 水分 和电解质丢失 。 这就 是 为什么冬痢会以 大量水 样腹 泄 为临床 特征 的原因 。 5、 诊断
7、 方法 冬痢通过临床症状和流行病学即可作出诊断，病原的确定需要进行实验室检测。 5.1 电镜检测 将粪便样品处理后使用电镜直接观察 DEM是早期检测粪便中的冠状病毒粒子的有效方法，得到了广泛的运用 。 免疫电镜（ PAG-IEM）可 提高 BCV 检测的 特异性 ，因为 免疫电镜比电镜 直接检测 更加敏感 。 上海市奶牛研究技术文件 -奶牛冬痢技术要点 -2012-1201 内部资料，主要保管 4 5.2 间接 凝集 试验 可使用间接凝集试验检测 牛冠状病毒 ，如 BCV 可以凝集大鼠的红细胞， 此外还可以使用乳胶凝集试验来检测粪便中的病毒粒子。 5.3 中和抗体 采用双份血清检测中和抗体水平
8、可以有效的判断牛只 BCV 感染情况 ， 冬痢牛只 发 病时 BCV 抗体 水平 呈 明显 上升趋势。 5.4 ELISA 近年来 ELISA 因其特异性较高且可以高通量 检测 而被作为很多传染病的检测方法得到广泛运用 。 可以 使用犊牛腹泻 BCV 作为抗原建立 ELISA 方法检测冬痢牛只 BCV 血清抗体， 这也证明 犊牛腹泻BCV 和成母牛冬痢 BCV 有相关性。 5.5 病原分离 使用 MDBK、 Vero 和 HCT-8 细胞等可以用于病毒的分离培养。牛 冠状病毒的分离 通常 需要在培养液中加入适量胰酶。 上海市奶牛研究所曾采取冬痢牛只粪便进行病毒分离，在 HCT-8 细胞上 出现
9、 CPE。 5.6 PCR PCR 作为快速诊断方法因期特异性和敏感性高也被用于 BCV 的检测 ， 使用 RT-PCR 和巢式 PCR 是检测冬痢粪便样品中 BCV 的有效方法。 上海市奶牛研究技术文件 -奶牛冬痢技术要点 -2012-1201 内部资料，主要保管 5 二、预防控制体系 作为一 种病程短，危害 大，通常情况下症状轻微能自愈的一过性高度传染 性疾病，预防应重于治疗。 1 生物安全 对于从未发生过冬痢的奶牛场来说需要注意的是生物安全。人员、牛只和车辆的流动 是关键， 带毒的牛只 、 来到访人员的鞋底和车辆的轮胎是消毒的重点。 因此，在 冬痢 易发的季节更要加强消毒。 要求 自每年
10、 12 月份开始至次年 4 月份： 应禁止牛只的相互调动；应禁止外来人员进入牧场 ； 场内工作人员也应 减少 与其它牧场 工作 人员 接触和交流，更不应串场；外 来车辆禁止入内，奶罐车进入需严格消毒，尤其是轮胎应反复消毒、淘汰牛只车辆禁止进入场内装牛；如果周围有牧场发生 冬痢 ，本场需立即封闭，并进行全场消毒，并及时喂以缓解症状的添加剂。 2 饲养管理 对于 BCV 阳性的牛群来说，冷应激、饲料不佳或配方改变，牛群免疫力下降等因素都可以诱发冬痢。 有 研究表明，人工口服 BCV的牛只在冰水刺激下可以复制出冬痢症状。栓系的牛群发病率高于自由卧床的牛群；料槽 受 清粪工具 污染也 易发 冬痢 。
11、临床 上 正常奶牛的粪便中也分离到冠状 病毒，特别是冬天会通过粪便向环境中排放大量病毒。在分娩的时候约有 70%的感染奶牛向外排毒。因此，感染 BCV 的健康牛群是否都会发生冬痢，有哪些诱因还需要进一步的研究。 上海市奶牛研究技术文件 -奶牛冬痢技术要点 -2012-1201 内部资料，主要保管 6 目前还 没有 其它 特别的预防方法， 主要 以加强饲养管理， 重点包括：（ 1） 增强奶牛机体抵抗力， 每年 12 月到第二年 2 月底，可以在饲料中添加增强机体免疫力的功能性添加剂。（ 2） 饲料配合合理 ， 稳定， 避免饲料原料和配方的大幅调整。（ 3） 禁止饲喂发霉变质饲料 。（ 4） 加强
12、保暖工作，防止冷应激 。 此外，应 加强消毒，粪便的 安全处理， 粪道的定期消毒， 病牛的及时隔离 处理等也至关重要 。 3、 治疗 冬痢牛只病程在 1-3 天 左右，暂没有 特殊有效的 治疗药物，也没有研究报道 治疗能缩短个体 和群体发病病程。对于个别严重的病例主要使用支持疗法，并使用止泻收敛药物。有使用磺胺二甲基嘧啶无效果的报道 ， 国内的治疗常报道在精料中添加氟哌酸，也有使用青霉素治疗的。 上海市奶牛研究所曾在一项 活性肽对免疫功能提高的 试验研究中 ， 发现使用 这类饲料添加剂 可以缓解冬痢奶牛的症状及降低产量损失 ，并正据此 采取活性生物因子、免疫增强剂和内毒素吸附剂等生物制剂进行
13、复方配伍，目前正进行更进一步的研究和实验中。 4、 疫苗前景 奶牛 BCV 抗体在冬痢发生 1 年后还处于很高的滴度，通过初乳被动免疫的 小牛在 5 月龄时 BCV 抗体反应呈阳性。 单纯由 BCV 引起的冬痢对该病毒具有一定的免疫力，表现为 1-5 年发病一次。当 奶牛血凝抑制试验抗体滴度低于 80 或 时 者中和试验抗体效价小于 160时 会再次感染 BCV。 有研究报道高浓度的抗原油剂混合苗免疫牛只上海市奶牛研究技术文件 -奶牛冬痢技术要点 -2012-1201 内部资料，主要保管 7 后， 血凝抑制试验抗体效价大于 160 或中和试验抗体效价大于 640 的牛只 对冬痢具有抵抗力 ，
14、但田间试验效果未得到证实。 美国，德国和西班牙研 究的 牛冠状病毒 疫苗，主要用于 小牛而不是成母牛 ，但 是效果还不确定。 三、 冬痢 出现 时的应急预案 1、 立即准备牛舍，隔离发病牛只； 2、 立即进行全场 大消毒，牛舍卧床、粪沟、粪道立即使用烧碱进行消毒， 在冬痢流行期间每天用烧碱对粪沟和粪道进行消毒； 3、立即上报相关领导和职能部门，并通知邻近其它兄弟牧场，做好防疫工作； 4、立即全群（泌乳牛群）添加缓解症状的 功能性 饲料添加剂，并 根据采食状况 及时调整好饲料投喂量， 减少经济损失； 5、清理隔离牛舍粪便的粪车不得与正常牛舍粪车交叉使用，流行结束后，粪车应彻底消毒； 6、流行期间，人员不应相互串牛舍； 7、流行期间，及时采样、留样和送检。 8、部分症状严重牛只，应及时给予支持治疗。 上海市奶牛研究所 二零一二年 十二月五日
