TaKaRa一步法RT-PCR提取法.pdf

1、 研究用 Code No. RR064A 说明书 One Step PrimeScript RT-PCR Kit （Perfect Real Time ） v201305Da 目 录 内 容 页 码 制品说明 1 试剂盒原理 1 制品内容 3 保 存 3 特 长 3 使用注意 3 操作方法 4 实验例 8 附 录 9 关联产品 9 制品说明 本制品是采用 TaqMan 探针法* 1 ， * 2 进行 Real Time One Step RT-PCR 的专用试剂。 使用本制 品进行 Real Time RT-PCR 反应可在同一反 应管内连续进行，操作简单，并能有效防止污染。本反应体系由于可以

2、对 扩增产物进行实时监测，大大提高了检测灵敏度，并省略了 PCR 反应后的电泳步骤，非常 适合于 RNA 病毒等微量 RNA 的检测。 本制品中使用了最适合于 Real Time RT-PCR 的反转录酶 PrimeScript RTase 和具有高扩增 效率和高扩增 特异性的 TaKaRa Ex TaqHS ，能进行稳定高效的 Real Time One Step RT-PCR 反应。 适用的 Real Time PCR 扩增仪 ABI PRISM * 3 7000/7700， Applied Biosystems 7300/7500 Real-Time PCR System （Life T

3、echnologies ） LightCycler （Roche Diagnostics ） Smart Cycler System 4 /Smart Cycler II System 4(Cepheid) Thermal Cycler Dice Real Time System II (Code No.TP900/TP960) Thermal Cycler Dice Real Time System Lite （Code No.TP700/TP760） *1 TaqMan 是 Roche Molecular Systems 的注册商标。The 5 nuclease process is co

4、vered by patents owned by Roche Molecular Systems, Inc. and F. Hofmann-La Roche Ltd. Purchase of the product does not provide a license to use this patented technology. *2 使用 SYBR Green I 法检 测时, 请选择 One Step SYBR PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time) 。 SYBR Green I 经 Molecular Probes Inc. 许可作为研

5、究试剂使 用。 SYBR 是 Molecular Probes Inc. 的注册商标（美国和欧洲） 。 *3 ABI PRISM 是Applera Corporation的注册商标。 *4 SmartCycler 是 Cepheid Corporation 的注册商标。 试剂盒原 理 本制品首先使用反转录酶 PrimeScript RTase 将 RNA 反转录 成 cDNA，再 以 cDNA 为模板使 用 TaKaRa Ex Taq HS 在同一反应管内连 续进行 Real Time PCR 扩增反 应，对 TaqMan 探针的荧光 信号进行监 测。 1. PCR PCR 法是以微量 DNA

6、 进行目的片段扩增的方法。通过 DNA 链的热变性、引物退火、DNA 聚合酶作 用下引物的延伸三个步骤循环往复，可在短时间内扩增 DNA 达 100 万倍以上。 本制品中的 DNA 聚合酶由于使用了改良后的 TaKaRa Ex Taq HS ，从而抑制在调制反应液等低温条 件下由引物产生的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增，大大提高 PCR 扩增灵敏度。 2. RT-PCR RNA 不能作为模板直接用于 PCR 的扩增，但是可以通过反转录酶以 RNA 为模板进行 PCR 反应合成 的 cDNA 对 RNA 进行分析， 即 RT-PCR 技术，可对 RNA 进行高质量检测。本试剂盒使用

7、One Step RT-PCR， 实验原理如下： 先使用特异性引物 （反向） 进行反转录扩增， 再以合成的 cDNA 为模板， 以 特异性引物（正向、反向）进行 PCR 反应。 （不能使用随机引物和 Oligo dT 引物进行反转 录反应。 ） -1- One Step RT-PCR 的原理 3. 荧光检测法 TaqMan 探针法 TaqMan 探针法是使用 5 端带 有荧光物质（如： FAM等 ）， 3 端带有淬灭物质（如：TAMRA 等） 的 TaqMan 探针进行荧光检测 的方法。 当探针完 整时， 5 端的荧光物质受到 3 端 淬灭物质的制约， 不能发出荧光。 而当 TaqMan 探针

8、被分解后，5 端的荧光物质便会游离出来，发出荧光。 当 PCR 反应液中加入荧光探针后， 在 PCR 反应 的 退 火过 程中 ，荧 光探 针便 会和 模 板 杂交。进一 步在 PCR 反应的延伸过程中，Taq DNA 聚合酶 的 5 3Exonuclease 活性可 以分解与模 板杂交 的 荧 光探 针， 游离 荧光 物质 发出 荧 光 。通过检测 反应体系中的荧光强度， 可以达到检测 PCR 产物 扩增量的目的。具体原理见右图。 -2- 1. 热变性 2. 引物退火/ 探针与模板的杂交 3. 延伸反应 Polymerase 探针杂 交 发光物质 探针 淬灭物 质 Primer 制品内容 （

9、50 l 反应 100 次） 1. 2 One Step RT-PCR Buffer *1 （2 ） 840 l 3 支 2. TaKaRa Ex Taq HS （5 U/ l ） 100 l 3. PrimeScript RT Enzyme Mix 100 l 4. RNase Free dH2O 1.25 ml 2 支 5. ROX Reference Dye *2 （50） 100 l 6. ROX Reference Dye II *2 （50 ） 100 l *1 内含 dNTP Mixture ，Mg 2+ 等。 *2 用以校正孔与孔之间产生 的荧光信号误差。ABI PRISM 7

10、000/7700 和 Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System 使用 ROX Reference Dye ，7500 Real-Time PCR System 使用 ROX Reference Dye II ， Thermal Cycler Dice Real Time System 和 Smart Cycler System 、LightCycler 等 Real Time PCR 扩增仪 不必使用。 试剂盒外必备材料 Real Time PCR 扩增仪 Real Time PCR 专用的离心管 或反应板 PCR 引物 检测用 TaqMan 探

11、针 微量移液器和枪头（高压灭菌） 保 存： -20 。 特 长 1 进行 Real Time One Step RT-PCR 反应，可以快速、准确地对 RNA 病毒等微量 RNA 进行分析。 2. PCR 用 DNA 聚合酶使用了 TaKaRa Ex Taq HS ， 可以 进行 Hot Start 法 PCR 反应， 再与 Takara 公司 独自开发的 Buffer 系统相结合 ，具有高扩增效率，高扩增灵敏度之特点。 3. One Step RT-PCR Buffer III 是一种 2 浓 度的 Premix Type 试剂，操作简单，能有效避免污染。 使用注意 以下为使用本试剂盒时的

12、注意事项，使用前请一定认真阅读。 1 ） 当同时需要进行数次 Real Time One Step RT-PCR 反应时 ，应先配制各种试剂的混合液（Master Mix ；其中包括 RNase Free dH2O 、Buffer 、各种酶等） ，然后再分装到每个反应管中。这样，可使 所取的试剂体积更准确 ，减少 试剂损失，避免重复分 取同一 试剂。同时也可以减少 实验操 作或实验 样品之间产生的误差。 2 ） 使用 TaKaRa Ex TaqHS 、PrimeScript RT Enzyme Mix 时 ，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要 小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有 50

13、%的 甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。 3 ） 2 One Step RT-PCR Buffer 融解后如有不溶物请充分混合。 配制 Real Time One Step RT-PCR 反应液时应避免强光照射。 4 ） 反应液的配制、分装请一定使用新的（无污染的）枪头、Microtube 等，尽量避免污染。 5 ） 本制品只能使用特异性反转录引物，不能使用 Random Primer 和 Oligo dT Primer 等进行 反转录反 应。 -3- 操作方法 应 用 Smart Cycler System Real Time PCR 扩增仪 的操 作方法 1 ）按下列组份配制 RT-PCR

14、反应液（反应液配制请在冰上进行） 。 试剂 使用量 终浓度 2 One Step RT-PCR Buffer 12.5 l 1 TaKaRa Ex Taq HS （5 U/ l ） 0.5 l PrimeScript RT Enzyme Mix 0.5 l PCR Forward Primer（10 M ） 0.5 l 0.2 M*1 PCR Reverse Primer （10 M ） 0.5 l 0.2 M*1 TaqMan Probe 1 l*2 Total RNA 2 l*3 RNase Free dH2O 7.5 l Total 25 l *1 通常引物终浓度为 0.2 M 可以得到

15、较好结果。 反应性能较差时， 可以在 0.1 1.0 M 范围 内调整引物浓度。 *2 探针浓度与所使用的 Real Time PCR 扩增仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，使用时 请参考仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行。使用 Smart Cycler System 时， 通常探针终浓度在 0.1 0.5 M 范围内进行调整。 *3 建议使用 total RNA 模板的 量为 10 pg-100 ng。 2 ）进行 Real Time One Step RT-PCR 反应。 PCR 反应管请用离心机轻轻离心后放入 Smart Cycler System 中进行 Real Time

16、PCR 反应。建议采 用下列图表显示的 PCR 反应 程序，如果使用该程序得不到良好的实验结果时，再进行 PCR 条件的优 化。 使用 Tm 值较低的引物或两步法 PCR 反应扩增性能较差时， 可以尝试进行三步法 PCR 扩增反应。 有关 PCR 的具体反应条件请参照PCR 反应条件说明 。 Stage 1：反转录反应 Hold 42 5 min 95 10 sec Stage 2：PCR 反应 Repeat ：40 times 95 5 sec 60 20 sec 特别提示： 本制品中使用的 TaKaRa Ex Taq HS 是利用抗 Taq 抗 体的 Hot Start 用 DNA 聚合酶

17、，与其 他公司的化 学修饰型 Hot Start 用 DNA 聚 合酶相比，不需要 PCR 反应前的 95、5 15 分钟的酶的活 性化反应。 如果高 温处 理时 间过 长， 会使 酶的活 性下 降，其 PCR 的 扩 增效率 、定 量精 度等 都会 受到 影响。PCR 反应前的反转录酶的热变性失活通常设定为 95、10 sec 。 3 ）实验结果分析。 反应结束后确认 Real Time One Step RT-PCR 的扩增曲线， 进行 RT-PCR 定量时制作标准曲线等。 分 析方法参见仪器的操作手册。 -4- 应用 ABI PRISM 7000/7700 ，Applied Biosys

18、tem 7300/7500 Real-Time PCR System 的 操作 方法 1 ）按下列组份配制 RT-PCR 反应液（反应液配制请在冰上进行） 。 试剂 使用量 使用量 终浓度 2 One Step RT-PCR Buffer 10 l 25 l 1 TaKaRa Ex Taq HS （5 U/ l ） 0.4 l 1 l PrimeScript RT Enzyme Mix 0.4 l 1 l PCR Forward Primer （10 M ） 0.4 l 1 l 0.2 M*1 PCR Reverse Primer （10 M ） 0.4 l 1 l 0.2 M*1 TaqMa

19、n Probe 0.8 l 2 l*2 ROX Reference Dye or Dye （50）*3 0.4 l 1 l Total RNA 2 l 4 l*4 RNase Free dH2O 5.2 l 14 l Total 20 l*5 50 l*5 *1 通常引物终浓度为 0.2 M 可 以得到较好结果。反应性能较差时，可以在 0.1 1.0 M 范围 内调整引物浓度。 *2 探针浓度与所使用的 Real Time PCR 扩增仪、 探针种类、 荧光标记物质种类有关， 实际使用 时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行。 *3 用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。7500

20、Real-Time PCR System 使用 ROX Reference Dye II （50 ）。 ABI PRISM 7000/7700 及 Applied Biosystem 7300 Real-Time PCR System 使用 ROX Reference Dye（50 ）。 *4 建议在 20 l 反应液中使 用 10 pg100 ng 的 Total RNA 为模 板。 *5 根据仪器推荐反应体系进 行调整。 2 ）进行 Real Time One Step RT-PCR 反应。 建议采用下列图表显示的标准 PCR 反应程序， 如果使用该程序得不到良好的实验结果时， 再进行 P

21、CR 条件的优化。使用 Tm 值较低 的引物或两步法 PCR 反应扩 增性能较差时，可以尝试进行三步法 PCR 扩增反应。有关 PCR 的具体反应条件请参照PCR 反应条件说明 。 Stage 1、2 ：反转录反应 Reps ：1 42 5 min 95 10 sec Stage 3：PCR 反应 Reps ：40 95 5 sec 60 3034 sec* * 使用 7700 时请设定为 30 秒 ；使用 7000 和 7300 时请设定 为 31 秒；使用 7500 时请设定 为 34 秒。 特别提示： 本制品中使用的 TaKaRa Ex Taq HS 是利用抗 Taq 抗 体的 Hot

22、Start 用 DNA 聚合酶，与其 他公司的化学 修饰型 Hot Start 用 DNA 聚合 酶相比， 不需要 PCR 反应前的 95、 5 15 分钟的酶的活 性化反应。 如果 高温处理时间过长， 会使酶的活性下降， 其 PCR 的扩增效率、 定量精度等都会受到影响。PCR 反应前的 反转录酶的热变性失活通常设定为 95、10 sec 。 3 ）实验结果分析。 反应结束后确认 Real Time One Step RT-PCR 的扩增曲线， 进行 RT-PCR 定量时制作标准曲线等。 分 析方法参见仪器的操作手册。 -5- 应 用 LightCycler Real Time PCR 扩

23、增仪的 操作 方法 请按照 LightCycler （Roche Diagnostics 公司）的使用说明 书要求进行实验操作。 1 ） 按下列组份配制 RT-PCR 反应液（反应液配制请在冰上进行） 。 试剂 使用量 终浓度 2 One Step RT-PCR Buffer 10 l 1 TaKaRa Ex Taq HS （5 U/ l ） 0.4 l PrimeScriptRT Enzyme Mix 0.4 l PCR Forward Primer （10 M ） 0.4 l 0.2 M*1 PCR Reverse Primer （10 M ） 0.4 l 0.2 M*1 TaqMan P

24、robe 0.8 l*2 Total RNA 2 l*3 RNase Free dH2O 5.6 l Total 20 l *1 通常引物终浓度为 0.2 M 可以得到较好结果。 反应性能较差时， 可以在 0.1 1.0 M 范围内调整引物浓度。 *2 探针浓度与使用的 Real Time PCR 扩增仪、探针种类、荧光标记物质种类有关， 实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行。 *3 建议使用 10 pg100 ng 的 Total RNA 为模板。 2 ）进行 Real Time One Step RT-PCR 反应。 PCR 反应用毛细管请用离心机轻轻离心后放入 Li

25、ghtCycler 中进行 Real Time PCR 反应。 建议采用下 列图表显示的 PCR 反应程序 ，如果使用该程序得不到良好的实验结果时，再进行 PCR 条件的优化。 使用 Tm 值较低的引物或两步法 PCR 反应扩增性能较差时，可以尝试进行三步法 PCR 扩增反应。有 关 PCR 的具体反应条件请参照PCR 反应条件说明 。 Stage 1：反转录反应 42 5 min 20 / sec 95 10 sec 20 / sec 1 Cycle Stage 2：PCR 反应 95 5 sec 20 / sec 60 20 sec 20 / sec 40 Cycles 特别提示： 本制品

26、中使用的 TaKaRa Ex Taq HS 是利用抗 Taq 抗 体的 Hot Start 用 DNA 聚合酶，与其 他公司的化 学修饰型 Hot Start 用 DNA 聚 合酶相比，不需要 PCR 反应前的 95、5 15 分钟的酶的活 性化反应。 如果高 温处 理时 间过 长， 会使 酶的活 性下 降，其 PCR 的 扩 增效率 、定 量精 度等 都会 受到 影响。PCR 反应前的反转录酶的热变性失活通常设定为 95、10 sec 。 3 ）实验结果分析。 反应结束后确认 Real Time One Step RT-PCR 的扩增曲线， 进行 RT-PCR 定量时制作标准曲线等。 分 析

27、方法参见仪器的操作手册。 -6- 应 用 Thermal Cycler Dice Real Time System II 和 Lite 扩增仪 的操 作方法 1 ）按下列组份配制 RT-PCR 反应液（反应液配制请在冰上进行） 。 试剂 使用量 终浓度 2 One Step RT-PCR Buffer 12.5 l 1 TaKaRa Ex Taq HS （5 U/ l ） 0.5 l PrimeScript RT Enzyme Mix 0.5 l PCR Forward Primer（10 M ） 0.5 l 0.2 M*1 PCR Reverse Primer（10 M ） 0.5 l 0.

28、2 M*1 TaqMan Probe 1 l*2 Total RNA 2 l*3 RNase Free dH2O 7.5 l Total 25 l *1 通常引物终浓度为 0.2 M 可以得到较好结果。 反应性能较差时， 可以在 0.1 1.0 M 范围内调整引物浓度。 *2 使用的探针浓度，与使用 的 Real Time PCR 扩增仪、探针种类、荧光标记物质种 类有关，实际使用时请参照仪 器说明书，或各荧光探针的具 体使用要求进行。应 用 Thermal Cycler Dice Real Time System 时，通常探针终 浓度在 0.1 0.5 M 范围内进行调整。 *3 建议使用

29、10 pg100 ng 的 Total RNA 为模板。 2 ）进行 Real Time One Step RT-PCR 反应。 PCR 反应管请用离心机轻轻离心后放入 Thermal Cycler Dice Real Time System 中进行 Real Time PCR 反应。 建议采用下列图表显示的 PCR 反应程序， 如果使用该程序得不到良好的实验结果时， 再 进行 PCR 条件的优化。由于使用 Tm 值较低的引物等原因，两步法 PCR 反应扩增性能较差时，可 以尝试进行三步法 PCR 扩增反应。有关 PCR 的具体反应条件请参照PCR 反应条件说明 。 Pattern 1：反转录

30、反应 Hold 42 5 min 95 10 sec Pattern 2：PCR 反应 Cycle ：40 95 5 sec 60 30 sec 特别提示： 本制品中使用的 TaKaRa Ex Taq HS 是利用抗 Taq 抗 体的 Hot Start 用 DNA 聚合酶，与其 他公司 的化学修饰型 Hot Start 用 DNA 聚合酶相比， 不需要 PCR 反 应前的 95、 5 15 分钟的酶 的活性 化反应。 如果高温处理时间过长， 会使酶的活性下降， 其 PCR 的扩增效率、 定量精度等都会受到 影响。PCR 反应前的反转录酶的热变性失活通常设定为 95、10 sec 。 3 ）实

31、验结果分析。 反应结束后确认 Real Time One Step RT-PCR 的扩增曲线， 进行 RT-PCR 定量时制作标准曲线等。 分析方法参见仪器的操作手册。 -7- PCR 反 应条件 说明 【两步法 PCR 】 循环数：30-45 Cycles * 使用 Life Technologies 公司 Real Time PCR 扩增仪时必须根据仪器型号设定不同时间。 7700 设 定为 30 秒或更长；7000 和 7300 设 定为 31 秒或更长；7500 设 定为 34 秒或更长 。 实验例 1. 以 Mouse Liver 中提取的 Total RNA 1 pg100 ng

32、为模板 ， 灭菌水替代模板作为阴性对照反应， 使用 Thermal Cycler Dice Real Time System 进行 Real Time One Step RT-PCR 反应，使用 TaqMan Gene Expression Assays（Life Technologies 公司）的引物和 TaqMan 探针。 2. 结果。 扩增曲线图 标准曲 线图 2nd derivative 图 标准 曲线图 3. 结果分析。 使用 1 pg100 ng 的 Total RNA 能很好地检出目的基因，制作的标准曲线线性关系良好，可以在实验 浓度范围内进行准确定量。 -8- S tep 温度

33、 时间 检测 说明 变性 95 35秒 OFF Real Time PCR扩增片段通常在300 bp 以下，只需进行95、35秒的变性设置2030秒 （30、31、34秒）* 首先按照各仪器说明书推荐条件进行反应。 反应条件可以在5664范围内进行调 整。反应性能较差时，可以适当增加这一步 的反应时间。 ON 5664 退火/延伸 附 录 RNA 样品制备 本试剂盒是将 RNA 合成 cDNA ，然后再对此 cDNA 进行扩增的试剂盒。RNA 的纯度会影响 cDNA 的合 成量， 而制备 RNA 的关键是要 抑制细胞中的 RNA 分解酶和防 止所用器具及试剂中的 RNA 分 解酶的污染。 因此

34、， 在实验中必须采取以下措施： 戴一次性干净手套； 使 用 RNA 操作专用实验台； 在操作过程中避免 讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的 RNA 分解酶的污染。 【使用器具】 尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。 （1 ） 干热灭菌（180 ，60 min ） 。 （2 ） 用 0.1% DEPC 水溶液 在 37 下处理 12 小时，然后在 120 下高压灭菌 30 分钟以除去残留 的 DEPC 。 * RNA 实验用的器具建议专 门使用，不要用于其它实验。 【试剂配制】 用于 RNA 实验的试剂， 须使用干热灭菌 （180，60 min）

35、 或 用上述方法进行 DEPC 水处理灭菌后的玻 璃容器盛装 （也可使用 RNA 实验用的一次性塑料容器） ， 使用的无菌水须用 0.1%的 DEPC 处理后进行高 温高压灭菌。RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。 【制备方法】 建议使用 GTC 法（异硫氰酸胍法）制备的高纯度 RNA 。 关联产品 One-Step SYBR PrimeScript RT-PCR Kit II (Perfect Real Time) (Code No.RR086A/B) SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR820A/B)

36、SYBR Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No.RR420A/B) Premix Ex Taq (Probe qPCR) (Code No.RR390A/B) Thermal Cycler Dice Real Time System II（Code No.TP900/TP960） Thermal Cycler Dice Real Time System Lite （Code No.TP700/TP760） NOTICE TO PURCHASER: LIMITED LICENSE P7 PCR Notice A license to perform t

37、he patented 5 Nuclease Process for research is obtained by the purchase of (i) both Authorized 5 Nuclease Core Kit and Licensed Probe, (ii) a Licensed 5 Nuclease Kit, or (iii) license rights from Applied Biosystems. This product is an Authorized 5 Nuclease Core Kit. Use of this product is covered by

38、 one or more of the following US patents and corresponding patent claims outside the US: 5,789,224, 5,618,711, 6,127,155, 5,677,152 and 5,773,258. The purchase of this product includes a limited, non-transferable immunity from suit under the foregoing patent claims for using only this amount of prod

39、uct for the purchasers own internal research. Separate purchase of a Licensed Probe would convey rights under the applicable claims of US Patents Nos. 5,538,848, 5,723,591, 5,876,930, 6,030,787, 6,258,569 and 5,804,375 (claims 1-12 only) and corresponding claims outside the United States. No right u

40、nder any other patent claim and no right to perform commercial services of any kind, including without limitation reporting the results of purchasers activities for a fee or other commercial consideration, is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. This product is for research use only.

41、Diagnostic uses under Roche patents require a separate license from Roche. Further information on purchasing licenses may be obtained from the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA. -9- L1 One Step RNA PCR/ One Step RT-PCR Use of this

42、 product is licensed from bioMerieux, is covered by US Patent 5,817,465 and equivalents, and is for Research Use Only. L15 Hot Start PCR Licensed under U.S. Patent No. 5,338,671 and 5,587,287 and corresponding patents in other countries. L52 Rox Reference Dye (Research Field) Use of this product is

43、covered by one or more of the following US patents and corresponding patent claims outside the US: 5,928,907. The purchase of this product includes a limited, non-transferable immunity from suit under the foregoing patent claims for using only this amount of product for the purchasers own internal r

44、esearch. No right under any other patent claim and no right to perform commercial services of any kind, including without limitation reporting the results of purchasers activities for a fee or other commercial consideration, is conveyed expressly, by implication, or by estoppel. This product is for

45、research use only. Further information on purchasing licenses may be obtained by contacting the Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, USA. M57 LA Technology This product is covered by the claims 6-16 of U.S. Patent No. 5,436,149 and its f

46、oreign counterpart patent claims. -10- Note This product is for research use only. It is not intended for use in therapeutic or diagnostic procedures for humans or animals. Also, do not use this product as food, cosmetic, or household item, etc. Takara products may not be resold or transferred, modi

47、fied for resale or transfer, or used to manufacture commercial products without written approval from TAKARA BIO INC. If you require licenses for other use, please contact us by phone at +81 77 543 7247 or from our website at www.takara-. Your use of this product is also subject to compliance with a

48、ny applicable licensing requirements described on the product web page. It is your responsibility to review, understand and adhere to any restrictions imposed by such statements. All marks are the property of their respective owners. Certain trademarks may not be registered in all jurisdictions. 技术咨询热线： 0411-87641685 ，87641686 4006518761 ，4006518769 URL: http:/ v201305Da