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细胞周期和凋亡实验.doc

上传人:精品资料 文档编号:11014631 上传时间:2020-01-31 格式:DOC 页数:1 大小:16.73KB
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细胞周期实验(1)收集对数生长期细胞:弃除旧培养基,用PBS洗涤细胞加入适量胰酶进行消化。加入新鲜的培养基吹打细胞,并将细胞收集于标记好的对应离心管中,室温1000 rpm离心5 min,弃除上清液。(2)洗涤细胞:用预冷的PBS重悬上述细胞沉淀,室温1000 rpm 离心5 min,将上清液弃除。(3)固定细胞:将细胞用0.5 ml 预冷的PBS 溶液重悬,加入预冷的 70%乙醇溶液在4C固定过夜。(4)PI 染色细胞:加入10l RNase(10mg/ml) ,置37 、5% CO2、饱和湿度恒温培养箱孵育30min,运用冰浴终止RNase A 酶作用;再加入 10l溴化乙锭(PI,1mg/ml)染色,置37 、5% CO2、饱和湿度恒温培养箱孵育30min。(5)流式细胞仪检测,分析PI 荧光的直方图。细胞凋亡检测用 0.25%胰酶消化收集细胞,PBS 洗涤 2 次,加入 100l Binding Buffer 和10l FITC 标记的 Annexin-V(20ug/ml),室温避光 30min,再加入 PI(50g/ml)5l,避光反应 5min 后,加入 400l Binding Buffer。在 1h 内完成上机定量检测。

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