1、Trizol 说明书产品简介：本公司生产的 Trizol 试剂适用于从细胞或组织中分离总 RNA，结果产量高、完整性好、纯度高，省时、省力。提取的总 RNA 可用于 cDNA 合成、RT-PCR、Northern Blot、Dot blot、Primer Extension、Poly A RNA 筛选、体外翻译或其他基因工程用途。该试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种 RNA 的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的 RNA 琼脂糖凝胶电泳时，可见许多介于 7kb 和 15kb 之间不连续的高分子量条带，（mRNA 和 hnRNA 成分）两条优势核糖体 RNA 条带位于 5 kb (28S)和2 kb
2、 (18S)，28S 与 18S 电泳条带亮度比值约为 2：1 ，低分子量 RNA 介于 0.1 和 0.3 kb 之间(tRNA, 5S)。当抽提的 RNA 用 TE 稀释时其 A260/A280 比值1.8。TRizol 试剂保存于 4可达 12 个月。下图 从 K562 细胞总提取的总 RNA 电泳效果图下表 从组织和细胞中提取的总 RNA 量组织或细胞（mg、1106 ） 总 RNA 产量（ug）肝、脾 820肾 35骨骼肌、脑组织 15胎盘 15上皮细胞 820纤维母细胞 520试剂盒组成产品编号 131904 131905 保存条件Trizol 50ml 100ml 4说明书 1
3、份操作者提供及注意事项1、新的氯仿、异丙醇、70%酒精（0.1% DEPC-H2O 配制）、4 离心机（速度约12000rpm）2、 1.5ml 离心管，1ml 、200ul 、20ul 的吸头，需经过 0.1% DEPC-H2O 37处理过夜，高压消毒烤干待用；研磨器用水洗干净后，需要 180高温干烤 3 小时。3、在抽提 RNA 过程中任一环节的不正确操作都可能导致 RNA 酶的污染。由于 RNA酶的活性很难完全抑制，预防其污染十分必要。全程佩戴一次性手套、口罩。皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染 RNA 的抽提并成为 RNA 酶的来源。4、请勿接触皮肤或不慎吞服，会导致灼伤。一旦接触皮肤后
4、立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感不适，看医生并寻求正确的治疗方案。操作步骤1、根据样品的类型，在室温（冰浴更佳）下，选择下面合适的处理方法，样品的体积请勿超过加入 Trizol 的 10%，否则会引起裂解不充分，导致 DNA 污染 RNA。（1）组织匀浆或研磨 用匀浆器匀浆组织样品，每 50100mg 组织加 1ml Trizol。如果裂解物中，未研碎的组织过多，12000rpm 离心 3 分钟，再取上清继续操作后续步骤。（2）单层生长的贴壁细胞吸掉培养基，用无菌的 PBS 液或 Hanks 液轻轻冲洗后，弃掉上清，直接往培养瓶或培养板中加入 1ml Trizol，用移液器或滴管吹打均匀。根
5、据培养板的面积决定所需的 Trizol 的量，每 10cm2 加 1ml Trizol。（3）悬浮生长的细胞 离心收集细胞，弃掉培养基；用无菌的 1PBS 液或 Hanks 液洗涤一次，离心后弃掉上清，加入 1ml Trizol，用移液器吹打均匀。2、将裂解的样品在室温下孵育 5 分钟，使核蛋白体完全分离。3、 1 ml Trizol 加 0.2ml 氯仿，盖紧样品管盖，用力摇晃 15 秒，室温孵育 23 分钟。4、 4，12000rpm 离心 10 分钟，可见上层为无色透明液体，中间为一层薄薄的蛋白，下层为粉色液体。5、小心吸取上层无色透明液体到一个新的 1.5ml 离心管，加入 0.5ml
6、 异丙醇，轻轻上下颠倒混匀，室温孵育 10 分钟。6、 4，12000rpm 离心 10 分钟，可见一白色沉淀，即为 RNA，弃掉上清。7、加入 1ml 75%酒精，轻轻上下颠倒混匀， 4，9000rpm 离心 5 分钟，弃掉上清。8、室温干燥 510 分钟，加入 30100ul 的 0.1% DEPC-H2O，用移液器吹打均匀，-70保存。因 RNA 保存后，极容易降解，为了给后续实验带来不必要的麻烦，建议立即进行后续实验。常见问题分析1、抽提得率低（1）样品匀化或裂解不完全。减少样品的量或增加 Trizol 的量。（2）样品量太少。增加样品量。2、 A260/A280 比值1.65 （1）
7、样品匀浆化时所加的 Trizol 量太少。增加 Trizol 量。（2）加入 Trizol 后样品没有在室温下放置 5 分钟。增加此步骤。（3）吸取上层无色透明液体时，吸到了下层有机相。小心吸取，勿吸下层有机相。（4）自己配置的 DEPC-H2O 不合格。可选用我公司的 RNase-Free H2O。3、 RNA 降解 （1）从动物取下的组织没有立即进行抽提或冰冻保存。 （2）用于抽提的组织或 RNA 样品保存于-5-20 ，而不是存放于-70-80。（3）细胞经胰酶过度消化。（4）水溶液或试管污染有 RNA 酶。 （5）用于琼脂糖凝胶电泳的甲醛 pH 低于 3.5。4、 DNA 污染 （1）样品匀浆化时所加的 Trizol 量太少，裂解不完全。增加 Trizol 量。（2）用于抽提的样品包含有机溶剂（例如，乙醇，DMSO），强缓冲液，或碱性溶液。温馨提示：不可用于临床治疗。
